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种禽场A亚群禽白血病病原学调查及分离株遗传进化分析 被引量：11
1
作者 冯敏 谭利强 +5 位作者 代曼曼 郝建勇 秦建如 黄小容 廖明 曹伟胜 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期11-15,共5页
【目的】了解广东地区种禽场A亚群禽白血病病毒(ALV-A)流行情况.【方法】从A、B、C、D 4个种禽场采集1 561份血浆样品,接种DF-1细胞,培养7 d后通过ELISA方法对细胞上清液进行p27抗原检测,通过PCR、间接免疫荧光试验2种方法对p27抗原阳... 【目的】了解广东地区种禽场A亚群禽白血病病毒(ALV-A)流行情况.【方法】从A、B、C、D 4个种禽场采集1 561份血浆样品,接种DF-1细胞,培养7 d后通过ELISA方法对细胞上清液进行p27抗原检测,通过PCR、间接免疫荧光试验2种方法对p27抗原阳性样品进行鉴定.【结果和结论】从4个种禽场共检出71份阳性样品,外源性禽白血病病毒分离阳性率为4.6%.其中,仅从C种禽场分离到2株ALV-A,命名为GD13-1和GD13-2,前病毒全基因序列分别为7 721和7 715 bp,且GD13-2与J亚群禽白血病病毒混合感染.与国内外其他ALV-A的LTR、gp85核苷酸序列进行分析比对,发现该研究分离的2株ALV-A与国内A亚群分离株SDAU09E2相似度最高,其中与LTR相似性分别为96.9%、97.2%,与gp85相似性分别为98.4%、98.7%;与广东地区5年前ALV-A分离株GD08的LTR核苷酸序列相似性分别为88.9%、89.5%,与gp85相似性分别为98.5%、98.8%.调查结果表明,广东地区部分种禽场内仍然存在ALV-A感染,但ALV-A已经不是流行毒株,且变异程度不大. 展开更多
关键词 种禽场 A亚群禽白血病病毒 前病毒全基因组序列
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不同样品对黄羽种鸡禽白血病病毒净化检测效果的影响 被引量：7
2
作者 郝建勇 秦建如 +4 位作者 邱倩倩 袁丽霞 饶明章 廖明 曹伟胜 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期29-34,共6页
【目的】评估黄羽种鸡禽白血病的净化工作,比较源于同一鸡群不同样品对禽白血病病毒（ALV）检测结果的影响.【方法】采用ALV抗原ELISA方法对广东一黄羽种鸡场采集的2 691枚种蛋进行检测,根据检测结果采集其中70份不同S/P区间所对应的母... 【目的】评估黄羽种鸡禽白血病的净化工作,比较源于同一鸡群不同样品对禽白血病病毒（ALV）检测结果的影响.【方法】采用ALV抗原ELISA方法对广东一黄羽种鸡场采集的2 691枚种蛋进行检测,根据检测结果采集其中70份不同S/P区间所对应的母鸡抗凝血,分离血浆后分别同时接种于CEF和DF-1细胞,用病毒分离方法进行检测,并用PCR方法进行亚群鉴定.【结果和结论】从送检种蛋蛋清共检出ALV p27阳性样品243份,阳性率为9.03%（243/2 691）;蛋清不同ELISA S/P区间所对应的病毒分离情况分别为：蛋清ELISA S/P≥2.0的鸡只其血样CEF和DF-1细胞病毒分离率均为100%;1.5≤S/P〈2.0的鸡只病毒分离率均为88.9%;1.0≤S/P〈1.5的鸡只病毒分离率均为85.7%;0.2≤S/P〈1.0的鸡只病毒分离率分别为60%-75%（CEF）和40%-50%（DF-1）;0.1≤S/P〈0.2的鸡只病毒分离率为62.5%（CEF）和50%（DF-1）;S/P〈0.1的鸡只分别为27.2%（CEF）和9.1%（DF-1）的病毒分离率.PCR结果显示,所有7份CEF＋DF-1-的CEF培养物中有6份为内源性ALV-E.研究表明,在蛋清ELISA检测时,S/P越高的阳性蛋清样品其对应母鸡越可能是外源性ALV病毒血症阳性;有一定比例S/P较低的阳性蛋清样品是由对应母鸡体内的内源性ALV排毒所致;而净化初期少数蛋清S/P为阴性的蛋清,其对应母鸡仍可能检出外源性ALV,说明在黄羽种鸡外源性ALV净化方案中单独使用1次蛋清ELISA检测可能会给禽白血病的净化检测造成一定的“误诊”和“漏检”. 展开更多
关键词 黄羽种鸡 禽白血病病毒 病毒检测 净化
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猪流行性腹泻病毒GD-A株的分离鉴定及S基因序列分析 被引量：6
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作者 朱俊 高又文 +3 位作者 张杰 叶昱 廖明 樊惠英 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期21-25,共5页
【目的】在广东省某疑似发生猪流行性腹泻的猪场中,采集病猪的粪便样品,经RT-PCR检测阳性的样品接种于Vero细胞,以分离猪流行性腹泻病毒.【方法】通过在细胞上的连续传代,直至能稳定增殖.并通过RT-PCR对细胞培养物进行特异性片段的检测... 【目的】在广东省某疑似发生猪流行性腹泻的猪场中,采集病猪的粪便样品,经RT-PCR检测阳性的样品接种于Vero细胞,以分离猪流行性腹泻病毒.【方法】通过在细胞上的连续传代,直至能稳定增殖.并通过RT-PCR对细胞培养物进行特异性片段的检测,观察细胞病变(CPE)的发生情况,以及间接免疫荧光(IFA)检测猪流行性腹泻病毒的M蛋白,对病毒进行分离与鉴定.【结果和结论】病毒在盲传5代时能观察到典型病变,传至20代时能在Vero细胞上增殖稳定.RT-PCR、CPE与IFA的结果证明,所分离到的病毒为PEDV,并命名为GD-A株. 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 分离 鉴定 M蛋白 S基因 间接免疫荧光 细胞传代培养
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