鳖甲煎丸通过CMTM6抑制Hep3B细胞的恶性生物学行为

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作者 李尹凡 徐隽婕 +6 位作者 兰涛 李玉凤 李鑫 张荣花 黄金平 朱丽华 章广玲 《西安交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期522-531,共10页

目的探讨鳖甲煎丸(Biejiajian Pill,BJJP)对肝癌Hep3B细胞恶性生物学行为的作用及调控机制。方法将72只健康SD大鼠随机分为空白对照(BC)组、低剂量(0.55 g/kg)、中剂量(1.10 g/kg)、高剂量(2.20 g/kg)BJJP实验组,制备含药血清。将Hep3B... 目的探讨鳖甲煎丸(Biejiajian Pill,BJJP)对肝癌Hep3B细胞恶性生物学行为的作用及调控机制。方法将72只健康SD大鼠随机分为空白对照(BC)组、低剂量(0.55 g/kg)、中剂量(1.10 g/kg)、高剂量(2.20 g/kg)BJJP实验组,制备含药血清。将Hep3B细胞分为BC组、正常大鼠血清处理(NC)组、低剂量BJJP(LBJJP)组、中剂量BJJP(MBJJP)组、高剂量BJJP(HBJJP)组;空载质粒(pcDNA3.1)组和趋化素样因子超家族成员6(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 6,CMTM6)过表达(pcDNA3.1-CMTM6)组;以及NC+pcDNA3.1组、MBJJP+pcDNA3.1组、NC+pcDNA3.1-CMTM6组和MBJJP+pcDNA3.1-CMTM6组。CCK-8检测肝癌Hep3B细胞的增殖;Transwell实验检测肝癌Hep3B细胞的迁移和侵袭;Western blotting实验检测肝癌Hep3B细胞中增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)以及CMTM6蛋白的表达。结果与BC组相比,NC组Hep3B细胞增殖、迁移、侵袭能力以及PCNA、EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)、CMTM6蛋白的表达均无统计学差异(P>0.05)。与NC组相比,LBJJP、MBJJP和HBJJP含药血清均能抑制Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭数量,下调PCNA的蛋白表达,MBJJP和HBJJP均能上调E-cadherin的蛋白表达,下调N-cadherin、Vimentin和CMTM6的蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-CMTM6组Hep3B细胞增殖、迁移、侵袭受到抑制,E-cadherin的蛋白表达显著下调,而PCNA、N-cadherin和Vimentin蛋白表达显著上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与NC+pcDNA3.1组相比,MBJJP+pcDNA3.1组Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,PCNA、Vimentin和N-cadherin蛋白表达降低,而E-cadherin蛋白表达升高;与NC+pcDNA3.1-CMTM6组相比,MBJJP+pcDNA3.1-CMTM6组Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭能力及PCNA、Vimentin、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达得到了与上述相同的结果,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论BJJP可能通过调控CMTM6的表达抑制肝癌细胞Hep3B的增殖、迁移、侵袭及EMT等恶性生物学行为。 展开更多

关键词 鳖甲煎丸(BJJP) 肝细胞癌(HCC) 上皮-间充质转化(EMT) 趋化素样因子超家族成员6(CMTM6) 迁移 侵袭

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鳖甲煎丸对肝癌Huh7细胞恶性生物学行为的影响及机制研究

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作者 李以恒 徐隽婕 +5 位作者 兰涛 李鑫 张荣花 熊亚南 朱丽华 章广玲 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第7期44-54,共11页

目的本研究旨在阐明鳖甲煎丸(Biejiajian pill,BJJP)含药血清对肝癌Huh7细胞恶性生物行为的作用及机制。方法通过趋化素样因子超家族6的siRNA敲降细胞中CMTM6表达。利用健康SD大鼠制备正常大鼠血清以及低(0.55 g/kg)、中(1.1 g/kg)、高(... 目的本研究旨在阐明鳖甲煎丸(Biejiajian pill,BJJP)含药血清对肝癌Huh7细胞恶性生物行为的作用及机制。方法通过趋化素样因子超家族6的siRNA敲降细胞中CMTM6表达。利用健康SD大鼠制备正常大鼠血清以及低(0.55 g/kg)、中(1.1 g/kg)、高(2.2 g/kg)浓度的BJJP含药血清,对数生长期的肝癌Huh7细胞分别给予正常胎牛血清(BC)、正常大鼠血清(NC)培养及低、中、高剂量的BJJP含药血清(LBJJP、MBJJP和HBJJP)培养。BJJP含药血清和si-CMTM6分别作用于肝癌Huh7后,通过CCK-8法评估细胞的增殖能力、Transwell检测细胞的迁移与侵袭能力,利用Western blot检测增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、上皮-间质转化(EMT)关键标志物及CMTM6的蛋白表达。结果敲降CMTM6后,与阴性对照组(si-NC)相比,敲降CMTM6组(si-CMTM6)能够降低Huh7细胞中CMTM6 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。与BC组相比,NC组Huh7细胞的增殖、迁移、侵袭数量及PCNA、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和CMTM6蛋白表达水平均无明显差异(均P>0.05)。经BJJP含药血清处理后,Huh7细胞的增殖速率显著降低,迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);Western blot分析显示,与正常大鼠血清组相比BJJP含药血清处理组PCNA、CMTM6、N-cadherin及Vimentin蛋白表达量显著下调,而E-cadherin表达量显著上调(均P<0.05)。CMTM6敲降后,可有效抑制Huh7细胞的增殖、迁移、侵袭能力,同时伴随PCNA、Vimentin、N-cadherin蛋白下调及E-cadherin蛋白上调(均P<0.05)。结论BJJP含药血清可显著抑制Huh7肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT进程,且呈剂量依赖性;该作用可能与下调CMTM6蛋白表达有关。 展开更多

关键词 鳖甲煎丸 肝癌 增殖 迁移 侵袭 上皮-间充质转化 CMTM6

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鳖甲煎丸含药血清抑制胰腺癌AsPC-1细胞恶性生物学行为及机制研究

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作者 崔笑妍 李尹凡 +5 位作者 丁焕然 刘国荣 张荣花 于笑涵 王梅梅 章广玲 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第12期916-927,937,共13页

目的:探讨鳖甲煎丸(BJJP)含药血清对胰腺癌AsPC-1细胞恶性生物学行为的影响及其可能的分子机制。方法:采用72只健康Sprague-Dawley(SD)大鼠制备正常大鼠血清以及低(0.55 g/kg)、中(1.1 g/kg)、高(2.2 g/kg)剂量的鳖甲煎丸含药血清。将... 目的:探讨鳖甲煎丸(BJJP)含药血清对胰腺癌AsPC-1细胞恶性生物学行为的影响及其可能的分子机制。方法:采用72只健康Sprague-Dawley(SD)大鼠制备正常大鼠血清以及低(0.55 g/kg)、中(1.1 g/kg)、高(2.2 g/kg)剂量的鳖甲煎丸含药血清。将对数生长期的胰腺癌AsPC-1细胞分为空白对照组(BC)、正常大鼠血清处理组(NC)以及低、中、高剂量的鳖甲煎丸含药血清处理组(BJJP-L、BJJP-M、BJJP-H),各组用10%相应血清处理细胞48 h后进行后续实验。H&E染色评估鳖甲煎丸对健康SD大鼠肝脏、肾脏和心脏组织学变化的影响。CCK-8检测AsPC-1细胞增殖;集落形成实验检测AsPC-1细胞集落形成;TUNEL实验检测AsPC-1细胞凋亡;划痕实验检测AsPC-1细胞迁移;Transwell实验检测AsPC-1细胞迁移和侵袭;Western blot实验检测AsPC-1细胞中增殖相关蛋白(Ki-67、PCNA)、凋亡相关蛋白(Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-xl、Bcl-2)、上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白(p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT)的表达水平;免疫荧光实验检测AsPC-1细胞中EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的荧光强度。超高效液相色谱-串联静电场轨道阱质谱联用(UHPLC-MS/MS)技术检测鳖甲煎丸含药血清的入血成分。结果:H&E染色显示低、中、高剂量的鳖甲煎丸对健康SD大鼠的主要脏器无毒副作用。与NC组相比,低、中、高剂量的鳖甲煎丸含药血清组细胞的OD值、集落形成数量、划痕愈合率、迁移数量、侵袭数量、Ki-67、PCNA、Bcl-xl、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平以及N-cadherin和Vimentin荧光强度均显著降低;TUNEL凋亡率、Caspase 3、Caspase 9、Bax、E-cadherin蛋白表达水平及E-cadherin荧光强度均显著升高(P<0.05)。UHPLC-MS/MS检测结果显示鳖甲煎丸含药血清中共有67种入血原型成分,其中包括高熊果苷、槲皮素和苍术素等30种有效成分。结论:鳖甲煎丸含药血清可抑制胰腺癌AsPC-1细胞的恶性生物学行为,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多

关键词 鳖甲煎丸 胰腺癌 增殖 上皮-间充质转化 PI3K/AKT信号通路

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PPM1A抑制胰腺癌细胞PANC-1的迁移侵袭和EMT进程 被引量：2

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作者 黄金平 张荣花 +2 位作者 王梅梅 熊亚南 章广玲 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第2期164-172,共9页

为研究镁依赖性蛋白磷酸酶1A(protein phosphatase magnesium-dependent 1A,PPM1A)对胰腺癌细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)的影响,采用生物信息学技术以及细胞免疫荧光实验分析PPM1A在... 为研究镁依赖性蛋白磷酸酶1A(protein phosphatase magnesium-dependent 1A,PPM1A)对胰腺癌细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)的影响,采用生物信息学技术以及细胞免疫荧光实验分析PPM1A在胰腺癌中的表达情况,划痕、Transwell、qRT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光实验检测PPM1A对胰腺癌细胞PANC-1迁移、侵袭及EMT标志物表达水平的影响,生物信息学网站预测PPM1A的上游miRNA.结果表明,PPM1A在胰腺癌中低表达,抑制PANC-1细胞的迁移、侵袭和EMT进程,miR-105-5p为PPM1A的潜在上游miRNA.说明PPM1A和miR-105-5p可能是治疗胰腺癌新的靶点. 展开更多

关键词 PPM1A 上皮-间充质转化 胰腺癌 迁移 侵袭

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PPM1A/TGF-β1/Smads轴对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响 被引量：1

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作者 张荣花 崔笑妍 +5 位作者 周静 王梅梅 熊亚南 于笑涵 刘志勇 章广玲 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2024年第4期463-469,共7页

目的:探讨镁依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)/TGF-β1/Smads轴对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:①通过组织芯片免疫组织化学染色检测88例胰腺癌组织和14例癌旁正常胰腺组织中PPM1A的表达情况。利用qRT-PCR、免疫... 目的:探讨镁依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)/TGF-β1/Smads轴对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:①通过组织芯片免疫组织化学染色检测88例胰腺癌组织和14例癌旁正常胰腺组织中PPM1A的表达情况。利用qRT-PCR、免疫荧光实验检测胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3与正常胰腺导管上皮细胞HPNE中PPM1A的表达情况。②取PANC-1细胞,采用脂质体转染法分4组,分别转染si-NC、si-PPM1A、pcDNA3.1、pcDNA3.1-PPM1A,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot法检测TGF-β1、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3蛋白的表达情况。③取PANC-1细胞,转染si-PPM1A或pcDNA3.1-PPM1A后,再加入TGF-β1信号通路抑制剂SB431542或活化因子TGF-β1,通过CCK-8实验检测细胞增殖能力。结果:①与癌旁正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中PPM1A蛋白表达减少(P<0.05)。②与正常胰腺导管上皮细胞HPNE相比,胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中PPM1A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。③与si-NC组相比,si-PPM1A组细胞增殖、迁移和侵袭能力增加,TGF-β1/Smads信号通路中TGF-β1、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3表达水平升高(P<0.05);与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-PPM1A组细胞上述指标的变化相反(P<0.05)。④SB431542可逆转si-PPM1A对PANC-1细胞增殖的促进作用,TGF-β1可逆转pcDNA3.1-PPM1A对PANC-1细胞增殖的抑制作用(P<0.05)。结论:PPM1A可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多

关键词 胰腺癌 PPM1A TGF-Β1 SMAD 细胞增殖 迁移 侵袭

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miR-296-3p对胆总管结扎诱导的大鼠肝纤维化的影响 被引量：1

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作者 张亚楠 王璐瑶 +5 位作者 周静 张荣花 熊亚南 王梅梅 刘志勇 章广玲 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第9期1583-1590,共8页

目的探究微小RNA-296-3p(miR-296-3p)对胆总管结扎(BDL)诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法将25只SD大鼠随机分为假手术(sham)组、模型(BDL)组、NC adv组、miR-296-3p adv组和miR-296-3p sponge adv组,每组5只。通过苏木精-伊红(HE)、Masso... 目的探究微小RNA-296-3p(miR-296-3p)对胆总管结扎(BDL)诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法将25只SD大鼠随机分为假手术(sham)组、模型(BDL)组、NC adv组、miR-296-3p adv组和miR-296-3p sponge adv组,每组5只。通过苏木精-伊红(HE)、Masson染色和天狼星红(Sirius Red)染色观察大鼠肝组织病理变化;比较各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)含量;用qRT-PCR检测大鼠肝组织中miR-296-3p、白介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平以及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col1A1)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达水平;Western blot检测α-SMA、Col1A1、CTGF蛋白的表达水平;免疫组织化学染色(IHC)检测α-SMA的表达水平;生物信息学网站预测miR-296-3p的候选靶基因;检测锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)mRNA和蛋白的表达水平。结果病理学染色结果显示,与sham组相比,BDL组和NC adv组大鼠肝组织中大量炎症细胞浸润和胶原沉积,与NC adv组相比,miR-296-3p adv组肝组织中炎症细胞减少,胶原沉积减少,而miR-296-3p sponge adv组胶原聚积和炎症反应加重。与sham组相比,BDL组和NC adv组大鼠血清ALT、AST、TBIL含量升高,miR-296-3p的表达水平降低,IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平及α-SMA、Col1A1、CTGF mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);与NC adv组相比,miR-296-3p adv组大鼠血清ALT、AST、TBIL含量降低,miR-296-3p表达水平升高,IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平降低且肝组织中α-SMA、Col1A1、CTGF mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),miR-296-3p sponge adv组结果与miR-296-3p adv组结果相反(P<0.05)。生物信息学网站预测到ZBTB20可能是miR-296-3p的候选靶基因。与sham组相比,BDL组和NC adv组大鼠肝组织中ZBTB20 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),与NC adv组相比,miR-296-3p adv组肝组织中ZBTB20表达降低(P<0.05),而miR-296-3p sponge adv组肝组织中ZBTB20表达升高(P<0.05)。结论miR-296-3p在BDL诱导的大鼠肝纤维化组织中表达水平降低,miR-296-3p可能通过靶定ZBTB20抑制BDL大鼠肝纤维化。 展开更多

关键词 miR-296-3p ZBTB20 胆总管结扎 大鼠 肝纤维化 炎症因子

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E盒结合锌指蛋白2对AsPC-1细胞增殖和EMT的影响

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作者 王璐瑶 周静 +5 位作者 张荣花 于笑涵 熊亚南 王梅梅 章广玲 刘志勇 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第8期798-805,共8页

目的探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对AsPC-1胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法按照胰腺癌细胞中转染物不同,将细胞分为4组,分别是si-NC、si-ZEB2、pcDNA3.1、pcDNA3.1-ZEB2。TCGA数据库分析ZEB2在胰腺癌组织... 目的探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对AsPC-1胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法按照胰腺癌细胞中转染物不同,将细胞分为4组,分别是si-NC、si-ZEB2、pcDNA3.1、pcDNA3.1-ZEB2。TCGA数据库分析ZEB2在胰腺癌组织与癌旁胰腺组织中的表达差异及其与胰腺癌患者预后的关系,并利用Westernblot检测ZEB2在AsPC-1胰腺癌细胞和正常胰腺上皮细胞HPNE中的表达差异。采用qRT-PCR、Westernblot检测ZEB2小干扰RNA(si-ZEB2)及过表达质粒(pcDNA3.1-ZEB2)的转染效率。CCK-8、克隆形成、划痕和Transwell实验检测ZEB2对AsPC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。qRT-PCR和免疫荧光实验检测ZEB2对AsPC-1细胞中EMT标志物表达的影响。利用生物信息学网站预测与ZEB2有靶定作用的miRNAs并构建ZEB2的蛋白-蛋白互作网络(PPI)。结果ZEB2在胰腺癌组织和AsPC-1胰腺癌细胞中高表达(P<0.05),且其高表达与胰腺癌患者的较差预后相关。qRT-PCR、Westernblot结果表明si-ZEB2和pcDNA3.1-ZEB2能够有效的转染到AsPC-1胰腺癌细胞中(P<0.05)。与si-NC组相比,si-ZEB2组中AsPC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力受到抑制,EMT上皮标志物E-cadherin表达增加、间质标志物Vimentin表达减少(P<0.05)。pcDNA3.1-ZEB2组中AsPC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭和EMT标志物得到了与上述相反的结果(P<0.05)。共预测到与ZEB2有靶定作用的miRNAs 77个,与ZEB2作用密切的蛋白有10个。结论ZEB2在胰腺癌组织和细胞中高表达且其高表达与胰腺癌患者的较差预后相关,ZEB2作为一种促癌因子,能够促进AsPC-1胰腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭和EMT进程。 展开更多

关键词 E盒结合锌指蛋白2 胰腺癌 AsPC-1细胞 增殖 上皮间充质转化

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miR-199a-5p通过调节肠道菌群促进胆总管结扎诱导的大鼠肝纤维化

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作者 崔笑妍 于笑涵 +6 位作者 周静 王璐瑶 张荣花 王梅梅 熊亚南 刘志勇 章广玲 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第10期1794-1801,共8页

目的研究miR-199a-5p通过调节肠道菌群对胆总管结扎(BDL)诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法25只SD大鼠随机分为Sham组、BDL组、空载腺病毒(NC adv)组、miR-199a-5p adv组和miR-199a-5p sponge adv组,每组5只。HE、Masson和Sirius Red染色... 目的研究miR-199a-5p通过调节肠道菌群对胆总管结扎(BDL)诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法25只SD大鼠随机分为Sham组、BDL组、空载腺病毒(NC adv)组、miR-199a-5p adv组和miR-199a-5p sponge adv组,每组5只。HE、Masson和Sirius Red染色观察大鼠肝组织病理变化及肝纤维化程度;全自动生化分析仪检测大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)含量;qRT-PCR检测大鼠肝组织中miR-199a-5p的表达水平;双重免疫荧光和Western blot实验检测大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原α1链(COL1A1)的蛋白表达水平;收集大鼠粪便进行16S rRNA高通量测序。结果miR-199a-5p在BDL大鼠肝组织中表达上调(P<0.01)。与NC adv组相比,miR-199a-5p adv组大鼠肝损伤及胶原沉积现象更为严重,血清中AST、ALT、TBIL和DBIL含量以及肝组织中α-SMA和COL1A1表达水平显著升高(均P<0.05)。然而,miR-199a-5p sponge adv干预的结果与之相反(均P<0.05)。16S rRNA测序结果显示,miR-199a-5p adv干预可增加BDL大鼠肠道菌群的多样性和丰富度,改变肠道菌群组成,而miR-199a-5p sponge adv干预后菌群的结果与之相反(均P<0.05)。结论miR-199a-5p促进BDL大鼠肝纤维化,其机制可能与调节肠道菌群多样性和丰度相关。 展开更多

关键词 miR-199a-5p 肠道菌群 胆总管结扎 肝纤维化 炎症

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miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为 被引量：1

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作者 韩向阳 张荣花 +5 位作者 李玉凤 苏静慧 曹雨萌 黄金平 章广玲 李景武 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期879-888,共10页

目的:探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法... 目的:探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2组。CCK-8法、克隆形成、划痕愈合、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p对靶基因的调控作用。结果:胰腺癌组织中ZEB2的表达显著高于正常胰腺组织(P<0.01),且胰腺癌组织中miR-192-5p和ZEB2表达呈负相关(r=-0.419,P<0.01)。与HPNE细胞比较,PANC-1细胞中miR-192-5p低表达、ZEB2蛋白高表达(均P<0.01)。miR-192-5p过表达后,PANC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均显著降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达均上调、vimentin和ZEB2 mRNA和蛋白表达均下调;而抑制miR-192-5p后得到了相反的结果(P<0.05或P<0.01)。miR-192-5p靶向调控ZEB2的表达,过表达ZEB2可部分逆转上调miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的抑制作用。结论:miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为。 展开更多

关键词 胰腺癌 miR-192-5p E盒锌指结合同源框2 PANC-1细胞 增殖 迁移 侵袭 上皮间质转化

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AKT3逆转miR-22-3p/29a-3p对LX-2细胞活化的协同抑制作用 被引量：1

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作者 张荣花 张亚楠 +4 位作者 韩向阳 崔笑妍 田晓丽 章广玲 刘志勇 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第7期1132-1139,共8页

目的探讨丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT3)能否逆转miR-22-3p/29a-3p对人肝星状细胞LX-2活化的协同抑制作用。方法利用TargetScan、Starbase、miRDB和DIANA预测miR-22-3p和miR-29a-3p的共同靶基因,对筛选出的靶基因进行KEGG、GO和蛋白-蛋白互作... 目的探讨丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT3)能否逆转miR-22-3p/29a-3p对人肝星状细胞LX-2活化的协同抑制作用。方法利用TargetScan、Starbase、miRDB和DIANA预测miR-22-3p和miR-29a-3p的共同靶基因,对筛选出的靶基因进行KEGG、GO和蛋白-蛋白互作(PPI)分析;RNAhybrid分析候选靶基因与两个miRNAs结合的自由能,并通过双萤光素酶报告实验确定它们的靶向关系;采用CCK-8、Transwell和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测LX-2细胞增殖、迁移以及纤维化标志物的表达。结果miR-22-3p和miR-29a-3p的共同靶基因有24个,且它们富集在与肝纤维化相关的信号通路和生物学过程;候选靶基因AKT3与miR-22-3p和miR-29a-3p的结合自由能分析结合双萤光素酶实验结果提示AKT3是miR-22-3p和miR-29a-3p的共同靶基因;miR-22-3p和miR-29a-3p mimics能够单独或协同抑制LX-2细胞的增殖、迁移以及纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原α1链(COL1A1)mRNA的表达(P<0.05),AKT3过表达后能够逆转miR-22-3p和miR-29a-3p mimics对LX-2细胞的上述协同抑制作用(P<0.05)。结论AKT3过表达可逆转miR-22-3p和miR-29a-3p对LX-2细胞活化的协同抑制作用。 展开更多

关键词 LX-2 丝氨酸/苏氨酸激酶3 miR-22-3p miR-29a-3p 增殖 迁移

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miR-194-5p通过Wnt5a抑制肝星状细胞活化 被引量：1

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作者 李亚琦 张荣花 +3 位作者 刘雨潭 曹雨萌 熊亚南 章广玲 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第2期179-187,共9页

为研究miR-194-5p对肝星状细胞(HSCs)活化的影响及作用机制,采用CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、Transwell、划痕、集落形成实验和RT-qPCR、Western blot分别检测miR-194-5p对LX-2细胞生物学特性、细胞活化标志物和靶基因表达的影响,并用生... 为研究miR-194-5p对肝星状细胞(HSCs)活化的影响及作用机制,采用CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、Transwell、划痕、集落形成实验和RT-qPCR、Western blot分别检测miR-194-5p对LX-2细胞生物学特性、细胞活化标志物和靶基因表达的影响,并用生物信息学和双荧光素酶报告实验确定miR-194-5p靶基因.结果显示:miR-194-5p抑制LX-2细胞增殖、细胞集落形成、迁移能力以及LX-2细胞中活化标志物的表达,促进LX-2细胞衰老;Wnt5a为miR-194-5p的直接靶基因.研究表明miR-194-5p通过靶定Wnt5a抑制LX-2细胞活化,miR-194-5p和Wnt5a可能是治疗肝纤维化新的靶点. 展开更多

关键词 miR-194-5p 肝纤维化 肝星状细胞活化 增殖 迁移

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miR-203a-3p在胰腺癌组织与细胞中的表达及其对BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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作者 卢鸿健 张荣花 +5 位作者 霍小菊 韩向阳 王源 杨晨 马瑞雪 章广玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期680-688,共9页

目的:探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用TarBase数据库分... 目的:探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用TarBase数据库分析miRNA与癌症相关的GO功能与KEGG通路,利用DIANA Tools、miRDB和TargetScan网站预测miR-203a-3p的靶基因。将miR-203a-3p mimic及NC mimic、miR-203a-3p inhibitor及NC inhibitor转染至BxPC-3细胞,用qPCR法检测胰腺癌细胞和胰腺正常上皮细胞HPNE中miR-203a-3p、miR-192-5p和miR-451a表达水平,以CCK-8法、Transwell小室法和克隆形成实验分别检测BxPC-3细胞的增殖、迁移、侵袭和集落形成能力。结果:通过TCGA数据库筛选出18个胰腺癌组织中差异表达的miRNA,其中miR-203a-3p、miR-192-5p、miR-451a具有物种保守性,且其与胰腺癌临床癌症分期、细胞周期和患者生存率相关(均P<0.05);生物信息学网站预测显示miR-203a-3p的候选靶基因是PPM1A,PPM1A与多基因存在相互作用。miR-203a-3p、miR-192-5p和miR-451a在BxPC-3和Aspc-1细胞中均高表达(均P<0.01)。miR-203a-3p mimic组BxPC-3细胞中miR-203a-3p表达水平以及细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著提高(均P<0.01);miR-203a-3p inhibitor组细胞中miR-203a-3p表达水平以及细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。结论:miR-203a-3p在胰腺癌组织及细胞中均高表达,其表达与患者生存和临床分期相关,可调控BxPC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多

关键词 miR-203a-3p 胰腺癌 BXPC-3细胞 增殖 迁移 侵袭

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鳖甲煎丸通过PI3K/AKT通路对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

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作者 张荣花 李尹凡 +6 位作者 李以恒 于笑涵 黄金平 朱丽华 李玉凤 章广玲 刘志勇 《郑州大学学报(医学版)》 2025年第4期509-514,共6页

目的:探讨鳖甲煎丸(BJJP)通过PI3K/AKT通路抑制胰腺癌细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)的分子机制。方法:制备BJJP中药血清,将胰腺癌细胞AsPC-1和PANC-1分别设置正常对照(NC)组、10μmol/L PI3K抑制剂LY294002处理... 目的:探讨鳖甲煎丸(BJJP)通过PI3K/AKT通路抑制胰腺癌细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)的分子机制。方法:制备BJJP中药血清,将胰腺癌细胞AsPC-1和PANC-1分别设置正常对照(NC)组、10μmol/L PI3K抑制剂LY294002处理(LY294002)组、BJJP中药血清处理(BJJP)组、二者联合组,以及NC组、10μmol/L PI3K激活剂740Y-P处理(740Y-P)组、BJJP组、二者联合组,各组细胞加入相应药物48 h后收集细胞,采用CCK-8、集落形成、Transwell和Western blot实验检测细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭能力及PI3K/AKT通路、EMT相关蛋白的表达。结果:BJJP和LY294002作用后胰腺癌细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力受到抑制,AsPC-1细胞中p-AKT、p-PI3K及N-钙黏蛋白表达降低,E-钙黏蛋白表达增加;740Y-P作用后胰腺癌细胞上述指标的变化趋势相反(P<0.05)。结论:BJJP可能通过抑制PI3K/AKT通路抑制胰腺癌细胞的恶性生物学行为,从而发挥抗胰腺癌作用。 展开更多

关键词 鳖甲煎丸 胰腺癌 PI3K/AKT 迁移 侵袭 上皮-间充质转化

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