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病程相关蛋白基因GmPR1-6的克隆及其在大豆抵抗SMV侵染过程中的功能初探 被引量:4
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作者 苏伟华 赵志华 +3 位作者 齐梦楠 孙天杰 王冬梅 张洁 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期8-15,共8页
为了探究大豆抵抗大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)侵染的分子调控机制,挖掘抗病相关基因,培育抗病新品种,本研究从清除H2O2前后大豆响应SMV的转录组数据库中筛选得到1个差异表达的大豆病程相关蛋白基因GmPR1-6(Glyma.15G062400.... 为了探究大豆抵抗大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)侵染的分子调控机制,挖掘抗病相关基因,培育抗病新品种,本研究从清除H2O2前后大豆响应SMV的转录组数据库中筛选得到1个差异表达的大豆病程相关蛋白基因GmPR1-6(Glyma.15G062400.1),利用生物信息学分析并结合实时荧光定量(Real time quantitative,RT-qPCR)技术以及病毒介导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)等技术验证其在大豆抵抗SMV侵染过程中的功能。结果表明,GmPR1-6在非亲组合中转录水平的表达量显著高于亲和组合;GmPR1-6基因沉默植株叶片接种SMV的部位胼胝质积累面积增大、胼胝质荧光强度减弱,病毒在胞间扩散的能力增强,说明GmPR1-6基因在大豆抵抗SMV侵染过程中发挥正调控作用。研究结果为进一步探究病程相关蛋白在大豆抵抗SMV侵染过程中的功能提供试验依据。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 病程相关蛋白 病毒介导的基因沉默技术(VIGS) 功能分析
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小麦TaTCTP蛋白的原核表达及抗体制备 被引量:3
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作者 麻楠 孙天杰 +2 位作者 刘超 焦园园 王冬梅 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期10-15,29,共7页
为了阐明翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)在小麦-叶锈菌互作中的作用及其机制,本研究克隆了TaTCTP的开放阅读框(ORF)全长,并经过原核表达、亲和纯化、动物免疫,制备了TaTCTP兔多克隆抗体。结果表明,... 为了阐明翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)在小麦-叶锈菌互作中的作用及其机制,本研究克隆了TaTCTP的开放阅读框(ORF)全长,并经过原核表达、亲和纯化、动物免疫,制备了TaTCTP兔多克隆抗体。结果表明,该基因CDS区全长为507 bp,编码168个氨基酸,预期分子量为18.8 kD,并具有较高的可溶性。以纯化后的TaTCTP重组蛋白制备的抗体可以特异性识别TaTCTP,效价为1∶6400。Western blotting检测发现TaTCTP在叶锈菌侵染后受诱导上调。本研究为进一步研究TaTCTP在小麦与叶锈菌互作过程中的功能及其作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 TCTP 原核表达 多克隆抗体 Western blotting
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小麦富含半胱氨酸的类受体激酶TaCRK2与翻译控制肿瘤蛋白TaTCTP的相互作用 被引量:1
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作者 顾佳 李浩 +2 位作者 安瑞朋 刘刚 王冬梅 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期16-22,共7页
TaCRK2在叶锈菌侵染小麦诱发的过敏性反应中起正调控作用,为深入了解TaCRK2在小麦抵抗叶锈菌侵染中的作用机制,本试验采用串联亲和纯化与质谱联用(TAP-MS)技术,鉴定出翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)... TaCRK2在叶锈菌侵染小麦诱发的过敏性反应中起正调控作用,为深入了解TaCRK2在小麦抵抗叶锈菌侵染中的作用机制,本试验采用串联亲和纯化与质谱联用(TAP-MS)技术,鉴定出翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)为TaCRK2的潜在互作蛋白。但TaCRK2与TaTCTP的相互作用还缺乏试验证据,本研究利用DUALmembrane系统酵母双杂交(DUALmembrane system yeast-twohybrid)和双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术验证TaCRK2和TaTCTP之间的相互作用。DUALmembrane系统酵母双杂交结果显示,同时携带TaCRK2和TaTCTP的酵母NMY51可以在缺陷型培养基上生长;BiFC试验结果显示,TaCRK2和TaTCTP发生相互作用,并且定位在烟草表皮细胞的内质网膜上。本研究为深入了解TaCRK2在叶锈菌侵染小麦诱发的过敏性反应中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 CRK TCTP DUALmembrane系统酵母双杂交 双分子荧光互补 小麦
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小麦与叶锈菌互作过程中TaSnRK1的表达分析及其亚细胞定位 被引量:2
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作者 汤文倩 王冬梅 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期7-12,共6页
本研究选用叶锈菌生理小种260,与小麦近等基因系Tc Lr26及其轮回亲本Thatcher (Tc)分别组成不亲和组合和亲和组合,在7日龄小麦叶片上接种叶锈菌,采用实时定量PCR(RT-qPCR)对TaSnRK1基因的表达进行分析。并通过构建pSuper1300+-SnRK1表... 本研究选用叶锈菌生理小种260,与小麦近等基因系Tc Lr26及其轮回亲本Thatcher (Tc)分别组成不亲和组合和亲和组合,在7日龄小麦叶片上接种叶锈菌,采用实时定量PCR(RT-qPCR)对TaSnRK1基因的表达进行分析。并通过构建pSuper1300+-SnRK1表达载体对TaSnRK1进行亚细胞定位分析。由RT-qPCR结果可知,该基因在不亲和组合中,表达量随时间延长先升高后下降,且在12 h达到峰值;而在亲和组合中,表达量也呈现先升高后下降趋势,但表达量远远低于不亲和组合。亚细胞定位结果表明,TaSnRK1蛋白分布在细胞质和细胞核中。本研究结果为进一步深入探讨TaSnRK1的功能和作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 叶锈菌 SnRK1 亚细胞定位
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TaCDPK6在小麦与叶锈菌互作过程中的表达模式分析 被引量:1
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作者 李浩 汪敏 +2 位作者 张敬敬 顾佳 王冬梅 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1-6,共6页
为了深入探究钙依赖蛋白激酶(Calcium dependent protein kinase,CDPK)在小麦与叶锈菌互作过程中的功能机制,本试验结合叶锈菌生理小种260侵染小麦品种Tc Lr26后的RNA-seq数据和NCBI基因组数据筛选得到抗病相关基因TaCDPK6,并对TaCDPK6... 为了深入探究钙依赖蛋白激酶(Calcium dependent protein kinase,CDPK)在小麦与叶锈菌互作过程中的功能机制,本试验结合叶锈菌生理小种260侵染小麦品种Tc Lr26后的RNA-seq数据和NCBI基因组数据筛选得到抗病相关基因TaCDPK6,并对TaCDPK6进行了蛋白质理化性质分析;利用RT-qPCR和Western blotting技术检测TaCDPK6基因及其表达蛋白在小麦与叶锈菌互作过程中的表达模式。结果表明,TaCDPK6蛋白分子大小为57 kD,理论等电点为7.61,为亲水性蛋白质;在小麦叶片接种叶锈菌后,随着接种时间的延长,目的基因及蛋白呈先上升后下降的表达趋势,并且在4~8 h表达量达到最高,与RNA-seq数据分析得到的表达趋势基本一致。结果表明TaCDPK6在小麦抵抗叶锈菌的基础防御反应中可能发挥正调控作用。 展开更多
关键词 小麦 叶锈菌 TaCDPK6 RT-QPCR Western blotting
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