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靶向siRNA对人子宫颈癌细胞的抑制作用 被引量:1
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作者 黄浩 余南才 +4 位作者 江俊 刘倩 马威 郝建军 易艳东 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期16-18,共3页
目的构建增殖细胞核抗原(PCNA)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在人HeLa细胞表达,同时观察PCNA shRNA对HeLa细胞体外增殖及生物学特性的影响。方法将PCNA cDNA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-... 目的构建增殖细胞核抗原(PCNA)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在人HeLa细胞表达,同时观察PCNA shRNA对HeLa细胞体外增殖及生物学特性的影响。方法将PCNA cDNA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-1-PCNA(1-4),并通过酶切和测序等方法进行鉴定,将真核表达质粒pGenesil-1-PCNA(1-4)转染HeLa细胞,运用Western blot方法检测PCNA蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果PCNA shRNA能显著抑制人HeLa细胞的生长,阻滞细胞于G0/G1期,PCNA的蛋白表达同时受到抑制。结论PCNA shRNA能显著抑制人HeLa细胞的生长,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现,实验结果为进一步研究PCNA shRNA对子宫颈癌的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 子宫颈癌 增殖细胞核抗原 小发夹结构RNA
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靶向siRNA下调人结直肠癌Colo320细胞端粒长度与端粒酶逆转录酶基因表达的研究
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作者 黄浩 李秀 +4 位作者 肖宏 傅雷 余兰才 林世和 易艳东 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第10期1134-1138,共5页
目的:探讨发夹状shRNA封阻原癌基因(c-myc),抑制癌细胞增殖、生长的作用。方法:针对c-myc的构建发夹状shRNA的真核表达质粒,并转染人结直肠癌Colo320细胞。荧光定量RT-PCR检测c-myc及细胞端粒酶逆转录酶的mRNA的表达,Western-blot检测c-... 目的:探讨发夹状shRNA封阻原癌基因(c-myc),抑制癌细胞增殖、生长的作用。方法:针对c-myc的构建发夹状shRNA的真核表达质粒,并转染人结直肠癌Colo320细胞。荧光定量RT-PCR检测c-myc及细胞端粒酶逆转录酶的mRNA的表达,Western-blot检测c-myc、端粒酶逆转录酶(hu-man telomerase reverse transeriptase,hTERT)蛋白表达水平。Southernblot检测端粒的长度,PCR-ELISE法检测端粒酶活性。3H-thymidine实验分析DNA合成和细胞增殖。结果:转染细胞增殖、生长皆受到抑制。同时c-myc和hTERT的mRNA和蛋白表达显著下降,端粒的长度明显缩短,端粒酶活性降低。结论:c-myc的shRNA对人结直肠癌Colo320细胞的生长增殖、端粒长度、端粒酶活性有特异性抑制作用,并呈剂量依赖关系。 展开更多
关键词 C-MYC 小发夹结构RNA 增殖 细胞端粒酶逆转录酶
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