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消光系数法与二喹啉甲酸法测定多肽浓度精密度的比较
被引量：
3
1
作者
张璐瑶
朱伟
+5 位作者
李瑛傑
张博燃
曾凯
魏蔚
马净植
杨焰
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期206-211,共6页
目的比较研究实验室测定多肽浓度的消光系数法与二喹啉甲酸法(bicinchoninic acid,BCA)的精密度。方法将牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)与固相合成环肽CYE(NH2-CYENLRSTC-COOH)、CLP(NH2-CLPLWYPSC-COOH)及CHY(NH2-CHYPTYSKC-C...
目的比较研究实验室测定多肽浓度的消光系数法与二喹啉甲酸法(bicinchoninic acid,BCA)的精密度。方法将牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)与固相合成环肽CYE(NH2-CYENLRSTC-COOH)、CLP(NH2-CLPLWYPSC-COOH)及CHY(NH2-CHYPTYSKC-COOH)溶液梯度稀释后分别使用消光系数法和BCA法进行吸光度测定,通过消光系数公式或标准曲线方程式计算相应浓度值,比较浓度计算值与理论值之间的差异,并计算测定方法的精密度。结果消光系数法的浓度计算值与理论值之间差异无统计学意义(P>0.05)。BCA法中,以BSA作为标准品得到的多肽浓度计算值与理论值之间有显著差异(P<0.05);以待测多肽自身为标准品求得的多肽浓度计算值与理论值之间无明显差异(P>0.05);以与待测多肽长度相同、分子量相近的多肽绘制个性化标准曲线求得的多肽浓度计算值与理论值之间存在统计学差异(P<0.05),但求得的浓度计算值相比BSA标准曲线的浓度计算值更接近理论值(P<0.05)。各方法的精密度之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论消光系数法推荐用于含有色氨酸和酪氨酸的多肽;当标准品在结构、疏水性等方面的性质越接近待测物,使用个性化标准曲线的BCA法得到的浓度计算值越准确,可用于多肽浓度的快速半定量测定。
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关键词
二喹啉甲酸法(BCA)法
多肽
浓度测定
个性化标准曲线
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职称材料
报道一条具有pH敏感解吸附特征的羟基磷灰石结合肽序列
2
作者
邓鑫
李瑛傑
+3 位作者
魏蔚
杨焰
马净植
谢三祥
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期218-223,共6页
目的评价基于噬菌体展示技术的羟基磷灰石结合肽的解吸附特征。方法采用成品羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)作为结合底物,通过X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)对其进行物相鉴定,提取噬菌体DNA测序读取展示肽的序列,扩增制备目标序列Y...
目的评价基于噬菌体展示技术的羟基磷灰石结合肽的解吸附特征。方法采用成品羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)作为结合底物,通过X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)对其进行物相鉴定,提取噬菌体DNA测序读取展示肽的序列,扩增制备目标序列YSLHWGE(YSL)的单克隆储液,以肽库中随机挑选的序列VTDSKPK(VTD)为阴性对照;滴度测试测定投入回收比,免疫荧光法验证目标序列的标靶亲和力。参照标准淘选方案,在不同pH值(7.5、6.5、5.5、4.5)缓冲洗脱液中分析目标序列的解吸附特征。结果YSL和VTD的单克隆储液扩增后滴度均达到10;pfu/10μL,符合后续实验要求。测序结果得到目标序列和随机序列分别为YSL和VTD。通过重复3次滴度测试计算投入回收比发现,目标序列YSL与HAP的亲和度较高,投入回收比为随机肽VTD投入回收比的17.5倍。这种结合亲和力也通过免疫荧光实验得以验证,结果显示YSL组羟基磷灰石粉末被荧光点亮的面积比例和平均吸光度分别为(71.98±2.30)%和(0.10090±0.00544),均显著高于VTD组的(49.95±2.28)%(P<0.01)和(0.04637±0.00117)(P<0.01);发现在不同pH值环境中,YSL解吸附释放的噬菌体数量占原吸附总量的比例均高于随机肽VTD解吸附的比例(P<0.01)。结论羟基磷灰石结合肽序列YSLHWGE对结合底物羟基磷灰石有较好的亲和力且具有一定的随环境pH值变化的缓释能力。
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关键词
羟基磷灰石
羟基磷灰石结合肽
蛋白质吸附
滴度测试
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职称材料
题名
消光系数法与二喹啉甲酸法测定多肽浓度精密度的比较
被引量：
3
1
作者
张璐瑶
朱伟
李瑛傑
张博燃
曾凯
魏蔚
马净植
杨焰
机构
华中科技大学
同济医学院附属同济
医院
口腔
医学中心
四川省绵阳市中医
医院
口腔科
武汉市中医
医院
口腔科
华中科技大学协和深圳医院口腔科
湖南中医药
大学
口腔
医学院(长沙市
口腔
医院
)
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期206-211,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81700961,No.81873714)。
文摘
目的比较研究实验室测定多肽浓度的消光系数法与二喹啉甲酸法(bicinchoninic acid,BCA)的精密度。方法将牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)与固相合成环肽CYE(NH2-CYENLRSTC-COOH)、CLP(NH2-CLPLWYPSC-COOH)及CHY(NH2-CHYPTYSKC-COOH)溶液梯度稀释后分别使用消光系数法和BCA法进行吸光度测定,通过消光系数公式或标准曲线方程式计算相应浓度值,比较浓度计算值与理论值之间的差异,并计算测定方法的精密度。结果消光系数法的浓度计算值与理论值之间差异无统计学意义(P>0.05)。BCA法中,以BSA作为标准品得到的多肽浓度计算值与理论值之间有显著差异(P<0.05);以待测多肽自身为标准品求得的多肽浓度计算值与理论值之间无明显差异(P>0.05);以与待测多肽长度相同、分子量相近的多肽绘制个性化标准曲线求得的多肽浓度计算值与理论值之间存在统计学差异(P<0.05),但求得的浓度计算值相比BSA标准曲线的浓度计算值更接近理论值(P<0.05)。各方法的精密度之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论消光系数法推荐用于含有色氨酸和酪氨酸的多肽;当标准品在结构、疏水性等方面的性质越接近待测物,使用个性化标准曲线的BCA法得到的浓度计算值越准确,可用于多肽浓度的快速半定量测定。
关键词
二喹啉甲酸法(BCA)法
多肽
浓度测定
个性化标准曲线
Keywords
bicinchoninic acid method
polypeptide
concentration determination
personalized standard curve
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
报道一条具有pH敏感解吸附特征的羟基磷灰石结合肽序列
2
作者
邓鑫
李瑛傑
魏蔚
杨焰
马净植
谢三祥
机构
华中科技大学
同济医学院附属同济
医院
口腔
医学中心
华中科技大学协和深圳医院口腔科
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期218-223,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81873714,No.81700961)。
文摘
目的评价基于噬菌体展示技术的羟基磷灰石结合肽的解吸附特征。方法采用成品羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)作为结合底物,通过X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)对其进行物相鉴定,提取噬菌体DNA测序读取展示肽的序列,扩增制备目标序列YSLHWGE(YSL)的单克隆储液,以肽库中随机挑选的序列VTDSKPK(VTD)为阴性对照;滴度测试测定投入回收比,免疫荧光法验证目标序列的标靶亲和力。参照标准淘选方案,在不同pH值(7.5、6.5、5.5、4.5)缓冲洗脱液中分析目标序列的解吸附特征。结果YSL和VTD的单克隆储液扩增后滴度均达到10;pfu/10μL,符合后续实验要求。测序结果得到目标序列和随机序列分别为YSL和VTD。通过重复3次滴度测试计算投入回收比发现,目标序列YSL与HAP的亲和度较高,投入回收比为随机肽VTD投入回收比的17.5倍。这种结合亲和力也通过免疫荧光实验得以验证,结果显示YSL组羟基磷灰石粉末被荧光点亮的面积比例和平均吸光度分别为(71.98±2.30)%和(0.10090±0.00544),均显著高于VTD组的(49.95±2.28)%(P<0.01)和(0.04637±0.00117)(P<0.01);发现在不同pH值环境中,YSL解吸附释放的噬菌体数量占原吸附总量的比例均高于随机肽VTD解吸附的比例(P<0.01)。结论羟基磷灰石结合肽序列YSLHWGE对结合底物羟基磷灰石有较好的亲和力且具有一定的随环境pH值变化的缓释能力。
关键词
羟基磷灰石
羟基磷灰石结合肽
蛋白质吸附
滴度测试
Keywords
hydroxyapatite
hydroxyapatite binding peptide
protein adsorption
titer test
分类号
R783.1 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
消光系数法与二喹啉甲酸法测定多肽浓度精密度的比较
张璐瑶
朱伟
李瑛傑
张博燃
曾凯
魏蔚
马净植
杨焰
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
报道一条具有pH敏感解吸附特征的羟基磷灰石结合肽序列
邓鑫
李瑛傑
魏蔚
杨焰
马净植
谢三祥
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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