目的 构建融合基因pcDNA3 1/His B IL 2 G1,为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础。方法采用PCR从含有人源IL 2的质粒中扩增出IL 2片段 ,将人源IL 2插入真核表达载体pcDNA3 1/His B中 ,构建的质粒命名为pcDNA3 1/His B IL 2...目的 构建融合基因pcDNA3 1/His B IL 2 G1,为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础。方法采用PCR从含有人源IL 2的质粒中扩增出IL 2片段 ,将人源IL 2插入真核表达载体pcDNA3 1/His B中 ,构建的质粒命名为pcDNA3 1/His B IL 2。同样采用PCR扩增汉坦病毒H82 0 5株G1基因片段 ,将回收的G1片段经双酶切插入到pcD NA3 1/His B IL 2 ,构建成新的质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1。采用脂质体介导包裹 ,转入NIH3T3细胞中进行瞬时表达 ;采用原位杂交观察细胞内的基因表达 ,SDS PAGE法作重组质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1瞬时表达产物的鉴定。结果 融合基因可转录并表达一分子量为 78kD左右的蛋白 ,对照组则未见电泳条带出现。结论 成功构建pcDNA3 1/His B IL 2 G1融合基因 。展开更多
为探讨腺病毒介导肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)基因转染诱导树突细胞 (DCs)趋化因子受体差异性表达 ,分别用 10 0 MOI的 Ad V- TNF- α和 Ad V- p L p A (无外源基因插入 )感染小鼠树突细胞 (m DCs) ,经流式细胞仪检测细胞表型变化 ,RNA...为探讨腺病毒介导肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)基因转染诱导树突细胞 (DCs)趋化因子受体差异性表达 ,分别用 10 0 MOI的 Ad V- TNF- α和 Ad V- p L p A (无外源基因插入 )感染小鼠树突细胞 (m DCs) ,经流式细胞仪检测细胞表型变化 ,RNA酶保护实验检测其趋化因子受体表达 ,体内、体外细胞趋化试验分析比较其迁移差异。发现 Ad V- TNF-α感染 m DCs后 CD11b、CD40、CD86 ,ICAM- 1以及 CCR7受体表达较对照组明显增高 ,CCR2受体表达量却下调 ;体外细胞趋化试验表明 DCTNF -α对 MIP- 3β(CCR7配体 )迁移应答增强 ,体内细胞趋化试验显示 DCTNF-α淋巴结趋化迁移效率较空白对照组和 Ad V- p L p A感染组分别增高 7倍和 3倍。提示 :Ad V- TNF- α感染促使 m DCs成熟 。展开更多
文摘目的 构建融合基因pcDNA3 1/His B IL 2 G1,为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础。方法采用PCR从含有人源IL 2的质粒中扩增出IL 2片段 ,将人源IL 2插入真核表达载体pcDNA3 1/His B中 ,构建的质粒命名为pcDNA3 1/His B IL 2。同样采用PCR扩增汉坦病毒H82 0 5株G1基因片段 ,将回收的G1片段经双酶切插入到pcD NA3 1/His B IL 2 ,构建成新的质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1。采用脂质体介导包裹 ,转入NIH3T3细胞中进行瞬时表达 ;采用原位杂交观察细胞内的基因表达 ,SDS PAGE法作重组质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1瞬时表达产物的鉴定。结果 融合基因可转录并表达一分子量为 78kD左右的蛋白 ,对照组则未见电泳条带出现。结论 成功构建pcDNA3 1/His B IL 2 G1融合基因 。
文摘为探讨腺病毒介导肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)基因转染诱导树突细胞 (DCs)趋化因子受体差异性表达 ,分别用 10 0 MOI的 Ad V- TNF- α和 Ad V- p L p A (无外源基因插入 )感染小鼠树突细胞 (m DCs) ,经流式细胞仪检测细胞表型变化 ,RNA酶保护实验检测其趋化因子受体表达 ,体内、体外细胞趋化试验分析比较其迁移差异。发现 Ad V- TNF-α感染 m DCs后 CD11b、CD40、CD86 ,ICAM- 1以及 CCR7受体表达较对照组明显增高 ,CCR2受体表达量却下调 ;体外细胞趋化试验表明 DCTNF -α对 MIP- 3β(CCR7配体 )迁移应答增强 ,体内细胞趋化试验显示 DCTNF-α淋巴结趋化迁移效率较空白对照组和 Ad V- p L p A感染组分别增高 7倍和 3倍。提示 :Ad V- TNF- α感染促使 m DCs成熟 。
