HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立及盐酸小檗碱改善胰岛素抵抗的实验研究 被引量：15

1

作者 龚菂 李芬 +3 位作者 邹欣 王定坤 陆付耳 王开富 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1750-1754,共5页

目的建立HepG2(人肝胚胎瘤细胞)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,并在该模型上研究小檗碱改善IR的效应。方法用25 mmol·L^(-1)高糖,并分别用10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)胰岛... 目的建立HepG2(人肝胚胎瘤细胞)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,并在该模型上研究小檗碱改善IR的效应。方法用25 mmol·L^(-1)高糖,并分别用10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)胰岛素处理,诱导HepG2细胞产生IR;对2-NBDG(荧光素标记葡萄糖)与Hep G2细胞孵育浓度设定为:50、100、200、400、600、800μmol·L^(-1)、孵育时间设定为:20、40、60、80、100 min,拟筛选最佳胰岛素处理浓度、2-NBDG与HepG2最佳孵育浓度和最佳孵育时间,通过检测细胞培养液中葡萄糖的消耗量及细胞对葡萄糖的摄取量作为判定模型成功的标志;用二甲双胍、盐酸小檗碱干预模型细胞,研究盐酸小檗碱在细胞水平上改善IR的效应。结果 6种浓度的胰岛素均可不同程度诱导HepG2产生IR,虽然10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)剂量最明显,但细胞死亡较多,以10-6mol·L^(-1)剂量制模有效且细胞成活率高,与正常组比较差异具有统计学意义;当2-NBDG与HepG2细胞孵育浓度大于100μmol·L^(-1)时,细胞荧光强度与正常组差异有显著性,孵育时间超过20 min荧光强度与正常组比较有明显差异,超过100 min,细胞内荧光有明显淬灭衰减现象;盐酸小檗碱、二甲双胍能明显增加细胞培养上清液中葡萄糖的消耗及细胞对葡萄糖的摄取,与模型组比较差异具有统计学意义。结论用HepG2制作IR细胞模型时,选择10^(-6)mol·L^(-1)剂量的胰岛素;2-NBDG孵育浓度选择为200μmol·L^(-1)、2-NBDG孵育时间选择为80min较为适宜,盐酸小檗碱及二甲双胍对HepG2细胞IR具有明显的改善作用。 展开更多

关键词 盐酸小檗碱 HEPG2细胞 胰岛素抵抗 细胞模型 葡萄糖摄取 实验研究

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G145R变异重组HBsAg ELISA检测质控参照品制备的初步研究 被引量：3

2

作者 张波 陈妍 +6 位作者 龚劲松 张春燕 黄永国 张小燕 田拥军 杨东亮 李方和 《实用医学杂志》 CAS 2007年第12期1775-1778,共4页

目的:实验性制备G145R变异重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)质控参照品。方法:收集含G145R变异rHBsAg的细胞培养上清,采用50%饱和硫酸铵盐析,根据其在D12-ELISA中的检测信号,以卫生部颁布的HBsAgELISA质控血清精确标定盐析物中靶物质的含量... 目的:实验性制备G145R变异重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)质控参照品。方法:收集含G145R变异rHBsAg的细胞培养上清,采用50%饱和硫酸铵盐析,根据其在D12-ELISA中的检测信号,以卫生部颁布的HBsAgELISA质控血清精确标定盐析物中靶物质的含量,适量稀释分装,置-20℃冻存。采用不同方法对制备物的特异性与稳定性进行考核,并将其试用于对几种市售试剂盒检测变异能力的评价。结果:制备物中靶物质含量在0.50～32.00ng/mLwcHBsAg之间,在D12-ELISA检测中其信号的线性关系与质控血清有很好的一致性;反复冻融对其稳定性无显著影响;采用不同市售ELISA试剂检测时其反应信号强度各不相同。结论:本研究制备的G145R变异rHBsAgELISA质控参照品具有较高的稳定性、特异性与实用性;其研制为乙肝病毒免疫逃逸现象在基础、临床、诊断试剂研发,以及流行病学调查等方面研究的开展提供了重要的物质基础。 展开更多

关键词 肝炎表面抗原 乙型 酶联免疫吸附测定 G145R变异株 质控参照品

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生物信息模拟及生物学效应结合研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶的抑制作用 被引量：1

3

作者 王晨 谭政 +2 位作者 邹欣 刘慎沛 王开富 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期561-563,共3页

目的体外研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的抑制作用。方法利用生物信息模拟技术,体外模拟以盐酸小檗碱为代表的5种生物碱(配体)与AchE(受体)相互分子对接效应与差异性;将小鼠眼眶取血后脱臼处死,立刻开腹取出十二指肠制备组织... 目的体外研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的抑制作用。方法利用生物信息模拟技术,体外模拟以盐酸小檗碱为代表的5种生物碱(配体)与AchE(受体)相互分子对接效应与差异性;将小鼠眼眶取血后脱臼处死,立刻开腹取出十二指肠制备组织匀浆,采用双缩脲法测定肠组织匀浆中总蛋白含量,将盐酸小檗碱与肠组织液共孵育后用酶法检测小鼠十二指肠组织和血清中AchE活性,以生物信息模拟和生物学效应相结合对比研究盐酸小檗碱对AchE的抑制作用。结果体外分子模拟5种生物碱中只有盐酸小檗碱和药根碱能与AchE受体活性中心进行分子对接;盐酸小檗碱能明显抑制小鼠十二指肠组织和血清中AchE活性,抑制程度与其浓度具有明显的量效关系。结论体外生物信息模拟和生物学效应研究均表明盐酸小檗碱对AchE有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 盐酸小檗碱 乙酰胆碱酯酶 生物信息 生物效应

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用多糖-破伤风类毒素结合苗制备抗流行性脑膜炎球菌多糖单克隆抗体 被引量：4

4

作者 李佩珊 张春燕 +4 位作者 李时君 陈妍 项美娟 李方和 张洪 《医药导报》 CAS 2011年第6期709-712,共4页

目的 研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体（GAMP mAb）.方法 以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素（GAMP-TT）耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株（2E7）.采用... 目的 研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体（GAMP mAb）.方法 以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素（GAMP-TT）耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株（2E7）.采用秋水仙素阻断法测定其染色体数目,降植烷诱导法制备含该抗体的小鼠腹腔积液,辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）灰度扫描测定提取物纯度,改良过碘酸盐氧化法制备辣根过氧化物酶（HRP）标记抗GAMP mAb,并采用中和法及其抗原替代法对抗GAMP mAb的特异性进行初步的鉴定.结果 所获得的杂交瘤细胞（2E7）具有很好的生长特性,染色体数目约为139.73条;抗体分泌量适中,Ig亚类为IgG1,提取物浓度1.76～2.32 mg·mL-1,纯度97.2%,标记抗GAMP mAb的效价为1：25 600;抗原替代实验与中和实验对其特异性考核,初步结果证实2E7 mAb具有很好的抗GAMP特异性.结论 成功制备抗GAMP mAb,为GAMP-TT疫苗的生产监测及产品质量控制提供了必要的物质基础. 展开更多

关键词 菌苗 多糖抗体 A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖 结合苗 单克隆抗体

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抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：3

5

作者 刘嘉 丁红晖 +5 位作者 杨燕 胡斌 余源 黄红平 陆蒙吉 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期917-919,共3页

目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot... 目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot和免疫组织化学检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果:得到小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,效价达1∶105。纯化后的抗体用于Western blot可高特异性识别真核表达的H1b蛋白,并可用于免疫组织化学实验。结论:成功制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,该抗体具有较高的效价以及特异性,能区分ASG-PR大亚基的两种剪接异构体,从而为进一步研究H1b蛋白的生理功能及其在人类疾病中的意义提供了有利工具。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 多克隆抗体 剪接异构体

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ELISA差减分析--一种简便实用的免疫逃逸变异HBsAg检测新方法 被引量：1

6

作者 李方和 李佩珊 +4 位作者 刘静华 彭静 张春燕 黄永国 陈妍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期642-645,654,共5页

目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析&qu... 目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确认免疫逃逸变异HBsAg阳性者;以中和实验及雅培化学发光试剂验证检测结果的特异性;并对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性者以PCR及直接测序做HBV DNA分析。结果:自10231例受检者中筛选HBsAgELISA检测信号灰区标本244例;复核检测显示G6ELISA、市售ELISA两者对野生HBsAg检测敏感性分别为0.0625ng/ml,与0.125ng/ml;检测阳性率分别为16.80%(G6ELISA)及5.73%(市售ELISA)。ELISA差减分析确定免疫逃逸变异HBsAg阳性者27例,阳性率为11.07%。对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性血清做进一步考核,抗HBs中和强度为(84.07%±6.32%),中和率100%(13/13);雅培化学发光试剂复核阳性率为94.4%(17/18,阳性者中包括两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本);HBV DNA阳性率36.9%(7/19),略低于同期HBsAg低信号阳性者(6/14,42.9%,P<0.05);直接测序发现其中"a"区变异3例,分别为P142L、T126A及M133T/K160T;S蛋白亲水区非"a"决定簇变异1例,变异类型为L109Q。结论:ELISA差减分析法能有效地用于部分免疫逃逸变异HBsAg的临床诊断,其诊断能力视所依托试剂免疫逃逸变异检测能力不同而有显著差别。 展开更多

关键词 乙肝病毒 基因变异 HBSAG 免疫逃逸变异 ELISA

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中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体糖基结合域的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量：1

7

作者 杨燕 黄凰 +4 位作者 刘慎沛 张振华 王宝菊 田拥军 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期443-447,459,共6页

目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体。方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(D... 目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体。方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内诱导表达。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验、Western blot及免疫组织化学检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功构建了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2,目的蛋白可以高效表达,用其免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论:首次成功表达了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域多肽,且纯度高,免疫原性强,用其免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性好、效价高,为在HBV感染模型-中国旱獭体内进行肝脏疾病的靶向治疗奠定了实验基础。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 中国旱獭 多克隆抗体 靶向治疗

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SARS病毒S2蛋白的原核表达与DNA疫苗的构建 被引量：3

8

作者 黄红平 杨东亮 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期196-199,共4页

目的构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)S2基因的原核和真核表达质粒,研究该真核表达重组质粒作为DNA疫苗的可行性。方法采用RT-PCR技术从灭活的SARS冠状病毒RNA扩增得到SARS-CoV-S2基因片段,定向克隆入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pCDNA... 目的构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)S2基因的原核和真核表达质粒,研究该真核表达重组质粒作为DNA疫苗的可行性。方法采用RT-PCR技术从灭活的SARS冠状病毒RNA扩增得到SARS-CoV-S2基因片段,定向克隆入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pCDNA3.1+中,构建pET-28a-SARS-CoV-S2和pCDNA3.1-SARS-CoV-S2质粒。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组质粒pET-28a-SARS-CoV-S2在大肠埃希菌BL21(DE3)plysS中表达融合蛋白;并将重组pCDNA3.1-SARS-CoV-S2质粒免疫BALB/c小鼠,采用ELISA、Western blot的方法检测被免疫小鼠的抗体应答情况。结果应用RT-PCR技术,从灭活的SARS冠状病毒扩增得到大小约为998 bp SARS-CoV-S2基因片段后,构建了含SARS-CoV-S2基因片段的原核表达质粒pET-28a-SARS-CoV-S2和真核表达质粒pCDNA3.1-SARS-CoV-S2;通过IPTG诱导,重组pET-28a-SARS-CoV-S2质粒在表达菌BL21(DE3)plysS内表达S2融合蛋白;用纯化的重组真核表达质粒经基因枪免疫BALB/c小鼠后,获得了高效价的特异性抗体。结论成功构建了可表达SARS-CoV-S2融合蛋白的原核表达质粒pET-28a-SARS-CoV-S2。重组pCDNA3.1-SARS-CoV-S2质粒可作为DNA疫苗使被免疫小鼠产生明显的免疫应答。为建立SARS特异性血清学诊断方法和研制SARS DNA疫苗奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 SARS冠状病毒 原核表达 DNA疫苗

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高亲和力抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体制备及检测变异HBsAg方法的建立 被引量：1

9

作者 刘慎沛 田拥军 +1 位作者 杨燕 杨东亮 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期667-670,共4页

目的制备抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单克隆抗体,建立检测变异HBsAg的方法。方法用血源HB-sAg免疫BALB/c小鼠,制备可以识别变异HBsAg的抗-HBs单抗。筛选出可以较好识别变异HBsAg的单抗mAb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与2种HBsAg检... 目的制备抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单克隆抗体,建立检测变异HBsAg的方法。方法用血源HB-sAg免疫BALB/c小鼠,制备可以识别变异HBsAg的抗-HBs单抗。筛选出可以较好识别变异HBsAg的单抗mAb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与2种HBsAg检测试剂比较检测变异HBsAg的能力。对6份临床样品进行检测及序列分析,以证实方法的可靠性。结果经过筛选,得到1种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HB-sAg的单抗。检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg诊断试剂。结论制备的单抗可以用于ELISA检测变异HB-sAg,减少HBsAg变异株的漏检率。 展开更多

关键词 乙型肝炎表面抗原 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定

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热休克蛋白90抑制剂17-AAG对乙型肝炎病毒复制的抑制作用 被引量：1

10

作者 柯晓煜 王秋景 +5 位作者 余源 刘慎沛 张春燕 陈妍 杨燕 杨东亮 《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第6期435-438,共4页

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG... 目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG2细胞用17-AAG预处理2 h,同时用TGFβ或TβR抑制剂SB431542作用后,将HBV复制型质粒HBV1.3转染细胞,第4 d提取HBV核心颗粒,Southern Blot检测HBV复制中间体,ELISA检测上清HBsAg的表达。结果 17-AAG能够下调HepG2细胞PAI-1的表达,HepG2细胞内HBV复制中间体表达水平明显降低,HBsAg的表达亦受到抑制,但上调或阻断TGFβ信号通路对HBV复制影响不明显。结论 HSP90参与肝细胞内TGFβ信号通路的活化,其抑制剂17-AAG能够抑制HBV的复制与蛋白表达,但该抑制作用与TGFβ信号通路活化无关。 展开更多

关键词 HSP90热休克蛋白类 肝炎病毒 乙型 转化生长因子Β

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乙型肝炎病毒影响肝细胞对双链DNA诱导产生的Ⅰ型干扰素应答

11

作者 刘慎沛 杨燕 +4 位作者 黄红平 余源 张春燕 陈妍 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期150-154,共5页

目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)是否影响肝细胞对双链DNA(dsDNA)分子诱导产生的Ⅰ型干扰素应答。方法:以肝癌细胞HepG2以及整合有HBV基因的HepG2.2.15细胞为模型,转染dsDNA分子poly(dA-dT),实时定量RT-PCR检测IFN-β、干扰素应答基因IFIT1... 目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)是否影响肝细胞对双链DNA(dsDNA)分子诱导产生的Ⅰ型干扰素应答。方法:以肝癌细胞HepG2以及整合有HBV基因的HepG2.2.15细胞为模型,转染dsDNA分子poly(dA-dT),实时定量RT-PCR检测IFN-β、干扰素应答基因IFIT1与炎症因子TNF-α的表达,Western blot检测NF-κB、IRF3的核转位以及pTBK1的表达。HBV复制型质粒HBV1.3转染HepG2、HBV siRNA转染HepG2.2.15后,实时定量RT-PCR检测细胞中IFIT1的表达。结果:poly(dA-dT)能够诱导HepG2细胞产生Ⅰ型干扰素,在转染后6小时,IFN-β与IFIT1表达达高峰,而后下降,TNF-α的表达与对照组相比没有明显变化。Poly(dA-dT)转染后6小时能检测到TBK1的磷酸化与IRF3的核转位,但NF-κB的核转位不明显。HepG2.2.15细胞在poly(dA-dT)转染后12小时能检测到TNF-α的一过性表达,而IFN-β与IFIT1的表达在72小时才达到高峰,与之对应的:在转染后6小时,没有检测到TBK1的磷酸化与IRF3的核转位。poly(dA-dT)与HBV1.3共转HepG2后,HBV的蛋白表达受到抑制,而将HBV siRNA转染HepG2.2.15后,细胞对poly(dA-dT)的应答明显增强。结论:HepG2与HepG2.2.15能够应对ds-DNA的刺激,通过NF-κB与IRF3信号通路产生Ⅰ型干扰素或炎症因子,但HBV的存在影响了肝细胞对dsDNA产生的固有免疫应答。 展开更多

关键词 双链DNA 肝细胞来源细胞 固有免疫应答 乙型肝炎病毒

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抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备、性质鉴定及初步应用

12

作者 张振华 田拥军 +4 位作者 李磊 张珺 龚劲松 陆蒙吉 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期341-344,共4页

目的研制出能特异与土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHc）结合的单克隆抗体,使之能特异性地对土拨鼠肝炎病毒（WHV）进行检测,并可能应用于相关肝炎病毒的筛查。方法以原核表达的土拨鼠肝炎病毒重组核心蛋白（WHc 1～149氨基酸）免疫BALB/c小... 目的研制出能特异与土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHc）结合的单克隆抗体,使之能特异性地对土拨鼠肝炎病毒（WHV）进行检测,并可能应用于相关肝炎病毒的筛查。方法以原核表达的土拨鼠肝炎病毒重组核心蛋白（WHc 1～149氨基酸）免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组织化学（IHC）筛选、鉴定。结果筛选出5株（4B1E、6C5D、6C5C、6D1D、6D1G）能稳定分泌抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白抗体的杂交瘤细胞株。此5株单抗适用于ELISA、IHC、Western blot等方面的研究,与HBcAg有交叉反应,并且在部分中国旱獭的肝脏组织进行IHC检测呈现阳性反应。结论制备的5株单抗可用于土拨鼠肝炎病毒等嗜肝脱氧核糖核酸病毒的研究,可能在寻找新的相关肝炎病毒中起重要作用。 展开更多

关键词 土拨鼠肝炎病毒 核心蛋白 单克隆抗体 旱獭

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抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定

13

作者 张春燕 李方和 +4 位作者 龚劲松 陈妍 李时君 黄永国 张波 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期255-258,共4页

目的研制抗腺病毒载体（Adv）表面蛋白的单克隆抗体（McAb）。方法将Adv以Al（OH）3佐剂化，常规免疫BALB／c小鼠。采用细胞融合技术制备抗Adv McAb；采用ELISA、免疫细胞化学及Western blot法对McAb进行筛选与鉴定。结果共获得6株可稳... 目的研制抗腺病毒载体（Adv）表面蛋白的单克隆抗体（McAb）。方法将Adv以Al（OH）3佐剂化，常规免疫BALB／c小鼠。采用细胞融合技术制备抗Adv McAb；采用ELISA、免疫细胞化学及Western blot法对McAb进行筛选与鉴定。结果共获得6株可稳定分泌特异性McAb的细胞（A4H11、A8C7、F1H5、G1D2、G4E3、H2G8），其染色体数目为102～106条，所分泌McAb均属IgG1亚类，持续3个月适应培养仍能保持其稳定的抗体分泌能力。腹水抗体的ELISA效价在1：10^6～1：10^8之间；Western blot结果显示6株McAb均与来自腺病毒载体及野生3、5、7型腺病毒抗原提取物中分子量约为114kD的多肽反应，据此推测它们均是抗ADV-TK六邻体蛋白的McAb。结论成功制备出6株抗腺病毒载体六邻体单克隆抗体，为腺病毒载体应用于肿瘤基因治疗的临床前研究提供物质基础。 展开更多

关键词 基因治疗 腺病毒载体 单克隆抗体

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乙肝病毒表面抗原G145R变异单克隆抗体的制备及其初步鉴定 被引量：1

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作者 张小艳 龚劲松 +4 位作者 张波 刘静华 黄永国 张春燕 李方和 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期798-800,共3页

目的：研制抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的单克隆抗体（mAb）。方法：将重组乙肝病毒G145R变异表面抗原以Al（OH）3佐剂化,常规免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术制备抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的mAb。采用ELISA对制备物的效价与特异... 目的：研制抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的单克隆抗体（mAb）。方法：将重组乙肝病毒G145R变异表面抗原以Al（OH）3佐剂化,常规免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术制备抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的mAb。采用ELISA对制备物的效价与特异性进行鉴定,将其用于部分临床标本的检测,并与德国抗HBs mAb GL2.001进行比较。结果：获得1株稳定分泌抗G145R HBs mAb的杂交瘤细胞,命名为4-E12。该细胞株染色体数目为90条,所分泌mAb属IgG1亚类。其培养上清与腹水抗G145R HBs ELISA效价为（0.5-1）×10^3及（1-10）×10^6。经持续3月培养,低血清适应以及反复冻存与复苏后,其细胞增殖能力与上清抗G145R HBs效价与克隆化结束时大致相似。将其与德国抗G145R HBs mAb GL2.001相比,二者对重组乙肝表面抗原G145R变异S蛋白的反应性大致相当,灵敏度前者稍低于后者（分别为2.0μg/L与1.0μg/L）。对野生株表面抗原的检测前者在实验浓度范围内未显示有意义的反应信号,后者在与高浓度（1mg/L及以上）抗原反应时S/N值达到或高于3.9。将二者用于对一组特定患者的临床检测,其阳性率前者（17/200,8.5%）较后者（11.5%）略低,其差别经统计学比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：成功地制备了1株抗乙肝表面抗原G145R变异体的mAb,为乙肝G145R变异的基础、临床与流行病学研究提供了进一步的物质基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 免疫逃逸变异 HBSAG G145R变异 单克隆抗体

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顺铂对神经母细胞瘤细胞衰老的诱导作用及其机制 被引量：1

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作者 孙君杰 丁丽丽 +7 位作者 杨燕 周琦 曹雨华 李芬 王松咪 陈萍 胡群 刘爱国 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期649-653,共5页

目的研究化疗药物顺铂(cisplatin)诱导神经母细胞瘤细胞衰老及作用机制,探讨其是否能够通过诱导细胞衰老而抑制肿瘤生长。方法以N-MYC扩增的神经母细胞瘤细胞系(IMR32)为研究对象,噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞术检测不同浓度的顺铂(0.5... 目的研究化疗药物顺铂(cisplatin)诱导神经母细胞瘤细胞衰老及作用机制,探讨其是否能够通过诱导细胞衰老而抑制肿瘤生长。方法以N-MYC扩增的神经母细胞瘤细胞系(IMR32)为研究对象,噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞术检测不同浓度的顺铂(0.5、1、2、5μmol/L)对细胞生长和细胞周期、凋亡的影响。利用2μmol/L顺铂处理细胞48h后,采用衰老相关-β-半乳糖苷酶(senescence associated-β-galactosidase,SA-β-gal)染色方法检测细胞衰老情况。利用蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测衰老细胞内N-MYC蛋白的表达情况。结果 MTT和流式细胞术结果显示顺铂(2μmol/L)在短时间作用下可抑制肿瘤细胞增殖而不出现明显凋亡。顺铂(2μmol/L)处理IMR32细胞48h后进行SA-β-gal细胞染色,可见加药处理后细胞呈现蓝色,说明顺铂能够诱导神经母细胞瘤细胞出现衰老。收集顺铂(2μmol/L)作用不同时间段的细胞,利用Western blot分析N-MYC蛋白水平表达,结果显示顺铂处理后的衰老细胞中NMYC蛋白表达下调。结论顺铂可通过下调N-MYC蛋白表达,诱导神经母细胞瘤细胞衰老,进而抑制肿瘤生长。 展开更多

关键词 神经母细胞瘤 顺铂 细胞衰老 N-MYC蛋白

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