乙肝病毒感染不同阶段抗原肽特异性细胞毒性T淋巴细胞的初步研究 被引量：15

1

作者 杨新星 李东升 +2 位作者 周继光 杨东亮 郝友华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1496-1502,共7页

目的:为了阐明HBV感染不同阶段机体免疫功能的不同。方法:分别构建了我国最高频等位基因HLA-A*0201三种常见抗原肽表位(HBVcore18-27、pol575-583、env335-343)四聚体复合物,并用这些四聚体检测HBV感染外周血单个核细胞(PBMCs)中HLA-A*0... 目的:为了阐明HBV感染不同阶段机体免疫功能的不同。方法:分别构建了我国最高频等位基因HLA-A*0201三种常见抗原肽表位(HBVcore18-27、pol575-583、env335-343)四聚体复合物,并用这些四聚体检测HBV感染外周血单个核细胞(PBMCs)中HLA-A*0201限制性抗原特异性CD8^+T细胞的频率、功能及CD127的表达。结果:在大多数自限性HBV感染者的PBMCs中抗原特异性CD8^+T细胞的频率和增殖能力都高于慢性HBV感染者。在低病毒载量的免疫低复制期抗原特异性CD8^+T的数量和在高病毒载量、肝脏损害免疫清除期及免疫耐受期抗原特异性CD8^+T细胞频率是相似的,同病毒定量及ALT水平无显著相关性。慢性HBV感染者抗原特异性CD8^+T细胞增殖能力和病毒滴度呈反比。在自限性HBV感染患者抗原特异性CD8^+T细胞分泌IFN-γ的功能明显高于慢性HBV患者,在免疫耐受期基本丧失产生细胞因子的能力;HBV感染后不同免疫状态的HBs Ag水平不同,免疫耐受期最高,其次为免疫清除期、再活动期,低复制期的最低。而且随着HBs Ag水平下降,同HBV DNA的相关性也逐渐下降。慢性HBV感染者中CD8^+CD127^+T细胞要低于对照组及自限性感染组,特别是在HBe Ag阳性的免疫耐受期及免疫清除期组患者中CD8^+CD127^+T细胞比例更低。结论:慢性HBV感染中抗原特异性CD8^+T细胞的频率不是决定免疫应答的唯一因素,慢性乙肝患者体内记忆性的抗原特异性CD8^+T细胞并未被完全清除或缺失,这为治疗性疫苗和免疫恢复治疗提供了可行性。 展开更多

关键词 乙肝病毒 感染不同阶段 T淋巴细胞 免疫功能

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特异性细胞毒T淋巴细胞清除胞内乙肝病毒机制的研究进展 被引量：18

2

作者 郝友华 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期128-129,共2页

关键词 HBV CTL 特异性

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人ISG20基因的克隆、真核表达及其抗HBV效应的初步研究

3

作者 郝友华 叶笛 +1 位作者 张正茂 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期906-908,913,共4页

目的:克隆、体外真核表达ISG20基因并研究其抗乙肝病毒效应。方法:应用RT-PCR的方法从Hela细胞中扩增ISG20基因,构建HA-ISG20融合蛋白真核表达载体(pHA-ISG20),分别转染HepG2和HepG2·2·15细胞。Western blot检测HA-ISG20融合... 目的:克隆、体外真核表达ISG20基因并研究其抗乙肝病毒效应。方法:应用RT-PCR的方法从Hela细胞中扩增ISG20基因,构建HA-ISG20融合蛋白真核表达载体(pHA-ISG20),分别转染HepG2和HepG2·2·15细胞。Western blot检测HA-ISG20融合蛋白在HepG2细胞中的表达;ELISA方法检测转染和未转染pHA-ISG20的HepG2·2·15细胞中HBs抗原和HBe抗原的表达情况。结果:①克隆了ISG20基因,经测序与Genebank公布序列一致;②HA-ISG20融合蛋白真核表达载体经转染可在HepG2细胞中瞬时表达;③HA-ISG20融合蛋白可抑制HepG2·2·15细胞中HBs抗原和HBe抗原的表达。结论:初步证实ISG20蛋白产物可能具有抗HBV的效应。 展开更多

关键词 ISG20基因 抗HBV效应 克隆 真核表达

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HBx蛋白对α干扰素诱导的MxA蛋白表达的影响 被引量：5

4

作者 管世鹤 潘颖 +2 位作者 杨凯 沈继龙 杨东亮 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期797-800,共4页

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)HBx蛋白(HepatitisB virus X protein)对α干扰素(IFN-α)诱导的抗病毒蛋白的影响及相关机制。方法以表达HBx蛋白的重组质粒FL1-145HBx转染人肝胚瘤细胞株HepG2细胞,经IFN-α处理后,RT-PCR法分析细胞内抗病毒... 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)HBx蛋白(HepatitisB virus X protein)对α干扰素(IFN-α)诱导的抗病毒蛋白的影响及相关机制。方法以表达HBx蛋白的重组质粒FL1-145HBx转染人肝胚瘤细胞株HepG2细胞,经IFN-α处理后,RT-PCR法分析细胞内抗病毒蛋白MxA和JAK-STAT信号转导途径分子STAT1 mRNA表达水平,同时运用免疫印迹检测细胞内HBx、p-ERK、p-STAT1和t-STAT1等蛋白的表达。结果转染细胞内MxA、STAT1的mRNA和p-STAT1、t-STAT1的蛋白表达水平明显减少(P<0.05);而ERK抑制剂PD98059预处理后,转染细胞内MxA、STAT1 mRNA水平能够恢复至转染前的表达水平。结论 HBx蛋白很可能通过影响IFN-αJAK-STAT信号转导途径分子而抑制抗病毒蛋白MxA的表达;ERK信号转导途径的活化可能参与这一抑制过程。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 HBX蛋白 干扰素 MXA蛋白 信号转导途径 细胞株

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白介素13基因多态性与湖北汉族人群哮喘的关系 被引量：3

5

作者 习东 潘世秀 +1 位作者 崔天盆 吴健民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期757-760,764,共5页

目的 :为了探讨IL 13基因编码区精氨酸 (Arg) 110谷氨酰胺 (Gln)多态性是否与湖北地区汉族人群哮喘及血浆总IgE水平升高相关。方法 :采用PCR RFLP方法 ,检测湖北地区 4 3名哮喘患儿、4 5名成人哮喘患者、31名非哮喘儿童和 4 6名体检健... 目的 :为了探讨IL 13基因编码区精氨酸 (Arg) 110谷氨酰胺 (Gln)多态性是否与湖北地区汉族人群哮喘及血浆总IgE水平升高相关。方法 :采用PCR RFLP方法 ,检测湖北地区 4 3名哮喘患儿、4 5名成人哮喘患者、31名非哮喘儿童和 4 6名体检健康成人的IL 13外显子 4Arg110Gln的等位基因频率和基因型频率。用化学发光法测定血浆总IgE。结果 :IL 13基因4 2 5 7位等位基因a在儿童、成人中的频率分别为 0 39、0 32。IL 13基因Arg110Gln多态性的GlnGln型与儿童哮喘和血浆总IgE升高相关 (P分别为 0 0 30、0 0 0 0 9) ,但与成人哮喘、血浆总IgE水平之间无统计学意义 (P分别为 0 2 19、0 174 )。结论 :研究显示IL 13外显子 4Arg110Glng a单核苷酸多态性与湖北汉族儿童哮喘和血浆总IgE水平相关 ,但与成人哮喘、血浆总IgE水平之间无统计学意义。 展开更多

关键词 哮喘 免疫球蛋白E 白细胞介素13 Arg110Gln多态性 IL-13基因

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HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体的构建及初步检测应用 被引量：3

6

作者 杨新星 郝友华 +3 位作者 宋娜 陈玲 刘贽 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期943-945,955,共4页

目的:构建2种HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体,并初步用该2种四聚体检测针对不同抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)。方法:原核高效表达HLA-A*2402-BSP和β2m蛋白后,分别与乙型肝炎病毒抗原肽Pol756-764和Core117-125在体外复性折叠... 目的:构建2种HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体,并初步用该2种四聚体检测针对不同抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)。方法:原核高效表达HLA-A*2402-BSP和β2m蛋白后,分别与乙型肝炎病毒抗原肽Pol756-764和Core117-125在体外复性折叠成可溶性的HLA-A*2402抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体,分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成2种HBV抗原肽四聚体。最后进行流式细胞术检测。结果:Dot-ELISA和ELISA检测显示获得了2种具有天然构象的生物素化的HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物单体。结论:构建的2种四聚体可以检测乙型肝炎感染者体内特异性的CTL。 展开更多

关键词 HBV抗原肽-HLA-A＊2402单体 T淋巴细胞 生物素化

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土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

7

作者 张振华 田拥军 +4 位作者 李磊 王宝菊 孟忠吉 陆蒙吉 杨东亮 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期567-570,577,F0002,共6页

目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方... 目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原(1～149aa)纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。 展开更多

关键词 土拨鼠肝炎病毒 核心蛋白 原核表达 多克隆抗体 抗原抗体交叉反应

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抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：3

8

作者 刘嘉 丁红晖 +5 位作者 杨燕 胡斌 余源 黄红平 陆蒙吉 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期917-919,共3页

目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot... 目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot和免疫组织化学检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果:得到小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,效价达1∶105。纯化后的抗体用于Western blot可高特异性识别真核表达的H1b蛋白,并可用于免疫组织化学实验。结论:成功制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,该抗体具有较高的效价以及特异性,能区分ASG-PR大亚基的两种剪接异构体,从而为进一步研究H1b蛋白的生理功能及其在人类疾病中的意义提供了有利工具。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 多克隆抗体 剪接异构体

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截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白原核表达、多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：2

9

作者 王超 田拥军 +5 位作者 张娥娟 吴洪坤 刘嘉 王宝菊 赵西平 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期467-470,共4页

目的：构建截短型鸭乙型肝炎病毒（DHBV）核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体。方法：应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白（DH-BcAg 1～214aa）的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内，在宿主菌Rosetta（... 目的：构建截短型鸭乙型肝炎病毒（DHBV）核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体。方法：应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白（DH-BcAg 1～214aa）的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内，在宿主菌Rosetta（DE3）pLacI内进行诱导表达，运用Ni-NTA方法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BALB／c小鼠制备多克隆抗体，并采用酶联免疫吸附实验（ELISA），Western blot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果：成功地构建了含截短型DHBV核心区基因的质粒，并纯化得到了相对分子质量（Mr）约为28000的目的蛋白，用之免疫BALB／c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论：获得的重组截短型DHBV核心抗原纯度高，免疫反应性强；获得的多克隆抗体有较高的效价和较好的特异性，为DHBV的检测和研究奠定了实验基础。 展开更多

关键词 鸭乙型肝炎病毒 核心蛋白 原核表达载体 多克隆抗体

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淋巴细胞相关趋化因子及其受体与慢性病毒性肝炎 被引量：2

10

作者 丁红晖 郝友华 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期764-765,F0004,共3页

关键词 趋化因子 肝炎 病毒 慢性 淋巴细胞 TH1

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中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体糖基结合域的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量：1

11

作者 杨燕 黄凰 +4 位作者 刘慎沛 张振华 王宝菊 田拥军 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期443-447,459,共6页

目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体。方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(D... 目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体。方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内诱导表达。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验、Western blot及免疫组织化学检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功构建了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2,目的蛋白可以高效表达,用其免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论:首次成功表达了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域多肽,且纯度高,免疫原性强,用其免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性好、效价高,为在HBV感染模型-中国旱獭体内进行肝脏疾病的靶向治疗奠定了实验基础。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 中国旱獭 多克隆抗体 靶向治疗

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HBc-HLA-A＊ 1101-β2m复合物单体及其四聚体的制备和鉴定 被引量：1

12

作者 郝友华 杨新星 +4 位作者 丁红晖 宋娜 朱帆 喻植群 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期352-354,356,共4页

目的制备HBc-HLA-A ＊ 1101-β2m复合物单体和四聚体,并对其特异性进行了鉴定。方法原核高效表达的HLA-A ＊ 1101-BSP和β2m蛋白,在抗原肽（乙型肝炎病毒的核心蛋白HBc88-96）的存在下,体外复性折叠成可溶性的HLA-A ＊ 1101抗原肽复合... 目的制备HBc-HLA-A ＊ 1101-β2m复合物单体和四聚体,并对其特异性进行了鉴定。方法原核高效表达的HLA-A ＊ 1101-BSP和β2m蛋白,在抗原肽（乙型肝炎病毒的核心蛋白HBc88-96）的存在下,体外复性折叠成可溶性的HLA-A ＊ 1101抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体;然后将此复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体;最后用流式细胞仪检测分析该四聚体结合特异性CTL的能力。结果Western blot和Dot-ELISA检测显示所制备的HLA-A ＊ 1101抗原肽复合物单体具有天然构象,且可被生物素化;流式细胞仪分析显示所制备的四聚体可与HLA-A11^＋供者的抗原特异性CTL结合。结论成功制备了具有完整构象的生物素化HLA-A ＊ 1101抗原肽复合物单体;此四聚体可以特异检测抗原特异性的细胞毒性T细胞。 展开更多

关键词 HLA-A＊ 1101抗原肽复合物单体 四聚体

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人IL-10真核表达载体的构建及其在体内外的高效表达 被引量：1

13

作者 刘敏 谢利波 +3 位作者 郝友华 徐春利 胡韵 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期52-54,共3页

白细胞介素10（interleukin10，IL-10）是一种多效细胞因子，在免疫调控中发挥了重要作用，其在病毒持续性感染中的作用也日益受到关注。有研究显示HBeAg阳性患者血清高水平的IL-10和IL-12与早期自发的HBeAg血清转换相关[1]，也有研究... 白细胞介素10（interleukin10，IL-10）是一种多效细胞因子，在免疫调控中发挥了重要作用，其在病毒持续性感染中的作用也日益受到关注。有研究显示HBeAg阳性患者血清高水平的IL-10和IL-12与早期自发的HBeAg血清转换相关[1]，也有研究结果显示IL-10与病毒感染的持续与清除相关[2]。IL-10在肝脏疾病中还显示出抗炎和抗纤维化作用[3]。 展开更多

关键词 IL-10 真核表达 小鼠模型 分泌表达

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不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型及抗病毒效果的实验 被引量：4

14

作者 郝友华 李安意 +3 位作者 丁红晖 朱帆 赵西平 杨东亮 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第11期23-26,共4页

目的探讨不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型的影响因素,观察应用该模型抗病毒的效果。方法采集鸭血清,应用PCR方法定性检测鸭血清中病毒DNA;定量PCR方法检测鸭血清中病毒DNA载量变化;用抗病毒药物处理,观察其在鸭DHBV感染模型中的抗病... 目的探讨不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型的影响因素,观察应用该模型抗病毒的效果。方法采集鸭血清,应用PCR方法定性检测鸭血清中病毒DNA;定量PCR方法检测鸭血清中病毒DNA载量变化;用抗病毒药物处理,观察其在鸭DHBV感染模型中的抗病毒效果。结果不同种鸭DHBV自然感染率不同,樱桃谷鸭为8.75%,湖北麻鸭两个批次分别为17.80%和10.68%;静脉注射和腹腔注射两途径均能致雏鸭感染DHBV,静脉注射感染率80%,腹腔注射感染率65%;鸭感染DHBV后,体内病毒载量维持在106～108copies/mL,可持续20 d以上;抗病毒药物处理后,在不同DHBV模型中其抗病毒效果变化趋势一致。结论鸭的种类和人工感染途径可影响DHBV感染率;雏鸭感染DHBV后其体内有持续性的病毒血症;DHBV感染模型是药物抗病毒研究较好模型。 展开更多

关键词 鸭乙型肝炎病毒 感染模型

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小鼠TIM-3原核表达载体的建立及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

15

作者 马德强 郝友华 +5 位作者 刘敏 徐春利 郭艳 陈悦 陆孟吉 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期158-162,共5页

目的:克隆小鼠TIM-3基因,构建原核表达载体,制备相应的多克隆抗体并初步鉴定。方法:以小鼠脾细胞总RNA为模板,用RT-PCR方法,扩增得到TIM-3基因编码区,构建pRSET-B-TIM-3原核表达载体;经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白;然后常规免疫家兔,制... 目的:克隆小鼠TIM-3基因,构建原核表达载体,制备相应的多克隆抗体并初步鉴定。方法:以小鼠脾细胞总RNA为模板,用RT-PCR方法,扩增得到TIM-3基因编码区,构建pRSET-B-TIM-3原核表达载体;经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白;然后常规免疫家兔,制备多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体的效价,用Western blot、免疫组化、流式细胞术检测抗体的特异性。结果:成功构建的原核表达载体pRSET-B-TIM-3在大肠杆菌中诱导后可以高效表达TIM-3蛋白;免疫获得的多克隆抗体经过ELISA检测,抗体效价为1∶320 000,经Western blot、免疫组化和流式细胞术等鉴定,抗体的特异性较好。结论:成功克隆出小鼠的TIM-3基因,构建了原核表达载体,制备的兔抗小鼠TIM-3多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性。 展开更多

关键词 TIM-3 蛋白 多克隆抗体

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热休克蛋白90抑制剂17-AAG对乙型肝炎病毒复制的抑制作用 被引量：1

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作者 柯晓煜 王秋景 +5 位作者 余源 刘慎沛 张春燕 陈妍 杨燕 杨东亮 《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第6期435-438,共4页

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG... 目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG2细胞用17-AAG预处理2 h,同时用TGFβ或TβR抑制剂SB431542作用后,将HBV复制型质粒HBV1.3转染细胞,第4 d提取HBV核心颗粒,Southern Blot检测HBV复制中间体,ELISA检测上清HBsAg的表达。结果 17-AAG能够下调HepG2细胞PAI-1的表达,HepG2细胞内HBV复制中间体表达水平明显降低,HBsAg的表达亦受到抑制,但上调或阻断TGFβ信号通路对HBV复制影响不明显。结论 HSP90参与肝细胞内TGFβ信号通路的活化,其抑制剂17-AAG能够抑制HBV的复制与蛋白表达,但该抑制作用与TGFβ信号通路活化无关。 展开更多

关键词 HSP90热休克蛋白类 肝炎病毒 乙型 转化生长因子Β

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RT-PCR扩增人抗HBsAg抗体Fab段基因

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作者 唐莉 陈知水 +5 位作者 魏来 朱学海 翁国斌 习东 严伟明 陈忠华 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期177-179,共3页

目的　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的方法从少量外周血中扩增抗HBsAg抗体重链Fd和κ轻链基因。方法　用RNAex试剂提取细胞总RNA ,以Olig (dT)引导合成cDNA第一链 ,再经PCR扩增的方法 ,以重链Fd和κ轻链基因简并引物 ,直接从人外... 目的　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的方法从少量外周血中扩增抗HBsAg抗体重链Fd和κ轻链基因。方法　用RNAex试剂提取细胞总RNA ,以Olig (dT)引导合成cDNA第一链 ,再经PCR扩增的方法 ,以重链Fd和κ轻链基因简并引物 ,直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗HBsAg抗体重链Fd和κ轻链基因。 结果　扩增出分子量为 70 0bp的抗HBsAg抗体重链Fd和κ轻链基因。 展开更多

关键词 RT-PCR 基因扩增 抗HBsAg抗体 腺相关病毒载体 外周血 抗体基因 肝移植

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抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备、性质鉴定及初步应用

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作者 张振华 田拥军 +4 位作者 李磊 张珺 龚劲松 陆蒙吉 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期341-344,共4页

目的研制出能特异与土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHc）结合的单克隆抗体,使之能特异性地对土拨鼠肝炎病毒（WHV）进行检测,并可能应用于相关肝炎病毒的筛查。方法以原核表达的土拨鼠肝炎病毒重组核心蛋白（WHc 1～149氨基酸）免疫BALB/c小... 目的研制出能特异与土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHc）结合的单克隆抗体,使之能特异性地对土拨鼠肝炎病毒（WHV）进行检测,并可能应用于相关肝炎病毒的筛查。方法以原核表达的土拨鼠肝炎病毒重组核心蛋白（WHc 1～149氨基酸）免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组织化学（IHC）筛选、鉴定。结果筛选出5株（4B1E、6C5D、6C5C、6D1D、6D1G）能稳定分泌抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白抗体的杂交瘤细胞株。此5株单抗适用于ELISA、IHC、Western blot等方面的研究,与HBcAg有交叉反应,并且在部分中国旱獭的肝脏组织进行IHC检测呈现阳性反应。结论制备的5株单抗可用于土拨鼠肝炎病毒等嗜肝脱氧核糖核酸病毒的研究,可能在寻找新的相关肝炎病毒中起重要作用。 展开更多

关键词 土拨鼠肝炎病毒 核心蛋白 单克隆抗体 旱獭

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截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

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作者 王超 田拥军 +5 位作者 龚劲松 张娥娟 刘嘉 王宝菊 赵西平 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期740-742,共3页

目的:制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHB-cAg)特异性结合的单克隆抗体(mAb),使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)进行检测。方法:以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg1-214)免疫BALB/c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融... 目的:制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHB-cAg)特异性结合的单克隆抗体(mAb),使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)进行检测。方法:以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg1-214)免疫BALB/c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组织化学(IHC)筛选、鉴定。结果:筛选出3株(3H4、4A11、5A12)能有效分泌抗鸭乙肝病毒核心抗原的杂交瘤细胞株。该mAb可用于ELISA、IHC和Westernblot研究。结论:获得了3株有效分泌抗核心抗原的mAb,可用于鸭乙肝病毒相关肝病组织与血清的检测。 展开更多

关键词 鸭乙型肝炎病毒 核心蛋白 单克隆抗体

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一种新的土拨鼠α干扰素基因分型方法的建立及其意义

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作者 卢银平 徐飏 +3 位作者 王宝菊 董继华 陆蒙吉 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期551-554,共4页

目的:建立新的土拨鼠α干扰素(IFN-α)基因分型方法,分析急性和慢性土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepati-tis virus,WHV)感染的土拨鼠肝细胞中不同型别的IFN-α基因表达谱及其意义。方法:利用已知序列和基因型的土拨鼠IFN-α基因克隆质粒,... 目的:建立新的土拨鼠α干扰素(IFN-α)基因分型方法,分析急性和慢性土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepati-tis virus,WHV)感染的土拨鼠肝细胞中不同型别的IFN-α基因表达谱及其意义。方法:利用已知序列和基因型的土拨鼠IFN-α基因克隆质粒,建立基于土拨鼠IFN-α基因序列的限制性片段长度多态性的土拨鼠IFN-α基因分型方法。PolyIC体外刺激正常土拨鼠外周血单个核细胞(PBMC),调查正常土拨鼠PBMC受PolyIC刺激后IFN-α基因的表达谱。提取急性和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠肝组织mRNA,RT-PCR扩增土拨鼠IFN-α基因,分子克隆后调查急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因表达谱。结果:建立了土拨鼠IFN-α基因限制性片段长度多态性分型方法。急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因的表达谱明显不同于正常动物的表达谱,假基因表达所占比例大。结论:新建立的土拨鼠IFN-α基因分型方法可用于分析土拨鼠不同组织中IFN-α的基因表达谱。 展开更多

关键词 土拨鼠 Α干扰素 基因分型

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