FUNDC1蛋白酪氨酸磷酸化位点突变质粒对心肌H9c2细胞线粒体自噬的影响

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作者 张朝阳 于艳丽 +2 位作者 武杰芸 田炜 徐菁蔓 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第7期629-636,共8页

目的本研究采用定点突变的方法构建FUN14域蛋白1(FUNDC1)Y11和Y18酪氨酸位点突变质粒,探究FUNDC1蛋白酪氨酸磷酸化位点突变质粒对心肌H9c2细胞线粒体自噬的影响。方法将使用全基因合成方法构建的突变质粒转染大鼠心肌H9c2细胞,实验分成... 目的本研究采用定点突变的方法构建FUN14域蛋白1(FUNDC1)Y11和Y18酪氨酸位点突变质粒,探究FUNDC1蛋白酪氨酸磷酸化位点突变质粒对心肌H9c2细胞线粒体自噬的影响。方法将使用全基因合成方法构建的突变质粒转染大鼠心肌H9c2细胞,实验分成空质粒组、FUNDC1过表达组、突变Y11组、突变Y18组和突变Y11联合Y18组五组。利用CCK-8法检测H9c2细胞活力;利用四甲基罗丹明乙酯(TMRE)检测线粒体膜电位;采用Western blot法检测细胞FUNDC1、线粒体转运孔蛋白20(TOM20)、内膜蛋白细胞色素C氧化酶Ⅳ亚型(COXⅣ)的蛋白表达水平;利用共聚焦显微镜确定转染效率以及线粒体、溶酶体共定位的情况。结果成功构建FUNDC1过表达、Y11、Y18、Y11联合Y18位点突变质粒;质粒转染细胞后共聚焦显微镜观察可见GFP荧光广泛表达。与空质粒组相比,FUNDC1过表达、Y11、Y18、Y11联合Y18组FUNDC1蛋白表达水平明显上升,细胞活力及线粒体膜电位无明显变化。与空质粒组相比,转染Y18、Y11联合18突变质粒的细胞TOM20、COXⅣ的表达水平上升,线粒体溶酶体共定位减少。结论转染FUNDC1 Y18或Y11联合Y18突变质粒,抑制心肌H9c2细胞的线粒体自噬。 展开更多

关键词 线粒体自噬 基因定点突变 FUNDC1 H9C2细胞

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盐地碱蓬多糖调控巨噬细胞极化缓解高脂饮食诱导非酒精脂肪肝小鼠肝损伤作用 被引量：1

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作者 秦思思 秦昌宇 +9 位作者 王永恒 宁嘉文 董子玉 吴磊 马小龙 曹福源 吴乃君 张溪桐 侯丽颖 李爽 《食品工业科技》 北大核心 2025年第13期348-358,共11页

目的:研究盐地碱蓬多糖调控巨噬细胞极化对高脂饮食诱导非酒精脂肪肝(Non-alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)小鼠肝损伤的缓解作用及机制。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为6组,分别为对照组(Control)、高脂饮食组(High Fat Diet,... 目的:研究盐地碱蓬多糖调控巨噬细胞极化对高脂饮食诱导非酒精脂肪肝(Non-alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)小鼠肝损伤的缓解作用及机制。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为6组,分别为对照组(Control)、高脂饮食组(High Fat Diet,HFD)、高脂饮食+低、中、高剂量(100、200、400 mg/kg盐地碱蓬多糖干预组(HFD+LSS组、HFD+MSS组和HFD+HSS组)和高脂饮食+阿托伐他汀干预组(HFD+Ato组)。除对照组饲喂小鼠正常维持饲料,其他组均喂食脂肪供能比为60%的高脂纯化饲料。阿托伐他汀干预组剂量为1 mg/kg,干预组均每日灌胃给药,连续干预12周。每周称量小鼠体重,12周后检测小鼠脏器指数、外周血及肝脏生化指标和组织病理学变化,蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)和实时荧光定量PCR(Realtime-PCR,qRT-PCR)方法检测肝脏巨噬细胞极化相关蛋白及其mRNA表达水平,ELISA及qRT-PCR方法检测炎症相关因子及其mRNA表达水平。结果:12周实验结束后,与HFD组相比,盐地碱蓬多糖低、中、高干预组小鼠体重及肝脏指数均极显著降低(P<0.01),其他脏器指数也出现不同程度降低。血清和肝脏总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)水平极显著降低(P<0.01)。此外,血清中低密度脂蛋白(Low-Density Lipoprotein,LDL)水平极显著降低(P<0.01),高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein,HDL)水平极显著升高(P<0.01),天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)水平极显著降低(P<0.01)。组织病理学观察显示肝脏脂肪蓄积减少,肝细胞脂肪变性减轻。盐地碱蓬多糖干预组小鼠肝脏M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric Oxide Synthase,iNOS)和分化群86(Cluster of Differentiation 86,CD86)的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),M2型巨噬细胞标志物分化群206(Cluster of Differentiation 206,CD206)和精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。同时,q RT-PCR检测的巨噬细胞极化标志物转录组水平与WB检测的蛋白表达水平趋势一致。盐地碱蓬多糖干预组血清肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素1β(Interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)水平极显著降低(P<0.01),白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)水平升高(P<0.01)。肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平极显著降低(P<0.01),IL-10的mRNA表达水平极显著升高(P<0.01)。结论:盐地碱蓬多糖能够降低高脂饮食诱导的肝脏脂肪蓄积及损伤,缓解NAFLD的发生发展,其作用机制可能与盐地碱蓬多糖调节巨噬细胞极化从而降低炎症水平有关。 展开更多

关键词 盐地碱蓬多糖 非酒精性脂肪肝 巨噬细胞极化 高脂饮食 炎症因子

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自发性2型糖尿病db/db小鼠肝病理损伤特点 被引量：4

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作者 康佳丽 梁伟时 +6 位作者 孟徐兵 张丹丹 高庆瑶 薛宁 韩淑英 王建行 曹福源 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第11期27-30,47,共5页

目的动态观察自发性2型糖尿病db/db小鼠肝产生的病理变化及特点,为将db/db小鼠肝作为2型糖尿病肝损伤模型的实验研究提供基础理论和实验依据。方法 7～8周龄,雄性,SPF级db/m小鼠作为对照组,糖尿病db/db小鼠作为模型组,各16只。动态观察... 目的动态观察自发性2型糖尿病db/db小鼠肝产生的病理变化及特点,为将db/db小鼠肝作为2型糖尿病肝损伤模型的实验研究提供基础理论和实验依据。方法 7～8周龄,雄性,SPF级db/m小鼠作为对照组,糖尿病db/db小鼠作为模型组,各16只。动态观察其体重、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性,计算肝指数,光镜与电镜下观察肝的病理学改变。结果 db/db小鼠空腹血糖、血清ALT、AST活性均明显高于db/m小鼠,组织学检查发现db/db小鼠肝在16周龄时就出现严重损害,主要表现为肝细胞脂肪变性、炎细胞浸润等;到32周龄时病变加剧,镜下可见肝组织内有大量的胶原纤维;电镜下可见线粒体、内质网等结构被破坏甚至消失,出现明显的脂滴、炎细胞,组织内含有大量的胶原纤维。结论 db/db小鼠16周龄时肝出现明显的脂肪变性以及炎细胞浸润等,32周龄时表现为明显的纤维化,因此db/db小鼠的肝可作为实验研究时良好的2型糖尿病肝损伤模型。 展开更多

关键词 2型糖尿病 DB/DB小鼠 肝损伤 电子显微镜

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小檗碱与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷单独及联合给药对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

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作者 贡美娜 高亚云 +3 位作者 张束滢 逄晓倩 田炜 徐菁蔓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2311-2318,共8页

目的 探讨小檗碱(berberine,BBR)与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷(5'-n-ethylformamidoadenosine,NECA)单独及联合给药对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2和HL-1细胞损伤的影响。方法 心肌H9c2和HL-1细胞分为Control组、BBR组、NECA组、... 目的 探讨小檗碱(berberine,BBR)与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷(5'-n-ethylformamidoadenosine,NECA)单独及联合给药对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2和HL-1细胞损伤的影响。方法 心肌H9c2和HL-1细胞分为Control组、BBR组、NECA组、联合给药组、H/R组、BBR+H/R组、NECA+H/R组、联合给药+H/R组,CCK-8检测细胞活力;TMRE检测MMP;DCFH-DA检测ROS的含量;Mito SOX Red探针检测线粒体超氧化物;Western blot检测COXⅣ、Tom20、Tim23蛋白表达;qRT-PCR检测COXⅣ、Tom20基因表达。结果 在H9c2细胞中,与Control组相比,H/R组细胞活力、TMRE荧光强度明显降低,COXⅣ、Tom20和Tim23蛋白表达、COXⅣ和Tom20基因表达、ROS和线粒体超氧化物的含量均明显升高。与H/R组相比,BBR和NECA单独给药后细胞活力均增强;单独给药及联合给药后,ROS和线粒体超氧化物的含量明显降低。在HL-1细胞中,与Control组相比,H/R组细胞活力明显降低;ROS和线粒体超氧化物的含量均明显升高。与H/R组相比,BBR和NECA单独给药及联合给药后,细胞活力均增强;ROS和线粒体超氧化物的含量均明显降低。结论 BBR和NECA单独给药及联合给药是通过减少线粒体超氧化物和细胞ROS的生成,进而缓解线粒体损伤,减轻氧化应激损伤,最终降低H/R诱发的心肌细胞损伤。 展开更多

关键词 心肌缺氧/复氧损伤 小檗碱 NECA 线粒体超氧化物 ROS 氧化应激

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猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定 被引量：3

5

作者 李爽 元娜 +4 位作者 张杏 张志刚 肖军 苏敬良 金忠辉 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期51-53,共3页

从河北廊坊养猪场采集有明显呼吸道症状的猪肺脏进行病原菌分离培养,通过对分离菌株进行形态观察、培养特性、16S r RNA测定,以及支气管败血波氏杆菌fla及Dnt基因PCR鉴定,确定成功分离鉴定到4株猪支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示... 从河北廊坊养猪场采集有明显呼吸道症状的猪肺脏进行病原菌分离培养,通过对分离菌株进行形态观察、培养特性、16S r RNA测定,以及支气管败血波氏杆菌fla及Dnt基因PCR鉴定,确定成功分离鉴定到4株猪支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,分离菌株对庆大霉素、替米考星、氟苯尼考、恩诺沙星及头孢吡肟高度敏感。对小鼠具有一定致病性。 展开更多

关键词 猪源支气管败血波氏杆菌 分离 鉴定 药敏试验

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寄生原虫端粒蛋白研究进展

6

作者 赵娜 张西臣 《动物医学进展》 北大核心 2016年第6期102-105,共4页

端粒蛋白是指那些直接或间接与端粒结合的蛋白组分。近年来寄生虫端粒蛋白研究引起了人们广泛的关注,为寄生虫病的研究提供了新的思路。端粒蛋白具有维持染色体稳定和细胞周期调控等多种功能,共同参与寄生虫生命周期的调节,同时也为寄... 端粒蛋白是指那些直接或间接与端粒结合的蛋白组分。近年来寄生虫端粒蛋白研究引起了人们广泛的关注,为寄生虫病的研究提供了新的思路。端粒蛋白具有维持染色体稳定和细胞周期调控等多种功能,共同参与寄生虫生命周期的调节,同时也为寄生虫病的预防和治疗开辟了新的途径。论文主要综述了包括TRFs、Rap1、TERT、RPA、Sir2和Orc1、Gbp、Ku、Rbp38以及LaTBP1等原虫端粒蛋白及其功能,以期为寻找新的防治寄生虫病的靶点提供借鉴。 展开更多

关键词 寄生虫 端粒结合蛋白 端粒相关蛋白

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基于二代高通量测序技术的新型冠状肺炎病毒S朊突变点分析 被引量：3

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作者 徐朋朋 李爽 +1 位作者 金德才 万云洋 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2021年第1期52-57,共6页

通过对美国华盛顿洲在2020年3至4月底爆发的新冠肺炎病人二代高通量测序数据分析,找出新冠病毒刺突糖蛋白(简称S朊)中存在的所有突变类型,为研究病毒在体内复制的突变规律及研究疫苗提供基础资料。利用NCBI中公布的130例美国华盛顿区报... 通过对美国华盛顿洲在2020年3至4月底爆发的新冠肺炎病人二代高通量测序数据分析,找出新冠病毒刺突糖蛋白(简称S朊)中存在的所有突变类型,为研究病毒在体内复制的突变规律及研究疫苗提供基础资料。利用NCBI中公布的130例美国华盛顿区报道的新冠肺炎病人二代高通量测序数据,进行序列组装,并对其朊编码基因进行深度突变分析,找出其潜在的疑似抗原变异位点(antigen variation,以下简称突变点)。排除30条未获全长的数据,共获得100份病人完整的SARS CoV 2序列,其S朊编码基因,主要突变点集中在S1区的SP区及受体结合区(RBD)之前的间隔区(突变区基本呈连续分布:126aa~153aa,194aa~204aa)和S2区的1250aa~1270aa区。100份样本的数据研究结果显示,新冠病毒S基因在病人体内复制过程中较为稳定,编码氨基酸的突变点(突变频率>15%)呈单样本散在分布,且S2区较S1区更为稳定。未在新冠病毒的RBD区找到突变率>20%的点,而S区散在零星突变区域主要集中在S1区间隔区(126aa~153aa,194aa~204aa处,且基本呈连续分布)和S2末端约20aa处。 展开更多

关键词 二代高通量测序 新型冠状肺炎病毒 新型冠状病毒肺炎 刺突糖朊 突变点

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断奶仔猪与外购仔猪的防护措施 被引量：1

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作者 董玉生 曹昌勤 +1 位作者 高超杰 陈松 《中国猪业》 2016年第12期57-58,共2页

2015年下半年至今,猪价一直保持高位,新进养猪户不断增加,仔猪供不应求。有些养殖户补栏比较盲目,忽视了补栏仔猪的防疫与护理措施,本文就补栏仔猪的防护措施进行介绍,旨在为新进养猪户提供技术指导。

关键词 断奶仔猪 外购仔猪 防护措施 免疫程序

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维生素E对大鼠肾缺血再灌注后心肌损伤的影响 被引量：7

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作者 弭小艺 岳清 +2 位作者 陈俊良 曹福源 张伟 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期65-71,共7页

目的 探讨维生素E(vitamin E,VE)对大鼠肾缺血再灌注(renal ischemia reperfusion,RIR)后心肌损伤的影响。方法 复制大鼠RIR模型,部分动物再灌注前4周灌胃给予VE 500 mg/kg/24 h,观察心肌组织丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、黄嘌呤氧... 目的 探讨维生素E(vitamin E,VE)对大鼠肾缺血再灌注(renal ischemia reperfusion,RIR)后心肌损伤的影响。方法 复制大鼠RIR模型,部分动物再灌注前4周灌胃给予VE 500 mg/kg/24 h,观察心肌组织丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、黄嘌呤氧化酶(XO)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和血浆肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的变化;测定平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、收缩期左室内压上升最大速率(dp/dt max)和舒张期左室内压下降最大速率(-dp/dt max);光镜、免疫组化观察心肌形态和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的表达。Western blot法检测心肌细胞P47phox蛋白表达。结果 大鼠RIR后,心肌组织MDA含量、MPO和XO活性及NO浓度增加而SOD活性减少,血浆CK、CK-MB升高,血流动力学指标下降,镜下心肌细胞水肿、e NOS阳性细胞数增加,p47phox蛋白表达增多;给予VE后,大鼠心肌组织中MDA含量、MPO和XO活性降低而SOD活性增加,血浆CK、CK-MB下降,血流动力学指标升高,NO浓度升高,镜下心肌损伤减轻,e NOS阳性细胞数增多,p47phox蛋白表达减少,差异均具有统计学意义。结论 VE可能通过抗炎、抗氧化、升高NO含量、减少P47phox表达等途径对RIR后的心肌发挥保护作用。 展开更多

关键词 维生素E 一氧化氮 再灌注损伤 心肌 P47phox 大鼠

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小鼠诺如病毒研究进展 被引量：3

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作者 赵娜 黄一鸣 +5 位作者 潘晶晶 雍慧 曹福源 张艳淑 姚林 李爽 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第12期69-71,共3页

小鼠诺如病毒（murine norovirus,MNV）是一种引起免疫缺陷小鼠脑炎、脑膜炎、肝炎、肠炎和肺炎的传染性病原,与人类诺如病毒密切相关[1]。2003年该病毒从转导蛋白和转录激活因子1（STAT-1）以及重组体激活基因2（RAG-2）缺陷（RAG-2-/-... 小鼠诺如病毒（murine norovirus,MNV）是一种引起免疫缺陷小鼠脑炎、脑膜炎、肝炎、肠炎和肺炎的传染性病原,与人类诺如病毒密切相关[1]。2003年该病毒从转导蛋白和转录激活因子1（STAT-1）以及重组体激活基因2（RAG-2）缺陷（RAG-2-/-/STAT-1-/-）小鼠中被首次发现[2],之后美国、加拿大、日本等国的实验小鼠体内均监测到该病毒, 展开更多

关键词 免疫缺陷小鼠 病毒 转录激活因子 传染性病原 实验小鼠 脑膜炎 重组体 加拿大

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雷帕霉素对大鼠肾缺血再灌注后心肌损伤的作用及机制研究 被引量：4

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作者 邓宇 李丽娜 +3 位作者 王鹏帆 张营帅 曹福源 张伟 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第4期40-45,共6页

目的探究雷帕霉素(rapaycin,RAPA)对大鼠肾缺血再灌注(renal ischemia reperfusion,RIR)后远隔器官心脏损伤的影响。方法40只大鼠随机平均分为四组:空白组、假手术组、RIR组和雷帕霉素处理组,每组10只。雷帕霉素处理组的大鼠接受雷帕霉... 目的探究雷帕霉素(rapaycin,RAPA)对大鼠肾缺血再灌注(renal ischemia reperfusion,RIR)后远隔器官心脏损伤的影响。方法40只大鼠随机平均分为四组:空白组、假手术组、RIR组和雷帕霉素处理组,每组10只。雷帕霉素处理组的大鼠接受雷帕霉素灌胃给药。术后24 h处死每组大鼠,收集血液,脾和心脏。测定血浆中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)的水平。用PAS染色半定量分析表示心脏病理损伤程度。TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况。流式细胞仪检测NKT细胞数量的百分比。RT-qPCR方法检测CXC趋化因子配体10(CXCL10)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factoR-1α,HIF-1α)mRNA和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达。结果RIR组血清BUN值和SCr值高于假手术组。雷帕霉素处理组血清CK值和CK-MB值水平低于模型组。心脏病理损伤的半定量评分表明,雷帕霉素处理组的病理损伤评分明显低于RIR组。雷帕霉素处理组心脏和外周血NKT细胞百分比明显高于RIR组。雷帕霉素处理组脾NKT细胞百分比低于RIR组。雷帕霉素处理组HIF-1αmRNA和VEGF mRNA的表达程度低于RIR组。雷帕霉素处理组CXCL10 mRNA的表达水平高于RIR组。结论RAPA可以显著上调CXCL10的表达水平,促进NKT细胞从脾到外周血在心脏中的集聚。RAPA还可以抑制HIF-1α表达水平从而对RIR后心脏发挥保护作用。 展开更多

关键词 肾缺血再灌注损伤 雷帕霉素 缺氧诱导因子-1Α CXC趋化因子配体10

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小鼠诺如病毒巢式PCR检测方法的建立及应用 被引量：1

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作者 赵娜 王丽媛 +5 位作者 赵歆伊 曹福源 陈松 张艳淑 姚林 李爽 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期102-104,共3页

为了建立一种高敏感性和特异性的检测方法,突破目前小鼠诺如病毒(MNV)检测局限,根据MNV保守区基因组序列设计合成内、外2对引物,通过PCR反应条件的优化,建立MNV的巢式PCR检测方法。结果表明,该方法仅能特异的扩增MNV目的基因而不能扩增... 为了建立一种高敏感性和特异性的检测方法,突破目前小鼠诺如病毒(MNV)检测局限,根据MNV保守区基因组序列设计合成内、外2对引物,通过PCR反应条件的优化,建立MNV的巢式PCR检测方法。结果表明,该方法仅能特异的扩增MNV目的基因而不能扩增其他病毒,且敏感度达到500个拷贝,比普通PCR提高1000倍。说明本研究建立的巢式PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速的用于小鼠诺如病毒的病原检测。 展开更多

关键词 小鼠诺如病毒 病毒RNA 巢式PCR 检测 特异性 感染率

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矿物质代谢障碍病的诊治及卫生保健

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作者 孙苗 赵丽群 《畜牧兽医科技信息》 2023年第4期53-56,共4页

在规模化养牛过程中,常常会因饲养管理不当或饲粮中营养搭配不合理导致牛矿物质缺乏或矿物质比例不当,进而引起矿物质代谢障碍病。矿物质代谢障碍病主要有骨营养不良和青草抽搐,骨营养不良是指牛的日粮中钙、磷缺乏或比例失调;青草抽搐... 在规模化养牛过程中,常常会因饲养管理不当或饲粮中营养搭配不合理导致牛矿物质缺乏或矿物质比例不当,进而引起矿物质代谢障碍病。矿物质代谢障碍病主要有骨营养不良和青草抽搐,骨营养不良是指牛的日粮中钙、磷缺乏或比例失调;青草抽搐指镁缺乏,不管牛发生骨营养不良还是青草抽搐都会使其行动异常,如果不采取有效的治疗措施,可能使牛失去经济价值而被淘汰。在饲养过程中要早发现早治疗,积极做好牛的卫生保健工作,以保证机体内矿物质水平含量正常,本文就牛骨营养不良和青草抽搐的发病原因、临床症状、诊断、治疗及卫生保健工作进行了介绍,供参考。 展开更多

关键词 矿物质代谢障碍病 诊治 卫生保健

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