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周期蛋白D1在蛋白激酶C调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用 被引量:5
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作者 乔礼芬 徐永健 +5 位作者 刘先胜 谢俊刚 杜春玲 张建 倪望 陈仕新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2214-2219,共6页
目的:观察蛋白激酶C(PKC)激活后哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)周期蛋白D1(cyclin D1)的表达变化及两者表达相关性,探讨cyclin D1在PKC调控哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用。方法:卵清蛋白(OVA)吸入制备SD大鼠2周哮喘模型,原代培养ASMCs... 目的:观察蛋白激酶C(PKC)激活后哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)周期蛋白D1(cyclin D1)的表达变化及两者表达相关性,探讨cyclin D1在PKC调控哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用。方法:卵清蛋白(OVA)吸入制备SD大鼠2周哮喘模型,原代培养ASMCs。采用正常大鼠(N组)和模型大鼠(A组)第3-6代细胞,分别应用PKC特异性激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)及抑制剂Ro-31-8220干预ASMCs,根据不同处理分为4组:(1)空白组;(2)10nmol/L PMA组;(3)10nmol/L PMA+5μmol/L Ro-31-8220组;(4)5μmol/L Ro-31-8220组。采用流式细胞术,四甲基偶氮唑盐(MTT)法,增殖细胞核抗原(PCNA)染色等方法观察药物对ASMCs增殖的影响。RT-PCR方法检测PKC-α和cyclin D1 mRNA表达水平,Western blotting方法检测PKC-α和cyclin D1蛋白表达水平。线性相关分析评价PKC-α和cyclin D1表达水平的关系。结果:(1)在哮喘组,与空白对照比较,PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率,差异显著(P<0.01)。在正常组,与空白对照相比,PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率差异均显著(P<0.01)。(2)哮喘组内PMA组、Ro-31-8220组PKC-α以及cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平与空白对照比较,差异显著(P<0.01)。正常组和哮喘组变化趋势一致。(3)在mRNA水平,大鼠ASMCs PKC-α和cyclin D1的表达呈明显正相关(r=0.476,P<0.05),在蛋白水平两者的表达亦呈明显正相关(r=0.899,P<0.01)。结论:PKC-α能促进正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs增殖,其在基因和蛋白的表达水平与cyclin D1的表达呈正相关,提示PKC-α可能通过调节cyclin D1而影响ASMCs的增殖。 展开更多
关键词 哮喘 蛋白激酶C 细胞周期蛋白D1 气道平滑肌细胞
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选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液中γδT细胞的研究 被引量:2
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作者 李超乾 徐永健 +5 位作者 陈仕新 倪望 钟小宁 杨丹蕾 刘先胜 张珍祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期337-339,共3页
目的 :探讨选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中γδT细胞的方法 ,以获得高纯度的γδT细胞亚群。方法 :应用梯度离心法分离大鼠 (n =10 )外周血和BALF中的单个核细胞 ,经贴壁除去单核 /巨噬细胞后 ,用补体攻击αβT细胞 ,再用... 目的 :探讨选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中γδT细胞的方法 ,以获得高纯度的γδT细胞亚群。方法 :应用梯度离心法分离大鼠 (n =10 )外周血和BALF中的单个核细胞 ,经贴壁除去单核 /巨噬细胞后 ,用补体攻击αβT细胞 ,再用抗TCRγδ单克隆抗体 (mAb)通过固相法加IL 2刺激选择性培养扩增γδT细胞 (简称“攻击洗淘法”) ;通过细胞生长曲线观察细胞增殖变化 ,采用免疫组化法和流式细胞仪检测鉴定γδT细胞纯度。结果 :PBMC和BALF中的γδT细胞在抗TCRγδmAb和IL 2存在下 ,无须再用抗原刺激 ,能维持较长时间增殖 ;经“攻击洗淘法”纯化后扩增的γδT细胞纯度达到 81%~99%。结论 :“攻击洗淘法” 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 培养 支气管肺泡灌洗液 攻击洗淘法
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肾上腺髓质素对慢性缺氧性肺动脉高压大鼠的保护作用 被引量:7
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作者 李耀军 张珍祥 徐永健 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2003年第6期944-946,共3页
目的 :探讨肾上腺髓质素 (AM)对慢性缺氧性肺动脉高压的作用及其机制。方法 :1 8只大鼠随机分为 3组 :①缺氧组 ,②AM组 ,③空白对照组。缺氧 1 4d后采用导管检测右室收缩压 (pRVS)、体动脉平均压 ( pSA) ,处死动物后 ,分离心室 ,测重... 目的 :探讨肾上腺髓质素 (AM)对慢性缺氧性肺动脉高压的作用及其机制。方法 :1 8只大鼠随机分为 3组 :①缺氧组 ,②AM组 ,③空白对照组。缺氧 1 4d后采用导管检测右室收缩压 (pRVS)、体动脉平均压 ( pSA) ,处死动物后 ,分离心室 ,测重后计算右心室质量 / (左心室质量 +室间隔质量 ) (mRV/ (mLV+mSP) )值 ,取右下叶肺 ,常规石蜡切片 ,维多利亚蓝染色 ,图像分析计算肺小动脉中膜厚度与外径之比、中膜面积与横截面积比 ,免疫组化检测内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)表达的变化。结果 :pRVS在AM组为 (4 4 .0± 5 .5 )mmHg(1mmHg =0 .1 33kPa) ,显著低于缺氧组的 (6 2 .7± 4 .2 )mmHg ,而各组间 pSA均无显著差异。AM组mRV/ (mLV+mSP)值为 0 .32 7± 0 .0 36 ,显著低于缺氧组的 0 .4 1 6± 0 .0 30 ,肺小动脉中膜厚度与外径之比、中膜面积与横截面积比在AM组为 0 .1 4 6± 0 .0 2 9、0 .2 6 8± 0 .0 4 8,显著低于缺氧组的 0 .2 5 6± 0 .0 86、0 .4 4 0± 0 .1 1 2 ,eNOS的表达在AM组高于缺氧组。结论 :AM能够降低慢性缺氧的肺动脉压力 ,改善肺血管重构 ,有望用于肺动脉高压的治疗。 展开更多
关键词 肾上腺髓质素 缺氧 高血压 肺性 一氧化氮合酶
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肾上腺髓质素m RNA在慢性缺氧大鼠右心室中的表达 被引量:2
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作者 李耀军 张珍祥 徐永健 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1265-1267,T004,共4页
目的 :探讨肾上腺髓质素 (AM)在慢性低氧性肺动脉高压发病中的作用。方法 :16只大鼠随机分为低氧组和对照组 ,间断常压低氧 14d复制肺动脉高压模型 ,静脉右心导管测定右室收缩压 (RVSP)的变化 ,分离心室检测右室 / (左室 +室间隔 ) (RV/... 目的 :探讨肾上腺髓质素 (AM)在慢性低氧性肺动脉高压发病中的作用。方法 :16只大鼠随机分为低氧组和对照组 ,间断常压低氧 14d复制肺动脉高压模型 ,静脉右心导管测定右室收缩压 (RVSP)的变化 ,分离心室检测右室 / (左室 +室间隔 ) (RV/LV +SP)比值 ,原位杂交法检测AMmRNA在右心室中的表达。结果 :低氧组大鼠右室压为 (6 3 6 3± 3 4 2 )mmHg ,显著高于对照组的 (34 13± 3 4 0 )mmHg(P <0 0 1)。低氧组大鼠 (RV/LV +SP)比值为0 4 39± 0 0 39,显著高于对照组的 0 2 3± 0 0 2 5 (P <0 0 1)。AMmRNA在对照组大鼠的右室心肌细胞也有少量表达 ,低氧组大鼠其表达显著多于对照组。图像分析表明 ,低氧组的平均吸光度、平均表达面积分别为 0 10 6 1± 0 0 188,0 14 2 1± 0 0 16 5 ,均显著高于对照组的 0 0 872± 0 0 171,0 0 96 7± 0 0 135。结论 :低氧时右心室AMmRNA表达增加 ,提示可能在肺动脉高压的发病中起保护作用。 展开更多
关键词 低氧 肺性高血压 肾上腺髓质素 RNA 信使 慢性低氧性肺动脉高压发病 大鼠
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