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两型TNF-α对单核细胞系U937细胞功能的影响 被引量：4
1
作者 辛利军 李卓娅 +4 位作者 姜晓丹 冯玮 徐勇 熊平 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期319-321,共3页
目的 :比较两型TNF α对单核细胞系U937细胞功能的影响 ,以探讨跨膜型TNF α在炎症中的作用。方法 :通过吞噬、RT PCR、Westernblot及FACS等方法 ,比较两型TNF α对U937细胞生物学功能 (包括吞噬、细胞因子mRNA、胞质IκB α及ICAM 1表... 目的 :比较两型TNF α对单核细胞系U937细胞功能的影响 ,以探讨跨膜型TNF α在炎症中的作用。方法 :通过吞噬、RT PCR、Westernblot及FACS等方法 ,比较两型TNF α对U937细胞生物学功能 (包括吞噬、细胞因子mRNA、胞质IκB α及ICAM 1表达等 )的影响。结果 :分泌型TNF α可明显促进U937细胞吞噬功能 ,使TNF α、IL 1β及IL 8mRNA积累增加 ,促进胞质IκB α降解及提高黏附分子ICAM 1的表达 ;而跨膜型TNF α对上述U937细胞的生物学功能则无明显影响。当二者联用时 ,跨膜型TNF α与分泌型TNF α亦无协同作用。结论 :分泌型TNF α对U937细胞具有明显地激活作用 ;而跨膜型TNF α则无影响 ,提示两型TNF α在炎症过程中的作用不同。 展开更多
关键词 跨膜型TNF—α sTNF—α U937细胞 RT—PCR IκB—α ICAM—1
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尿酸对树突状细胞成熟及免疫功能的影响 被引量：9
2
作者 马晓军 田德英 +1 位作者 许东 朱慧芬 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期95-98,共4页
目的:观察尿酸(UA)对体外培养的小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)成熟及免疫功能的影响。方法:体外分离培养小鼠骨髓来源的DC,使用GM-CSF、IL-4、LPS,并加入UA诱导培养DC。用流式细胞仪技术检测BMDCs细胞表面分子表达,用MTT法检测BMDCs与... 目的:观察尿酸(UA)对体外培养的小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)成熟及免疫功能的影响。方法:体外分离培养小鼠骨髓来源的DC,使用GM-CSF、IL-4、LPS,并加入UA诱导培养DC。用流式细胞仪技术检测BMDCs细胞表面分子表达,用MTT法检测BMDCs与同基因小鼠T淋巴细胞的混合淋巴细胞反应;ELISA法测定DC培养上清IL-12的水平。结果:通过鉴定体外成功诱导培养出BMDCs。尿酸浓度为400mg/L或200mg/L时能增强DC细胞表面CD11c、CD83、CD86、IA/IE分子表达率;提高IL-12分泌水平(P<0.05);DC与T淋巴细胞比例分别为5∶1、10∶1、20∶1时,能增强DC刺激T细胞增殖能力(P<0.05);尿酸浓度为70mg/L时,细胞表面分子表达、IL-12分泌水平、刺激T细胞增殖作用与对照组比较均无明显差别(P>0.05)。结论:对体外培养诱导扩增的BMDCs,UA可促进分化与成熟,提高表面共刺激分子表达;增强其刺激T细胞增殖能力和IL-12分泌水平。UA的作用与浓度密切相关。 展开更多
关键词 尿酸 树突细胞 小鼠 淋巴细胞 白细胞介素12
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与肝癌细胞系HepG2特异性结合单链抗体的筛选与序列分析 被引量：3
3
作者 余冰 倪明 +6 位作者 雷萍 李文涵 朱慧芬 张悦 唐珍洁 程欣 沈关心 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期179-182,共4页
目的从人源噬菌体抗体库中筛选与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体,为寻找肝癌细胞表面特异性标志及靶向研究奠定基础。方法以正常肝细胞系L02为阴性筛选细胞,以肝癌细胞系HepG2为阳性筛选靶细胞,从人源噬菌体抗体库(Griffin.1Libra... 目的从人源噬菌体抗体库中筛选与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体,为寻找肝癌细胞表面特异性标志及靶向研究奠定基础。方法以正常肝细胞系L02为阴性筛选细胞,以肝癌细胞系HepG2为阳性筛选靶细胞,从人源噬菌体抗体库(Griffin.1Library)经三轮筛选后,阳性菌质粒PCR确定其中含有单链抗体基因的克隆,通过细胞ELISA及FCM筛选特异性的单链抗体噬菌体,通过ABI3730全自动荧光测序仪测序,并通过GeneBank比对进行同源性分析,IPTG诱导可溶性单链抗体表达,并检测其与肝癌细胞株结合的特异性。结果获得了2个特异性较高的阳性噬菌体单个克隆。经DNA测序后,在Genebank中与人的免疫球蛋白库进行比对,并用IMGTVQuest软件进行分析,确定为2个插入序列不同的单链抗体片段。经细胞ELISA证明其阳性克隆菌培养上清可与肝癌细胞株特异性结合。获得的序列成功登陆Genebank,序列号为AY686498AY686499。结论从人源噬菌体抗体库中筛选到与肝癌细胞系HepG2特异性结合的具有功能活性的单链抗体,为进一步寻找肝癌细胞表面特异性抗原及靶向研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人源噬菌体抗体库 单链抗体 阴性筛选 阳性筛选 生物淘洗
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可与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体的表达及其特性 被引量：2
4
作者 余冰 倪明 +4 位作者 朱慧芬 张悦 杨静 邵静芳 沈关心 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期714-716,共3页
目的:在原核细胞中表达经噬菌体抗体库筛选可与HepG2细胞特异性结合的单链抗体(scFv),并对其特性进行鉴定。方法:采用正常肝细胞系L02和肝癌细胞系HepG2,从人源噬菌体抗体库中筛选可与HepG2细胞特异结合的scFv。对scFv DNA测序后,以其... 目的:在原核细胞中表达经噬菌体抗体库筛选可与HepG2细胞特异性结合的单链抗体(scFv),并对其特性进行鉴定。方法:采用正常肝细胞系L02和肝癌细胞系HepG2,从人源噬菌体抗体库中筛选可与HepG2细胞特异结合的scFv。对scFv DNA测序后,以其阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,在IPTG诱导下表达scFv并以金属离子螯和层析(IMAC)进行纯化,用100g/L SDS-PAGE、Western blot及ELISA分析纯化的scFv。将纯化的scFv与HepG2细胞共孵育后,观察其对细胞生长的影响。结果:经筛选获得的2个相对特异性的scFv,分别命名为SLH04及SLH10。经IPTG诱导获得可溶性scFv的表达。Western blot分析证明,表达产物的相对分子质量(Mr)均为36000左右,与理论预期值相符。ELISA检测表明,纯化的scFv能与HepG2细胞特异性结合,并抑制HepG2细胞的生长。结论:从人源噬菌体抗体库中,筛选出能与HepG2细胞特异性结合的scFv,并在大肠杆菌中表达,有望用于肝癌生物治疗的实验研究。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 金属离子螯和层析 生物淘洗
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DC单抗调节供、受体大鼠免疫功能和抑制排斥反应的研究 被引量：2
5
作者 邵启祥 尹岚 +4 位作者 王胜军 许化溪 刘恭植 曹友清 沈关心 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期467-470,共4页
目的 :研究体内应用大鼠DC单抗WZD3对大鼠免疫状态的影响 ,在此基础上应用DC单抗同时处理供、受体 ,进行同种异体心脏移植 ,研究单抗诱导供、受体间双向移植耐受可能机理 ,为联合应用单抗和耐受性DC诱导移植免疫耐受奠定基础。方法 :用... 目的 :研究体内应用大鼠DC单抗WZD3对大鼠免疫状态的影响 ,在此基础上应用DC单抗同时处理供、受体 ,进行同种异体心脏移植 ,研究单抗诱导供、受体间双向移植耐受可能机理 ,为联合应用单抗和耐受性DC诱导移植免疫耐受奠定基础。方法 :用不同剂量WZD3处理SD(受体 )和Wistar(供体 )大鼠 ,两周后观察单向、双向混合淋巴细胞培养结果和经ConA或LPS刺激脾细胞产生的细胞因子水平变化。选择合适WZD3剂量同时对供、受体大鼠体内注射 ,进行异体异位心肺联合移植 ,术后观察移植器官存活时间和器官排斥终点时受体脾细胞分泌细胞因子水平。结果 :高剂量 (8mg kg体重 )WZD3对大鼠单向、双向MLC以及脾细胞产生IL 2和TNF有明显抑制作用 ,且能明显延长移植心脏存活时间 ;中剂量 (4mg kg体重 )和低剂量 (2mg kg体重 )WZD3对上述指标有轻度或无抑制作用。结论 :采用高剂量WZD3能下调大鼠免疫功能 ;同时处理供、受体大鼠 ,能诱导供、受体间双向免疫耐受 ,明显延长移植器官存活时间 ,其机制可能与清除DC、下调Th1细胞功能有关。 展开更多
关键词 树突状细胞 单抗 免疫功能 移植排斥反应
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u-PAR反义核酸载体对高侵袭人前列腺癌细胞PC-3M亚系侵袭能力的抑制效应
6
作者 廖国宁 李清芬 +3 位作者 李卓娅 龚非力 邓耀祖 冯友梅 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期253-256,共4页
目的 :观察u PAR反义核酸载体对高侵袭力PC 3M亚系侵袭能力的抑制效应。方法 :利用单层细胞侵袭和软琼脂克隆形成实验 ,对比观察u PAR反义核酸对高侵袭亚系体外侵袭能力的影响 ;应用RT PCR和明胶酶谱法 ,分析u PAR反义核酸对高侵袭亚系M... 目的 :观察u PAR反义核酸载体对高侵袭力PC 3M亚系侵袭能力的抑制效应。方法 :利用单层细胞侵袭和软琼脂克隆形成实验 ,对比观察u PAR反义核酸对高侵袭亚系体外侵袭能力的影响 ;应用RT PCR和明胶酶谱法 ,分析u PAR反义核酸对高侵袭亚系MMP 9活性的影响 ,并且观察u PAR反义核酸载体转染前后的细胞亚系在裸鼠体内成瘤率及转移情况。结果 :转染u PAR反义核酸的高侵袭亚系体外侵袭能力和非贴壁依赖性生长能力均明显降低 ,抑制率分别为 79%和6 0 % ;u PAR反义核酸虽不影响高侵袭亚系MMP 9mRNA的转录 ,但对MMP 9酶原的激活有抑制作用 ;且转染u PAR反义核酸载体亚系的体内成瘤率和移植瘤的生长明显受到抑制 ,与对照组之间差异具有极显著性 (P <0 .0 1)。结论 :u PAR反义核酸对高侵袭亚系体外侵袭能力有较强抑制作用 ,并可显著抑制高侵袭亚系的体内生长能力。 展开更多
关键词 肿瘤侵袭 前列腺癌 反义核酸 U-PAR MMP-9
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u-PAR反义核酸载体的构建与高侵袭人前列腺癌细胞PC-3M亚系的转染
7
作者 廖国宁 李清芬 +4 位作者 冯友梅 邓耀祖 李卓娅 龚非力 马丁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期38-41,共4页
目的 :为了特异封闭PC -3M高侵袭亚系尿激酶型纤溶酶原激活物受体 (u -PAR)的表达 ,观察其对侵袭能力的抑制效应。方法 :应用RT -PCR获得u -PAR的cDNA片段 ,反向插入pcDNA3质粒载体中 ,构建u -PAR反义核酸载体并导入高侵袭亚系中 ;借助R... 目的 :为了特异封闭PC -3M高侵袭亚系尿激酶型纤溶酶原激活物受体 (u -PAR)的表达 ,观察其对侵袭能力的抑制效应。方法 :应用RT -PCR获得u -PAR的cDNA片段 ,反向插入pcDNA3质粒载体中 ,构建u -PAR反义核酸载体并导入高侵袭亚系中 ;借助RT -PCR和免疫组化检测转染细胞u -PAR的表达。结果 :u -PAR反义核酸载体转染株的u -PARmRNA和蛋白质水平明显低于对照组 ,抑制率分别为 53 %和 73 % ,同时其体外侵袭能力亦明显降低 ,抑制率为 79%。结论 :u -PAR反义核酸在PC -3M高侵袭亚系中发挥了特异封闭作用 ,为进一步观察u-PAR反义核酸抑制高侵袭前列腺癌细胞亚系的侵袭效应提供了细胞模型。 展开更多
关键词 肿瘤侵润 前列腺肿瘤 RNA 纤溶酶原激活物 u—PAR 反义核酸载体 肿瘤细胞 PC-3M亚系 肿瘤转染
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负性刺激分子PD-L对T细胞介导小鼠L929肿瘤细胞免疫效应的影响 被引量：1
8
作者 戴红 方敏 沈关心 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期828-831,共4页
目的:探讨负性刺激分子在肿瘤细胞逃避免疫效应中的作用。方法:以L929细胞为靶细胞,体内致敏C57BL/6小鼠,注入PD-L1、PD-L2抗体阻断,并设立未致敏对照组。分离小鼠脾细胞,体外采用3H-TdR掺入法、荧光标记双染色FCM以及PI染色FCM法分别... 目的:探讨负性刺激分子在肿瘤细胞逃避免疫效应中的作用。方法:以L929细胞为靶细胞,体内致敏C57BL/6小鼠,注入PD-L1、PD-L2抗体阻断,并设立未致敏对照组。分离小鼠脾细胞,体外采用3H-TdR掺入法、荧光标记双染色FCM以及PI染色FCM法分别检测淋巴细胞增殖反应、活化诱导的细胞凋亡以及脾细胞及其培养上清对肿瘤细胞的杀伤效应。结果:L929细胞表达PD-L1,而不表达PD-L2。体内与体外联合应用PD-L1抗体,能显著增强L929肿瘤细胞诱导的致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和特异性杀伤效应,并可抑制活化诱导的T细胞凋亡;PD-L1抗体亦可增加L929细胞诱导的未致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和促进其脾细胞培养上清对L929细胞的杀伤效应。结论:PD-L1抗体可通过阻断PD1/PDL途径促进初始T细胞和致敏T细胞介导的抗瘤效应。 展开更多
关键词 PD-L T细胞 L929细胞 肿瘤免疫
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双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统的构建及体外效应研究
9
作者 王骞 曹利民 +5 位作者 周华荣 朱慧芬 张悦 邵静芳 杨敬 沈关心 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第4期243-247,共5页
目的:构建高靶向性基因转移及表达系统,并研究其介导HSV-tK/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法:通过重组技术分别构建anti-TfR ScFv-GAL4融合蛋白表达载体ScFv-GAL4-pET28a及合AFP启动子、GAL4特异性识别序列(GAL4rec)的HS... 目的:构建高靶向性基因转移及表达系统,并研究其介导HSV-tK/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法:通过重组技术分别构建anti-TfR ScFv-GAL4融合蛋白表达载体ScFv-GAL4-pET28a及合AFP启动子、GAL4特异性识别序列(GAL4rec)的HSV-tk真核表达载体pEBAF/tk-GAL4rec。IPTC诱导后,利用受体介导内吞作用介导pEBAF/tk-CAL4rec质粒转染表面均高表达TfR的人肿瘤细胞株HepG2,SMMC7721及A549。潮霉素筛选后,MTT法检测GCV对它们的杀伤作用。结果:双酶切鉴定、SDS-PAGE电泳及测序分别证明anti-TfR ScFv-GAL4融合蛋白及重组pEBAF/tk-CAL4rec真核表达质粒构建成功。体外杀伤实验中,高分泌AFP(845ng/ml)的HepG2/tk细胞对GCV很敏感,且抑制率与GCV浓度及作用时间呈正相关;而低分泌AFP(2ng/ml)的SMMC7721/tk细胞对GCV低度敏感;不分泌AFP的A549/tk细胞则不敏感。结论:双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统构建成功,并显示出很好的靶向性。 展开更多
关键词 HSV-TK基因 转铁蛋白受体 GAL4 受体介导内吞 肝癌
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可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化 被引量：10
10
作者 翁秀芳 陈浩 +4 位作者 吴雄文 梁智辉 韩军艳 黄亚非 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期265-268,共4页
目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作... 目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作用下进行生物素化 ,使生物素结合到HLA A2 抗原肽复合物中的H链C端。利用特异性抗体 (mAbW6 / 32和兔抗人 β2m抗体 )及链霉亲合素进行ELISA和Westernblot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 :折叠复合物中 ,主要含有HLAH链聚合体、HLA A2 肽复合物单体及 β2m3种成分 ,其中H链聚合体与HLA A2单体可生物素化。结论 :成功地获得生物素化的HLA A2 抗原肽复合物单体 ,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础 ,也为过程复杂的HLA 展开更多
关键词 HLA—A2-抗原肽复合物 生物素化 BirA酶
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采用PCR-SSP方法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27亚型 被引量：10
11
作者 韩军艳 熊平 +4 位作者 严鹏 邵诗颖 熊蓓 吴雄文 龚非力 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第15期1394-1395,共2页
目的　建立序列特异性引物 聚合酶链方法 (PCR SSP)检测湖北地区人白细胞抗原B2 7(Humanleucocyteanti gen B2 7,HLA B2 7)阳性强直性脊柱炎患者的HLA B2 7亚型组成。方法　盐析法提取 10 0例HLA B2 7阳性的强直性脊柱炎患者外周血基因... 目的　建立序列特异性引物 聚合酶链方法 (PCR SSP)检测湖北地区人白细胞抗原B2 7(Humanleucocyteanti gen B2 7,HLA B2 7)阳性强直性脊柱炎患者的HLA B2 7亚型组成。方法　盐析法提取 10 0例HLA B2 7阳性的强直性脊柱炎患者外周血基因组DNA ,采用PCR SSP技术分别进行HLA B位点基因型检测和HLA B2 7基因亚型分析。结果　 10 0例标本PCR SSP扩增均获成功 ,历时 3h。共检出 4种亚型 :HLA B 2 70 4、HLA B 2 711、HLA B 2 715、HLA B 2 72 2。其中HLA B 2 70 4纯合子 2 5例、HLA B 2 70 4杂合子 63例 ;HLA B 2 711杂合子 5例 ;HLA B 2 715杂合子 6例 ;HLA B 2 72 2杂合子 1例。四种亚型所占构成比分别为 90 4%、4%、4 8%和 0 .8%。结论　PCR SSP方法进行HLA B2 7亚型分析 ,快速、经济、简单 ;HLA B 2 70 4是湖北地区强直性脊柱炎患者HLA B2 7基因主要亚型。 展开更多
关键词 PCR-SSP HLA-B27 亚型 强直性脊柱炎
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小鼠B7-H4基因克隆及真核表达载体的构建 被引量：9
12
作者 徐军发 袁春雷 +3 位作者 杨衡 赵坤 胡国艳 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期665-667,共3页
目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDN... 目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3·1-hFc真核表达载体中,并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白。结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3·1-hFc载体中,两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc。结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体,它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白。 展开更多
关键词 B7-H4 真核表达 基因克隆 载体构建
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BirA酶基因表达载体的构建、原核表达及表达产物的活性鉴定 被引量：9
13
作者 李青 吴雄文 +4 位作者 熊敏 翁秀芳 卢小玲 梁智辉 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期557-560,共4页
目的:构建生物素-蛋白连接酶(BirA酶)基因的表达载体,并在大肠杆菌BL-21(DE3)中表达具有生物学活性的BirA酶。方法:用PCR法扩增BirA酶基因。将PCR产物克隆入pGEX-4T-2中构建BirA酶-GST融合蛋白基因的重组表达载体pGEX-BirA。经测序验证... 目的:构建生物素-蛋白连接酶(BirA酶)基因的表达载体,并在大肠杆菌BL-21(DE3)中表达具有生物学活性的BirA酶。方法:用PCR法扩增BirA酶基因。将PCR产物克隆入pGEX-4T-2中构建BirA酶-GST融合蛋白基因的重组表达载体pGEX-BirA。经测序验证后,在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,表达产物采用谷胱苷肽-琼脂糖层析柱进行纯化。以带有生物素酶底物肽(BirAsubstratepeptide,BSP)的HLA-A2-肽复合物为底物,用ELISA和Westernblot鉴定表达产物的生物素化活性。结果:构建了pGEX-BirA原核表达质粒,并在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达Mr为61300的BirA酶-GST融合蛋白,表达产物经谷胱苷肽-琼脂糖层析柱纯化后,得到N端带有GST标签的BirA酶蛋白。ELISA和Westernblot的结果显示,表达产物能使HLA-A2-肽复合物生物素化。结论:成功地制备了具有生物学活性的Bi-rA酶,为研究蛋白质分子的相互作用提供了有效的制剂。 展开更多
关键词 BirA酶 生物素化 HLA-A2-肽复合物
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小鼠可溶性CD83对树突状细胞表达共刺激分子和共刺激活性的影响 被引量：5
14
作者 徐军发 黄保军 +5 位作者 熊平 冯玮 徐勇 方敏 郑芳 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期792-796,共5页
目的:研究可溶性小鼠CD83(mCD83)对树突状细胞(DC)表达共刺激分子及共刺激活性的影响。方法:克隆mCD83基因,构建mCD83胞外功能区与人IgG1αFc段融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg,并在COS-7细胞中表达可溶性mCD83-hIg融合蛋白。采用ELIS... 目的:研究可溶性小鼠CD83(mCD83)对树突状细胞(DC)表达共刺激分子及共刺激活性的影响。方法:克隆mCD83基因,构建mCD83胞外功能区与人IgG1αFc段融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg,并在COS-7细胞中表达可溶性mCD83-hIg融合蛋白。采用ELISA、Western blot和RT-PCR技术检测mCD83-hIg融合基因在COS-7细胞中的表达。用mCD83-hIg处理小鼠DC细胞系(DC2.4)采用流式细胞术检测DC细胞周期、细胞凋亡和共刺激分子CD80、CD86的表达影响;采用混合白细胞培养试验,检测mCD83-hIg对DC2.4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的影响。结果:酶切和序列测定鉴定显示构建的真核表达载体完全正确;mCD83-hIg对DC2.4细胞周期和细胞凋亡无影响,但可下调DC2.4表面共刺激分子CD80和CD86的表达;mCD83-hIg处理过的DC2.4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的能力显著下降。结论:mCD83-hIg可抑制DC表达共刺激分子并下调DC共刺激活性,从而抑制同种异基因T细胞增殖和产生细胞因子。 展开更多
关键词 mCD83-hIg 树突状细胞 DC2.4 共刺激分子 共刺激作用 混合白细胞培养 T细胞增殖 IL-2 IFN-γ
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湖北汉族人群甘露糖结合凝集素基因外显子1多态性与SLE关联性的研究 被引量：5
15
作者 韩军艳 黄亚非 +2 位作者 张胜桃 吴雄文 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期408-411,共4页
目的 :分析湖北汉族人群甘露糖结合凝集素 (Mannose BindingLectin或Mannose BindingProtein ,MBL或MBP)基因外显子 1多态性 ,探讨其与系统性红斑狼疮 (SystemicLupusErythematosus ,SLE)的易感性关系。方法 :采用异源双链杂交技术对 11... 目的 :分析湖北汉族人群甘露糖结合凝集素 (Mannose BindingLectin或Mannose BindingProtein ,MBL或MBP)基因外显子 1多态性 ,探讨其与系统性红斑狼疮 (SystemicLupusErythematosus ,SLE)的易感性关系。方法 :采用异源双链杂交技术对 111例健康正常人和 4 1例SLE患者的MBL基因外显子 1多态性进行分析。结果 :①共检测出两种等位基因 :野生型A和变异型B(在 5 4位密码子由GGC→GAC) ,未检出变异型C、D等位基因。②正常对照中A等位基因及B等位基因的基因频率分别为 0 910和 0 0 90 ,符合Hardy Wernberg定律 ;与此前在日本人中报道的A及B等位基因频率 0 76 7和 0 2 33相比 ,变异型B的等位基因频率明显低于后者 (P <0 0 5 )。③SLE病人组中B等位基因频率为 0 14 6 ,高于正常对照组 ,但差异无显著性意义。结论 :在湖北汉族人群中MBL基因外显子 1具有遗传多态性 ,而且与已知其他人群的分布频率有一定差异。MBL基因外显子 1的遗传多态性并不与系统性红斑狼疮相关联。 展开更多
关键词 湖北 汉族人群 甘露糖结合凝集素 基因外显子1多态性 SLE关联性
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可溶性HLA-G1抗原肽复合物的体外折叠及其功能研究 被引量：4
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作者 杨敬宁 吴雄文 +3 位作者 梁智辉 韩军艳 黄亚非 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期265-268,共4页
目的:体外折叠形成可溶性HLA G1抗原肽复合物,并研究其生物学功能。方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性。将折叠产物通过SephadexG75层析柱纯化,经Westernblot进行构象鉴定。探讨... 目的:体外折叠形成可溶性HLA G1抗原肽复合物,并研究其生物学功能。方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性。将折叠产物通过SephadexG75层析柱纯化,经Westernblot进行构象鉴定。探讨可溶性HLA-G1分子对NK细胞杀伤活性的影响,对混合淋巴细胞培养中T细胞增殖的影响,以及对活化T细胞凋亡的影响。结果:折叠产物可与mAbW6/32特异性结合,在Westernblot的鉴定中呈阳性反应。可溶性HLA-G1可有效地抑制NK细胞的细胞毒作用,抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖,促进活化T细胞发生凋亡。结论:体外折叠成功地形成可溶性HLA-G1抗原肽复合物,该复合物具有抑制NK细胞和T细胞的活性。 展开更多
关键词 sHLA-G1-抗原肽复合物 折叠复性 细胞毒作用 增殖 凋亡
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抗CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物的制备及体外激活苦杏仁甙靶向杀伤LoVo细胞的实验研究 被引量：5
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作者 连彦军 陈道达 +4 位作者 郑勇斌 许天文 柯茂林 黄韬 沈关心 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第4期239-243,共5页
目的:制备抗CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物,检测其免疫反应性及酶活性,并观察其体外激活苦杏仁甙前药对 LoVo细胞的靶向杀伤效应。方法:通过异型双功能交联剂N-琥珀酰亚胺-间(N-马来酰亚胺基)苯甲酸酯(MBS)将抗CEA单 克隆抗体与β-葡萄... 目的:制备抗CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物,检测其免疫反应性及酶活性,并观察其体外激活苦杏仁甙前药对 LoVo细胞的靶向杀伤效应。方法:通过异型双功能交联剂N-琥珀酰亚胺-间(N-马来酰亚胺基)苯甲酸酯(MBS)将抗CEA单 克隆抗体与β-葡萄糖苷酶交联,制备抗CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物,ELISA法检测偶联物的抗体亲和力及酶活性,MTT 法检测其对苦杏仁甙前药激活后对表达CEA的大肠癌细胞株LoVo和无CEA表达的乳腺癌细胞株MCF-7的杀伤作用。结 果:抗CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物既保持了与靶细胞的特异性免疫反应性又保持了酶活性,体外能有效激活苦杏仁甙前 药,对LoVo细胞产生剂量依赖性靶向杀伤作用,而对对照乳腺癌MCF-7细胞无明显的杀伤作用。结论:抗CEA单抗-β-葡萄 糖苷酶偶联物具有良好的体外结合大肠癌LoVo细胞的能力,并能有效激活苦杏仁甙前药发挥对靶细胞的特异性杀伤作用, 该方法有可能进一步用于大肠癌的治疗。 展开更多
关键词 免疫轭合物 单克隆抗体 苦杏仁甙 前药 大肠癌
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七叶皂苷钠致静脉损伤作用细胞水平机制研究 被引量：16
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作者 朱慧芬 徐戎 +1 位作者 谢莺 曾繁典 《医药导报》 CAS 2008年第8期908-911,共4页
目的了解七叶皂苷钠（EscNa）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）活性及细胞周期分布的影响。方法在体外原代培养的HUVEC中加入不同浓度EscNa及肿瘤坏死因子（TNF-α）,孵育24 h后,采用MTT和中性红法对HUVEC活性进行定量分析,流式细胞技术对... 目的了解七叶皂苷钠（EscNa）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）活性及细胞周期分布的影响。方法在体外原代培养的HUVEC中加入不同浓度EscNa及肿瘤坏死因子（TNF-α）,孵育24 h后,采用MTT和中性红法对HUVEC活性进行定量分析,流式细胞技术对细胞周期进行分析。结果MTT法和中性红法显示EscNa的半数抑制浓度（IC50）为（42.89±3.42）和（44.19±3.58） μg·mL^-1。10～80 μg·mL^-1浓度范围内的EscNa可不同程度地抑制HUVEC生长,呈浓度依赖性。细胞周期分析结果也显示,EscNa可阻抑G0/G1期细胞向S期的转变,抑制HUVEC增殖。结论七叶皂苷钠通过降低HUVEC活性,抑制细胞增殖,从而对HUVEC造成损伤。 展开更多
关键词 七叶皂苷钠 人脐静脉内皮细胞 细胞活性 细胞周期
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可溶性HLA-G1重链分子的构建、表达及纯化 被引量：4
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作者 杨敬宁 吴雄文 +6 位作者 梁智辉 陆盛军 尹姝晗 蔡蕾 韩军艳 黄亚非 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期287-290,共4页
目的:获取原核表达的可溶性HLA- G1重链分子(heavychainofsolubleHLA G1,sHLA -G1 hc) ,为进一步构建可溶性HLA- G1单体分子奠定基础。方法:应用引物点突变技术,RT -PCR扩增去信号肽的可溶性HLA -G1重链分子的cDNA序列,构建表达载体pET2... 目的:获取原核表达的可溶性HLA- G1重链分子(heavychainofsolubleHLA G1,sHLA -G1 hc) ,为进一步构建可溶性HLA- G1单体分子奠定基础。方法:应用引物点突变技术,RT -PCR扩增去信号肽的可溶性HLA -G1重链分子的cDNA序列,构建表达载体pET2 2b sHLA -G1 -hc,导入大肠杆菌BL2 1(DE3)Plys,IPTG诱导sHLA-G1- hc- 6 (his融合蛋白表达,提取包涵体蛋白,溶解后经Ni- NTA亲和层析纯化,透析后浓缩保存。SDS PAGE、Westernblot鉴定目的蛋白的表达和纯化。结果:克隆基因序列符合重链基因特征;表达产物以包涵体形式为主,表达量占菌体总蛋白的2 0 % ;纯化后证明表达产物具有较高纯度达到95 %。结论:成功构建可溶性HLA -G1重链分子原核表达载体,为阐明可溶性HLA- G1的功能奠定基础。 展开更多
关键词 人白细胞抗原 点突变 原核表达 蛋白纯化
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小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响 被引量：5
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作者 徐军发 赵坤 +4 位作者 黄保军 熊平 方敏 沈关心 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期413-416,共4页
目的:研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBT-LAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB-TLAcDNA。将其胞外功能区基因... 目的:研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBT-LAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB-TLAcDNA。将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2/mBTLAext并转化E.coliBL21(DE3),以1mmol/L的IPTG诱导表达。提取包涵体,经变性、负性后,采用GlutathioneSepharose4B柱纯化可溶性的GST-mBTLAext。将不同浓度的GST-mBTLAext加入到DC2.4的培养体系中,采用流式细胞术检测其对DC上B7-1和B7-2表达的影响。结果:成功地克隆了mBTLA基因,并构建了重组原核表达载体。变性、复性,经GlutathioneSepharose4B柱纯化,获得了可溶性的GST-mBTLAext融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定表明,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为43000,同预期的结果一致。流式细胞术检测显示,GST-mBTLAext可上调DC2.4上B7-1的表达并呈剂量依赖性,这一作用可被抗GST-mBTLAext血清阻断。未检测到GST-mBT-LAextDC2.4上B7-2的表达有影响。结论:BTLA对DC2.4表面B7分子表达的上调可能是BTLA-HVEM途径反向信号对DC作用的结果,对进一步研究其对DC生物学行为的影响及其分子机制具有重要的理论意义。 展开更多
关键词 树突状细胞 B/T淋巴细胞弱化因子 B7分子 原核表达
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