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基于非洲猪瘟病毒I177L和p72基因的双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法的建立
被引量：
8
1
作者
曾繁聪
姜含雨
+7 位作者
辛宁
柯骏鸿
罗瑞
何淑仪
张桂红
马春全
黄淑坚
陈耀
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期952-957,共6页
为建立一种可区分非洲猪瘟病毒(ASFV)野毒株和基因缺失疫苗株的荧光定量PCR方法,本研究根据ASFV HLJ/2018株(MK333180.1)I177L及p72基因序列,设计特异性引物及探针,经反应条件优化后建立一种双重Taq Man荧光定量PCR方法。绘制的标准曲...
为建立一种可区分非洲猪瘟病毒(ASFV)野毒株和基因缺失疫苗株的荧光定量PCR方法,本研究根据ASFV HLJ/2018株(MK333180.1)I177L及p72基因序列,设计特异性引物及探针,经反应条件优化后建立一种双重Taq Man荧光定量PCR方法。绘制的标准曲线结果显示,两个重组质粒标准品p18T-I177L和p18T-p72相关系数R^(2)均在0.99以上,扩增效率E为88%~90%。表明两个重组质粒标准品的拷贝数均与各自的Ct值有良好的线性关系。特异性试验结果显示,该方法仅特异性扩增ASFV I177L和p72基因,对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对p18T-I177L和p18T-p72质粒标准品的检测下限分别为4.63×10^(2)拷贝/μL和4.09×10^(2)拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数均小于1.4%,重复效果好。分别利用该方法与ASFV荧光定量PCR检测试剂盒检测57份猪鼻拭子核酸样品,结果显示该方法检测出47份阳性核酸,10份阴性核酸样品。ASFV荧光定量试剂盒检测出46份阳性核酸,11份阴性核酸样品。二者的总符合率达94.7%,且二者的Kappa=0.825>0.75,P=1>0.05,表明两种方法无统计学差异且一致性良好。本研究建立的双重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于ASFV的检测、鉴别检测和流行病学的调查研究。
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关键词
非洲猪瘟病毒
双重荧光定量PCR
检测方法
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职称材料
影响非洲猪瘟病毒对培养细胞感染性的因素分析
2
作者
冯永智
龚婷
+4 位作者
吴东东
高琦
郑晓宇
张桂红
孙彦阔
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第8期3406-3414,共9页
猪原代肺泡巨噬细胞(PAMs)是非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要靶细胞,除宿主单核/巨噬细胞外,ASFV难以在其他体外细胞系中持续生长繁殖。本研究旨在研究影响ASFV在体外感染能力的因素。通过比较ASFV接种易感细胞PAMs和非易感细胞系3D4/21、PK1...
猪原代肺泡巨噬细胞(PAMs)是非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要靶细胞,除宿主单核/巨噬细胞外,ASFV难以在其他体外细胞系中持续生长繁殖。本研究旨在研究影响ASFV在体外感染能力的因素。通过比较ASFV接种易感细胞PAMs和非易感细胞系3D4/21、PK15细胞的全基因组转录谱差异;使用小分子药物改变细胞代谢或周期、物理方法改变细胞黏附;通过荧光定量PCR、Western blot、红细胞吸附检测病毒在3D4/21和PK15细胞系中的增殖情况。结果表明:ASFV接种3D4/21和PK15两种细胞与PAMs细胞的共同差异基因显著富集在细胞黏附、细胞周期和细胞代谢等方面;使用多种调控细胞周期、细胞代谢的小分子药物处理细胞后对ASFV感染PK15和3D4/21细胞的能力无显著影响;通过悬浮培养来调节细胞的黏附后,显著提高ASFV感染PK15和3D4/21细胞的能力,但随着传代次数的增加,病毒的复制能力逐渐下降。综上所述,细胞黏附可能是影响ASFV体外感染能力的重要因素之一,但是改变细胞黏附后并不能维持ASFV的复制能力。本研究为ASFV体外细胞系的建立提供了初步参考。
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关键词
非洲猪瘟病毒
全基因组转录谱
悬浮培养
体外感染细胞系
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职称材料
题名
基于非洲猪瘟病毒I177L和p72基因的双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法的建立
被引量：
8
1
作者
曾繁聪
姜含雨
辛宁
柯骏鸿
罗瑞
何淑仪
张桂红
马春全
黄淑坚
陈耀
机构
佛山科学技术
学院
生命科学与工程
学院
佛山国康检测技术有限公司
华南农业大学
兽医
学院
国家
非洲
猪瘟
区域
实验室
(
广州
)
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期952-957,共6页
基金
广东省重点领域研发计划资助项目(2019B020211003)
佛山科学技术学院横向课题(KH22001)。
文摘
为建立一种可区分非洲猪瘟病毒(ASFV)野毒株和基因缺失疫苗株的荧光定量PCR方法,本研究根据ASFV HLJ/2018株(MK333180.1)I177L及p72基因序列,设计特异性引物及探针,经反应条件优化后建立一种双重Taq Man荧光定量PCR方法。绘制的标准曲线结果显示,两个重组质粒标准品p18T-I177L和p18T-p72相关系数R^(2)均在0.99以上,扩增效率E为88%~90%。表明两个重组质粒标准品的拷贝数均与各自的Ct值有良好的线性关系。特异性试验结果显示,该方法仅特异性扩增ASFV I177L和p72基因,对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对p18T-I177L和p18T-p72质粒标准品的检测下限分别为4.63×10^(2)拷贝/μL和4.09×10^(2)拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数均小于1.4%,重复效果好。分别利用该方法与ASFV荧光定量PCR检测试剂盒检测57份猪鼻拭子核酸样品,结果显示该方法检测出47份阳性核酸,10份阴性核酸样品。ASFV荧光定量试剂盒检测出46份阳性核酸,11份阴性核酸样品。二者的总符合率达94.7%,且二者的Kappa=0.825>0.75,P=1>0.05,表明两种方法无统计学差异且一致性良好。本研究建立的双重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于ASFV的检测、鉴别检测和流行病学的调查研究。
关键词
非洲猪瘟病毒
双重荧光定量PCR
检测方法
Keywords
African swine fever virus
duplex Taq Man real-time PCR
detection method
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
影响非洲猪瘟病毒对培养细胞感染性的因素分析
2
作者
冯永智
龚婷
吴东东
高琦
郑晓宇
张桂红
孙彦阔
机构
华南农业大学
兽医
学院
国家
非洲
猪瘟
区域
实验室
(
广州
)
广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点
实验室
岭南现代
农业
科学与技术广东省
实验室
茂名分中心
农业
农村部人畜共患病重点
实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第8期3406-3414,共9页
基金
“十四五”国家重点研发计划项目(2021YFD1800100)
广州市基础与应用基础研究项目(202201010490)
财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系、茂名实验室科研启动项目(2021TDQD002)。
文摘
猪原代肺泡巨噬细胞(PAMs)是非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要靶细胞,除宿主单核/巨噬细胞外,ASFV难以在其他体外细胞系中持续生长繁殖。本研究旨在研究影响ASFV在体外感染能力的因素。通过比较ASFV接种易感细胞PAMs和非易感细胞系3D4/21、PK15细胞的全基因组转录谱差异;使用小分子药物改变细胞代谢或周期、物理方法改变细胞黏附;通过荧光定量PCR、Western blot、红细胞吸附检测病毒在3D4/21和PK15细胞系中的增殖情况。结果表明:ASFV接种3D4/21和PK15两种细胞与PAMs细胞的共同差异基因显著富集在细胞黏附、细胞周期和细胞代谢等方面;使用多种调控细胞周期、细胞代谢的小分子药物处理细胞后对ASFV感染PK15和3D4/21细胞的能力无显著影响;通过悬浮培养来调节细胞的黏附后,显著提高ASFV感染PK15和3D4/21细胞的能力,但随着传代次数的增加,病毒的复制能力逐渐下降。综上所述,细胞黏附可能是影响ASFV体外感染能力的重要因素之一,但是改变细胞黏附后并不能维持ASFV的复制能力。本研究为ASFV体外细胞系的建立提供了初步参考。
关键词
非洲猪瘟病毒
全基因组转录谱
悬浮培养
体外感染细胞系
Keywords
African swine fever virus
genome-wide transcriptional profiling
suspension culture
in vitro infected cell line
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于非洲猪瘟病毒I177L和p72基因的双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法的建立
曾繁聪
姜含雨
辛宁
柯骏鸿
罗瑞
何淑仪
张桂红
马春全
黄淑坚
陈耀
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
影响非洲猪瘟病毒对培养细胞感染性的因素分析
冯永智
龚婷
吴东东
高琦
郑晓宇
张桂红
孙彦阔
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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