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负载不同形式肝癌抗原的树突状细胞抑瘤功能的比较被引量：5: 1; 作者贺兰湘张桂梅冯作化《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期100-102,117,共4页; 　目的:探讨不同形式的肝癌抗原修饰的树突状细胞(DC)的抑瘤功能。方法:分别用肝癌H22冻融抗原、H22小分子抗原肽和Hsp70-H22抗原肽复合物修饰DC;用MTT比色法分析DC激活的CTL对H22细胞的杀伤能力,并用RT PCR法测定脾脏T细胞中IFN-γmRN... 展开更多; 关键词树突状细胞 Hsp70-肽复合物 IFN-Γ 肝癌; 在线阅读下载PDF 职称材料

NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性被引量：2: 2; 作者郑丽端童强松 +3 位作者杨渝珍侯晓华杨秀萍董继华《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期625-630,共6页; 为克隆小鼠胎肝激酶-1(fetal liver kinase-1,FLK-1)基因上游启动子序列,并观察其不同截短片段在小鼠血管内皮细胞中的启动子活性,以小鼠全基因组为模板,通过PCR扩增方法获得-258^+299bp、-96^+299bp、-71^+299bp、-36^+299bp大小的FLK-... 展开更多; 关键词胎肝激酶-1 血管内皮细胞启动子报告基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

人类REL M-beta基因启动子的结构与功能分析被引量：2: 3; 作者郑丽端童强松 +3 位作者杨渝珍侯晓华杨秀萍董继华《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期548-553,共6页; 为克隆人类抵抗素样分子β(resistin-like molecule beta,RELMβ)基因的上游启动子序列,并观察其不同截短片段的启动子活性,以人类基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-871～+50bp、-729～+50bp、-471～+50bp、-438～+50bp、-371～+50b... 展开更多; 关键词抵抗素样分子家族(RELMβ)基因启动子报告基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

Survivin反义核酸结合位点的体外筛选及鉴定: 4; 作者郑丽端童强松 +4 位作者杨渝珍陈方敏曾甫清汪良董继华《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期215-220,共6页; 合成 2 0mer随机寡核苷酸文库 ,与体外转录出的全长survivincRNA杂交 ,RNaseH酶切割后 ,经引物延伸、放射自显影 ,共筛选出 13个针对survivin基因的反义结合位点 (antisenseaccessiblesites ,AAS) .运用RNADraw软件分析、选定具有显著... 展开更多; 关键词 SURVIVIN基因反义结合位点随机寡核苷酸文库基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

H22肿瘤细胞aptamer的筛选与结构分析被引量：2: 5; 作者周宇凡张桂梅 +2 位作者冯作化袁野张志仁《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期841-844,909,共5页; 目的:获得与H22肿瘤细胞特异性结合的aptamer。方法:利用SELEX技术,以小鼠DC细胞为反筛选细胞,以H22肿瘤细胞为靶细胞,从体外合成的80bp随机单链DNA文库中筛选出能与H 22肿瘤细胞特异结合的aptamer。采用荧光标记引物法检测aptamer与H 2... 展开更多; 关键词 H22肿瘤细胞 SELEX APTAMER; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名负载不同形式肝癌抗原的树突状细胞抑瘤功能的比较被引量：5: 1; 作者贺兰湘张桂梅冯作化; 机构华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室湖北省肿瘤研究所; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期100-102,117,共4页; 基金国家重点基础研究发展规划 ( 973 )资助 (No.2002CB513100); 文摘　目的:探讨不同形式的肝癌抗原修饰的树突状细胞(DC)的抑瘤功能。方法:分别用肝癌H22冻融抗原、H22小分子抗原肽和Hsp70-H22抗原肽复合物修饰DC;用MTT比色法分析DC激活的CTL对H22细胞的杀伤能力,并用RT PCR法测定脾脏T细胞中IFN-γmRNA的表达水平;用不同修饰的DC免疫小鼠,观察其对H22肝癌的生长抑制作用。结果:单独的H22肝癌抗原肽修饰的DC不能激活CTL。Hsp70-H22肽复合物修饰的DC激活CTL的能力强于H22肝癌冻融抗原修饰的DC,对H22细胞的杀伤率分别为 47. 3%和 18. 3%。各组T细胞中IFN-γ表达水平的变化与杀伤率的变化相一致。用H22肝癌冻融抗原和Hsp70 -H22肽复合物修饰的DC免疫小鼠后,均可抑制H22细胞生长,但后者的抑制作用更强,成瘤率仅 40%。其他各组的成瘤率均为100%。结论:Hsp70-H22肽复合物是一种DC的强致敏物,可通过激活CTL、诱导CD4+T细胞分化成Th1型细胞而参与肝癌的免疫排斥。; 关键词树突状细胞 Hsp70-肽复合物 IFN-Γ 肝癌; 分类号 R735.7 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性被引量：2: 2; 作者郑丽端童强松杨渝珍侯晓华杨秀萍董继华; 机构华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科华中科技大学同济医学院附属协和医院外科华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期625-630,共6页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.30200284 No.30600278)~~; 文摘为克隆小鼠胎肝激酶-1(fetal liver kinase-1,FLK-1)基因上游启动子序列,并观察其不同截短片段在小鼠血管内皮细胞中的启动子活性,以小鼠全基因组为模板,通过PCR扩增方法获得-258^+299bp、-96^+299bp、-71^+299bp、-36^+299bp大小的FLK-1启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic,构建荧光素酶报告基因载体,并制备NF-κB结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体介导下,报告基因载体瞬时转染小鼠血管内皮细胞株SVEC4-10.结果发现,在小鼠血管内皮细胞中,各FLK-1启动子片段均有活性;-71^-36bp区存在FLK-1启动子的核心调控元件.针对该区域NF-κB结合位点进行突变或缺失,能导致启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明该区段能结合转录因子NF-κB.结果提示,成功克隆了在血管内皮细胞中具有活性的FLK-1上游启动子序列,NF-κB是决定其基本活性的重要转录因子,为进一步研究FLK-1基因的转录调控机制奠定了基础.; 关键词胎肝激酶-1 血管内皮细胞启动子报告基因; Keywords fetal liver kinase-1 vascular endothelial cell promoter reporter gene; 分类号 R57 [医药卫生—消化系统]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人类REL M-beta基因启动子的结构与功能分析被引量：2: 3; 作者郑丽端童强松杨渝珍侯晓华杨秀萍董继华; 机构华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科华中科技大学同济医学院附属协和医院外科华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期548-553,共6页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.30200284 No.30600278)~~; 文摘为克隆人类抵抗素样分子β(resistin-like molecule beta,RELMβ)基因的上游启动子序列,并观察其不同截短片段的启动子活性,以人类基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-871～+50bp、-729～+50bp、-471～+50bp、-438～+50bp、-371～+50bp大小的RELMβ启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子CDX-2结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染人胚肾293细胞、结肠癌HCT116和SW480细胞、宫颈癌HeLa细胞.结果发现,各RELMβ启动子片段在293、HCT116、SW480细胞中均有活性,但在HeLa细胞中活性缺失;-471～-438bp区存在RELMβ启动子的核心调控元件.针对该区域CDX-2转录因子结合位点进行突变,能导致RELMβ启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合CDX-2.结果提示,成功克隆了具有活性的RELMβ启动子序列,CDX-2为其重要的转录因子,为研究RELMβ基因的转录调控机制奠定了实验基础.; 关键词抵抗素样分子家族(RELMβ)基因启动子报告基因; Keywords resistin-like molecule beta gene promoter reporter gene; 分类号 R57 [医药卫生—消化系统]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Survivin反义核酸结合位点的体外筛选及鉴定: 4; 作者郑丽端童强松杨渝珍陈方敏曾甫清汪良董继华; 机构华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科华中科技大学同济医学院附属协和医院外科华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期215-220,共6页; 基金国家自然科学基金资助项目 (No .3 0 2 0 0 2 84) 华中科技大学科研基金资助项目~~; 文摘合成 2 0mer随机寡核苷酸文库 ,与体外转录出的全长survivincRNA杂交 ,RNaseH酶切割后 ,经引物延伸、放射自显影 ,共筛选出 13个针对survivin基因的反义结合位点 (antisenseaccessiblesites ,AAS) .运用RNADraw软件分析、选定具有显著茎环结构的 4个位点 ,合成互补性反义寡核苷酸AS ODN1、AS ODN2 、AS ODN3 、AS ODN4并转染高表达survivin基因的胃癌细胞株MKN 4 5 .逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测发现MKN 4 5细胞的survivinmRNA和蛋白水平均有显著的下降 ;MTT比色法证实 6 0 0nmol LAS ODN1～AS ODN4转染 2 4h后细胞生长受到明显抑制 ,透射电镜、annexinⅤ FITC和PI双染色流式细胞术均检测到细胞凋亡 .说明运用随机寡核苷酸文库 RNaseH酶切割与计算机分析相结合的方法 ,在体外有效筛选出survivin的反义核酸结合位点 ,其相应的反义寡核苷酸能阻断survivin基因的生物学功能 .; 关键词 SURVIVIN基因反义结合位点随机寡核苷酸文库基因表达; Keywords survivin gene, antisense accessible sites,random oligonucleotide library, gene expression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] Q52 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名H22肿瘤细胞aptamer的筛选与结构分析被引量：2: 5; 作者周宇凡张桂梅冯作化袁野张志仁; 机构重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室; 出处《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期841-844,909,共5页; 文摘目的:获得与H22肿瘤细胞特异性结合的aptamer。方法:利用SELEX技术,以小鼠DC细胞为反筛选细胞,以H22肿瘤细胞为靶细胞,从体外合成的80bp随机单链DNA文库中筛选出能与H 22肿瘤细胞特异结合的aptamer。采用荧光标记引物法检测aptamer与H 22肿瘤细胞的亲和力。所获得的aptamer采用MACAWv2.05软件进行aptamer序列的一级结构同源序列比较,用DNASIS v2.5软件计算分析序列最低二级结构能量值,获得其二级结构模拟图。结果:本实验设计的文库序列:5′-CGTCGCTGCACATTCCG-N46-CGCACAGCTGGGA GTAC-3′具有较高的扩增效率,适合于aptamer与以细胞为靶物质的筛选。经过11轮循环筛选,随机单链DNA文库与靶细胞结合的荧光强度从1%上升到59%,结合曲线进入平台期,表明结合已基本处于稳定状态,因此可以判断aptamer与靶细胞的结合基本已经处于饱和状态。对所获得的32个aptam er进行测序,然后进行一级结构和二级结构分析。一级结构分析获得5个保守序列:AGGGA、AGAAGG、GTGAXAA、ATAGT、CAAGG,其余10个aptamer无同源序列。二级结构分析表明,aptamer形成的茎环、凸环结构可能是与H 22肿瘤细胞特异性结合的结构基础。亲和力检测结果表明第24号aptamer具有最强的亲和力。结论:利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与H22肿瘤细胞特异结合的aptamer,其一级和二级结构与亲和力密切相关。; 关键词 H22肿瘤细胞 SELEX APTAMER; Keywords H22 tumor cell SELEX Aptamer; 分类号 R73 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	负载不同形式肝癌抗原的树突状细胞抑瘤功能的比较	贺兰湘张桂梅冯作化	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2005	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性	郑丽端童强松杨渝珍侯晓华杨秀萍董继华	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	人类REL M-beta基因启动子的结构与功能分析	郑丽端童强松杨渝珍侯晓华杨秀萍董继华	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	Survivin反义核酸结合位点的体外筛选及鉴定	郑丽端童强松杨渝珍陈方敏曾甫清汪良董继华	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2005	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	H22肿瘤细胞aptamer的筛选与结构分析	周宇凡张桂梅冯作化袁野张志仁	《重庆医科大学学报》 CAS CSCD	2006	2	在线阅读下载PDF 职称材料