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题名苦楝SRAP-PCR反应体系的建立及优化
被引量：7
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作者
陈丽君
刘明骞
廖柏勇
邓小梅
陈晓阳
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机构
广东省森林植物种质创新与利用重点实验室/华南农业大学林学院
华南农业大学教学科研基地管理中心
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出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期104-108,共5页
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基金
广东省林业科技创新项目(2011KJCX002)
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文摘
【目的】应用SRAP技术对苦楝Melia azedarach遗传多样性、种质资源鉴定等开展研究，对苦楝SRAP-PCR体系中的模板DNA、dNTPs、Mg^2＋、引物和TaqDNA聚合酶5个组分浓度进行优化，建立适合苦楝的SRAP-PCR反应体系．【方法】采用单因素试验对反应体系中的5个因素分别设置8个浓度梯度水平，确定浓度范围后进行L16（4^5）正交试验设计，并对结果进行打分，确定优化体系．【结果和结论】SRAP对苦楝DNA浓度的要求不高，有一个较宽的浓度适宜范围；dNTPs在0．1～0．2mmol·L^-1范围内，能扩增出条带基本相同的清晰谱带；Mg^2＋为2．0mmol·L^-1左右时扩增条带较清晰且数量多；引物介于0．48～0．64μmol·L^-1均能扩增出带型基本保持一致且清晰的谱带；TaqDNA聚合酶在0．50～2．00U范围内可以得到清晰的带型．根据正交试验设计16个处理的得分，确定优化的反应体系为：模板DNA 30ng、dNTPs0．125mmol·L^-1、Mg^2＋ 2．25mmol·L^-1、引物0．48μmol·L^-1、TaqDNA聚合酶0．75U，反应总体积25μL．
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关键词
苦楝
SRAP-PCR
体系优化
正交试验设计
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Keywords
Melia azedarach
SRAP-PCR
optimization
orthogonal design
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分类号
S792.33
[农业科学—林木遗传育种]
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题名剑豆SRAP-PCR反应体系的建立及优化
被引量：1
- 2
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作者
刘明骞
陈丽君
欧阳昆唏
丁美美
陈晓阳
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机构
华南农业大学林学院/广东省森林植物种质创新与利用重点实验室
华南农业大学教学科研基地管理中心
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出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期75-78,共4页
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基金
广州市科技计划项目(2010Z1-E241)
农业部948项目(2011-Z50)
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文摘
【目的】建立和优化剑豆Canavalia ensiformis的SRAP-PCR体系,为分析剑豆遗传多样性和建立遗传图谱打下基础.【方法】首先用单因素试验法对SRAP-PCR反应体系的5个主要影响因素(Mg2+、d NTPs、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA)各设8个浓度梯度进行试验,找到5个因素的适宜浓度范围,再采用均匀设计法进行5因素4水平和5因素3水平的2轮优化.【结果和结论】建立了剑豆SRAP-PCR最佳反应体系(25μL):Mg2+1.75 mmol/L,d NTPs 200μmol/L,引物0.36μmol/L,Taq DNA聚合酶0.06 U/μL,模板DNA 40 ng.所建立的体系稳定可靠,适用于剑豆后续的SRAP分析.
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关键词
剑豆
SRAP-PCR
均匀设计
优化
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Keywords
Canavalia ensiformis
SRAP-PCR
uniform design
optimization
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分类号
S643.2
[农业科学—蔬菜学]
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