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miR-372-3p在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响 被引量:12
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作者 张伟 郭永连 +3 位作者 李国灏 舒博 陈琳 余家俊 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期45-50,共6页
目的:检测miR-372-3p在膀胱癌组织和转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞中的表达,研究miR-372-3p对膀胱癌5637和T24细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:采集2016年3月至2017年1月武汉中心医院收治的6例膀胱癌患者癌及癌旁组织(距离肿瘤边缘... 目的:检测miR-372-3p在膀胱癌组织和转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞中的表达,研究miR-372-3p对膀胱癌5637和T24细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:采集2016年3月至2017年1月武汉中心医院收治的6例膀胱癌患者癌及癌旁组织(距离肿瘤边缘>5 cm),q PCR检测膀胱癌及癌旁组织miR-372-3p表达。采用脂质体转染法将miR-372-3p mimics或者miRNC转入膀胱癌5637和T24细胞。用q PCR和Western blotting检测转染miR-372-3p mimics和miR-NC膀胱癌细胞miR-372-3p和ATAD2 m RNA和蛋白E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期分布,MTT法和集落形成实验检测细胞增殖和集落形成能力,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:膀胱癌组织miR-372-3p m RNA的表达显著低于癌旁组织(0.65±0.56 vs 1.76±0.34,P<0.01)。和转染miR-NC膀胱癌细胞相比,转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞的miR-372-3p m RNA表达显著增加,ATAD2 m RNA和蛋白的表达显著降低,E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin蛋白表达下调,细胞周期明显阻滞,细胞集落形成和增殖能力显著降低,细胞迁移数和侵袭数减少。结论:miR-372-3p的低表达可能与膀胱癌的发生发展有关,其通过靶向调控ATAD2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能成为膀胱癌生物治疗的新靶标。 展开更多
关键词 miR-372-3p 膀胱癌 5637细胞 T24细胞 增殖 迁移 侵袭
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dsP21-625通过激活P21基因表达抑制前列腺癌细胞的增殖 被引量:6
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作者 王勇 郭永连 +3 位作者 陈琳 李国灏 应诚诚 程薇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期35-39,共5页
目的:探讨人工合成小分子双链RNA-625(double-stranded RNA-625,ds P21-625)对前列腺癌细胞P21基因的激活作用及对细胞增殖的影响。方法:将人工合成的ds P21-625(ds P21-625组)和ds Ctrl质粒(ds Ctrl组)分别转染至前列腺癌细胞株PC-3和D... 目的:探讨人工合成小分子双链RNA-625(double-stranded RNA-625,ds P21-625)对前列腺癌细胞P21基因的激活作用及对细胞增殖的影响。方法:将人工合成的ds P21-625(ds P21-625组)和ds Ctrl质粒(ds Ctrl组)分别转染至前列腺癌细胞株PC-3和DU-145。用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测转染后各组前列腺癌细胞中P21、细胞周期素E(Cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)m RNA及蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT实验和克隆形成实验分别检测细胞周期分布、细胞增殖和克隆形成能力。结果:与ds Ctrl组比较,ds P21-625组PC-3和DU-145细胞中P21 m RNA水平升高(均P<0.01),Cyclin E和CDK2 m RNA表达水平下调(均P<0.01);ds P21-625组PC-3和DU-145细胞中P21蛋白表达上调(均P<0.01),Cyclin E和CDK2蛋白表达下调(均P<0.01);ds P21-625组细胞S期和G2/M期的细胞比例减少(均P<0.05),G0/G1期的细胞比例增加(均P<0.01);ds P21-625组细胞增殖活力降低(均P<0.05)、克隆形成数减少(均P<0.05)。结论:ds P21-625上调前列腺癌细胞中P21 m RNA及蛋白的表达,下调Cyclin E和CDK2 m RNA及蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 前列腺癌 PC-3细胞 dsP21-625 RNA激活 P21基因 增殖
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miR-1180-5p通过激活CDKN1A基因表达抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭 被引量:4
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作者 王勇 郭永连 +3 位作者 陈琳 李国灏 应诚诚 程薇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期698-703,共6页
目的:研究微小RNA-1180-5p(miR-1180-5p)对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法:合成ds Control(ds Control组)和miR-1180-5p(miR-1180-5p组),分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR和West... 目的:研究微小RNA-1180-5p(miR-1180-5p)对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法:合成ds Control(ds Control组)和miR-1180-5p(miR-1180-5p组),分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR和Western blotting分析转染后各组细胞CDKN1A、Cyclin D1和CDK6 mRNA及蛋白的表达变化,采用流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和Transwell实验分别检测细胞周期分布、增殖活力、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力。结果:qPCR结果显示,相比ds Control,转染miR-1180-5p后VCAP和LNCaP细胞中CDKN1A mRNA表达明显上调(P<0.01);Cyclin D1和CDK6 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。Western blotting与qPCR结果相符。转染miR-1180-5p后VCAP和LNCaP位于G0/G1期的细胞比例增加(P<0.01),而位于S期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05),细胞周期被阻滞在G0/G1期。转染miR-1180-5p后,两种前列腺癌细胞增殖活力较ds Control组明显降低(P<0.05),miR-1180-5p组两种细胞的克隆数量明显较少(P<0.01),同时miR-1180-5p组两组细胞迁移和侵袭能力均下降(P<0.01)。结论:miR-1180-5p能显著激活前列腺癌细胞中CDKN1A基因的表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物行为。 展开更多
关键词 miR-1180-5p CDKN1A基因 前列腺癌 增殖 迁移 侵袭
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miR-1271-5p在肾细胞癌组织和细胞中的表达及其对A-498细胞增殖及凋亡的影响 被引量:4
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作者 王勇 郭永连 +3 位作者 陈琳 李国灏 应诚诚 程薇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期40-44,共5页
目的:探讨miR-1271-5p在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织和细胞系中的表达及其对RCC细胞株A-498增殖及凋亡的影响。方法:用实时荧光定量PCR(q PCR)检测手术切除并经病理确诊为RCC组织和癌旁组织,以及RCC细胞系ACHN、A498、HK-2... 目的:探讨miR-1271-5p在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织和细胞系中的表达及其对RCC细胞株A-498增殖及凋亡的影响。方法:用实时荧光定量PCR(q PCR)检测手术切除并经病理确诊为RCC组织和癌旁组织,以及RCC细胞系ACHN、A498、HK-2、786-O、Ca Ki-1和人胚肾细胞株HEK293中miR-1271-5p的表达水平。用miR-1271-5p(实验组)和miR-NC(对照组)分别转染A-498细胞。通过生物信息学预测鸟嘌呤交换因子DOCK1为miR-1271-5p可能的靶基因,构建DOCK1基因的3’UTR野生型及突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测,q PCR检测两组细胞中DOCK1 m RNA表达水平,Western blotting检测两组细胞中DOCK1、p-ERK、p-AKT、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况,MTS法、集落形成实验和流式细胞术检测A-489细胞增殖、集落形成数目和凋亡情况。结果:RCC组织和细胞系中miR-1271-5p表达水平显著低于癌旁组织和人胚肾HEK293细胞(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因系统结果显示DOCK1是miR-1271-5p的靶基因(P<0.01)。与miR-NC组细胞相比,miR-1271-5p组A-498细胞中DOCK1 m RNA的表达水平显著下降(P<0.01);DOCK1、p-ERK、p-AKT、Bcl-2蛋白表达水平显著下调(P<0.05),Bax蛋白明显上调(P<0.05);A-498细胞增殖活力显著降低(P<0.01);集落形成数显著减少(P<0.05);细胞凋亡率显著增高(P<0.01)。结论:RCC组织和细胞系中miR-1271-5p表达下调,通过干扰DOCK1基因表达能明显抑制A-489细胞的增殖及诱导其凋亡,miR-1271-5p可能成为未来RCC治疗的分子靶标。 展开更多
关键词 肾细胞癌 miR-1271-5p DOCK1基因 增殖 凋亡
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外源性小分子RNA转染对肾透明细胞癌细胞生长的影响 被引量:1
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作者 王勇 郭永连 +3 位作者 陈琳 李国灏 余家俊 程薇 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第10期1572-1575,共4页
目的:探讨外源性小分子RNA(dsP21-397)转染对人肾透明细胞癌细胞系A-498和Caki-1生长的影响。方法:分别转染ds Contro(l对照组)和ds P21-397(实验组)至A-498和Caki-1细胞。qRT-PCR分析p21mRNA的表达情况。Western blot实验分析p21蛋白... 目的:探讨外源性小分子RNA(dsP21-397)转染对人肾透明细胞癌细胞系A-498和Caki-1生长的影响。方法:分别转染ds Contro(l对照组)和ds P21-397(实验组)至A-498和Caki-1细胞。qRT-PCR分析p21mRNA的表达情况。Western blot实验分析p21蛋白及下游靶蛋白细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的表达情况。流式细胞术检验细胞周期的分布。MTS实验和集落形成实验分析细胞活力和增殖能力。结果:与ds Control相比,转染ds P21-397后,A-498和Caki-1细胞中p21 m RNA的水平分别升高至2.55倍(P<0.01)和2.18倍(P<0.01);p21蛋白表达上调,下游靶蛋白CDK4和CyclinD1表达下调;位于G0/G1期的细胞比例明显升高,位于S期、G2/M期的细胞比例显著下降;两种肾癌细胞的活力明显降低;ds P21-397组的集落数数量明显较少。结论:dsP21-397能显著激活肾透明细胞癌细胞中p21蛋白的表达,下调细胞周期相关蛋白的表达,从而抑制肾透明细胞癌细胞的生长。 展开更多
关键词 dsP21—397 P21 肾透明细胞癌 增殖
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肾透明细胞癌舒尼替尼耐药的分子标志物筛选及相关生物学功能分析 被引量:4
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作者 刘郴郴 宋正帅 章小平 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期142-151,共10页
目的通过公共数据库,利用生物信息学方法分析对舒尼替尼敏感或耐药的肾透明细胞癌(ccRCC)样本间的基因表达差异,筛选出舒尼替尼耐药相关分子并探讨介导获得性耐药的潜在信号通路和分子机制。方法从GEO数据库中下载对舒尼替尼敏感或耐药... 目的通过公共数据库,利用生物信息学方法分析对舒尼替尼敏感或耐药的肾透明细胞癌(ccRCC)样本间的基因表达差异,筛选出舒尼替尼耐药相关分子并探讨介导获得性耐药的潜在信号通路和分子机制。方法从GEO数据库中下载对舒尼替尼敏感或耐药的ccRCC基因表达谱,利用GEO2R在线工具对不同表达水平基因进行筛选得到差异表达基因,构建差异基因的蛋白-蛋白互作网络,通过蛋白互作网络中的高连通性确定枢纽基因。对表达水平上调基因、下调基因以及枢纽基因进行分子功能、信号通路以及基因集富集分析(GSEA),发掘耐药的潜在机制。基于TCGA数据库,分析枢纽基因表达水平和ccRCC患者总生存期及无病生存期之间的关系,并利用Cox回归模型探讨靶基因和肾癌患者各种临床病理参数的相关性。结果筛选得到的舒尼替尼耐药样本差异表达基因中有上调基因38个,下调基因57个及10位枢纽基因,GO/KEGG分析提示上调基因及前10位枢纽基因的生物过程富集在Ⅰ型干扰素信号通路、对病毒的防御反应;分子功能涉及2′-5′-oligoadenylate合成酶活性、双链RNA结合、转移酶活性;信号通路富集在甲型流感、麻疹、单纯疱疹病毒感染和肠道免疫网络中产生IgA;GSEA结果显示舒尼替尼耐药组富集在复制应激、DNA感应、干扰素激活等通路。生存分析表明IL6、ISG15、OASL高表达预示更差的生存期;IFIT3、ISG15、OASL的ROC曲线下面积为0.7362~0.8914,且在肾癌组织中的表达明显上调,提示其具有潜在诊断价值,其中ISG15的表达与ccRCC的各种临床病理参数相关,可能促进肾癌的进展和转移。结论ISG15、IFIT3、OASL是预测ccRCC舒尼替尼耐药的潜在分子标志物,其中ISG15的表达水平与ccRCC的临床病理特征相关,是ccRCC的独立预后因素,有望成为治疗ccRCC的重要靶点。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 舒尼替尼耐药 分子标志物 生物信息学
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