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重组G5P蛋白的原核表达纯化及与PrP^Sc结合能力的鉴定
1
作者
朱峰
谭家亮
+3 位作者
吴江
杨茹
毕昊
夏剑波
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期38-43,共6页
目的利用基因克隆技术制备重组G5P蛋白,并鉴定其结合朊病毒(PrPSc)的能力。方法化学合成G5P全长基因核苷酸片段,将其插入原核表达载体pET-28a-c(+)质粒中,获得pET-28a-c(+)-G5P重组质粒。将其转化到E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,...
目的利用基因克隆技术制备重组G5P蛋白,并鉴定其结合朊病毒(PrPSc)的能力。方法化学合成G5P全长基因核苷酸片段,将其插入原核表达载体pET-28a-c(+)质粒中,获得pET-28a-c(+)-G5P重组质粒。将其转化到E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,经Ni+亲和层析柱纯化,获得纯化重组G5P蛋白。制备重组G5P蛋白偶联磁珠,将其与含有或不含有PrP^Sc的人脑匀浆液混合,进行PrP^Sc的捕获实验。利用Western blot检测技术鉴定重组G5P蛋白与PrP^Sc结合的特异性与结合力。结果成功获得纯化的重组G5P蛋白,捕获实验显示重组G5P蛋白偶联磁珠仅从散发性克雅氏病(sCJD)患者的脑匀浆液中捕获到朊蛋白,而从非CJD患者的脑匀浆液中未捕获到朊蛋白。捕获的朊蛋白经蛋白酶K处理后仍能检出Western blot条带,证明重组G5P蛋白结合的朊蛋白为PrP^Sc而非正常朊蛋白。将sCJD患者的脑匀浆液稀释10000倍后重组G5P蛋白仍可捕获到PrP^Sc。结论该研究利用基因克隆技术成功获得了纯化的重组G5P蛋白。该蛋白具有特异性结合PrP^Sc的能力,并具有较高亲和力。这为下一步研发新型朊病毒检测技术和滤除技术打下基础。
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关键词
G5P
原核表达
纯化
PrP^Sc
结合能力
鉴定
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题名
重组G5P蛋白的原核表达纯化及与PrP^Sc结合能力的鉴定
1
作者
朱峰
谭家亮
吴江
杨茹
毕昊
夏剑波
机构
华中科技大学同济医学院
附属
协和医院心血管内
科
广东三九脑
科
医院神经外
科
湖北省
阳新县
妇幼保健
院
检验
科
武汉血液中心输血研究所
华中科技大学同济医学院附属湖北省妇幼保健院检验科
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期38-43,共6页
基金
湖北省自然科学基金资助项目(No.2017CFB439)。
文摘
目的利用基因克隆技术制备重组G5P蛋白,并鉴定其结合朊病毒(PrPSc)的能力。方法化学合成G5P全长基因核苷酸片段,将其插入原核表达载体pET-28a-c(+)质粒中,获得pET-28a-c(+)-G5P重组质粒。将其转化到E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,经Ni+亲和层析柱纯化,获得纯化重组G5P蛋白。制备重组G5P蛋白偶联磁珠,将其与含有或不含有PrP^Sc的人脑匀浆液混合,进行PrP^Sc的捕获实验。利用Western blot检测技术鉴定重组G5P蛋白与PrP^Sc结合的特异性与结合力。结果成功获得纯化的重组G5P蛋白,捕获实验显示重组G5P蛋白偶联磁珠仅从散发性克雅氏病(sCJD)患者的脑匀浆液中捕获到朊蛋白,而从非CJD患者的脑匀浆液中未捕获到朊蛋白。捕获的朊蛋白经蛋白酶K处理后仍能检出Western blot条带,证明重组G5P蛋白结合的朊蛋白为PrP^Sc而非正常朊蛋白。将sCJD患者的脑匀浆液稀释10000倍后重组G5P蛋白仍可捕获到PrP^Sc。结论该研究利用基因克隆技术成功获得了纯化的重组G5P蛋白。该蛋白具有特异性结合PrP^Sc的能力,并具有较高亲和力。这为下一步研发新型朊病毒检测技术和滤除技术打下基础。
关键词
G5P
原核表达
纯化
PrP^Sc
结合能力
鉴定
Keywords
G5P
prokaryotic expression
purification
PrPSc
binding ability
evaluation
分类号
R446.1 [医药卫生—诊断学]
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作者
出处
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1
重组G5P蛋白的原核表达纯化及与PrP^Sc结合能力的鉴定
朱峰
谭家亮
吴江
杨茹
毕昊
夏剑波
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021
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