伪狂犬病病毒Ea株gD基因的克隆及序列分析 被引量：8

1

作者 洪文洲 陈焕春 +3 位作者 方六荣 周锐 何启盖 吴斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期235-243,共9页

本研究从含有伪狂犬病病毒 (Pseudorabiesvirus,PRV)Ea株 gD基因BamHI 6 6Kb片段的重组质粒 pUCB7中分别亚克隆gD基因的上、下游片段 ,并对上游片段进一步改造 ,去掉 gD基因上游的非编码序列 ,构建了含完整 gD基因编码区的重组质粒 pBR... 本研究从含有伪狂犬病病毒 (Pseudorabiesvirus,PRV)Ea株 gD基因BamHI 6 6Kb片段的重组质粒 pUCB7中分别亚克隆gD基因的上、下游片段 ,并对上游片段进一步改造 ,去掉 gD基因上游的非编码序列 ,构建了含完整 gD基因编码区的重组质粒 pBRgDI,并利用基因内部的限制性内切酶位点 ,用内切酶KpnI和SalI酶切分析 ,证实了 gD基因的可靠性和完整性。同时构建了测序质粒 pSKgDSB和 pSKgDS ,并用双脱氧终止法进行测序。将测序结果与国外的Rice毒株进行比较 ,发现Ea株 gD基因核苷酸序列有多处点突变和一处插入突变 ,在编码氨基酸残基水平上也有差异。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 Ea株 GD基因 克隆 序列分析 伪狂犬病

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口蹄疫病毒基因工程疫苗研究进展 被引量：15

2

作者 钱平 李祥敏 陈焕春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期238-240,208,共4页

关键词 口蹄疫 口蹄疫病毒 基因工程疫苗 血清型 可饲疫苗 合成肽苗 蛋白质载体疫苗 活载体疫苗 基因缺失疫苗

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伪狂犬病病毒Ea株gE基因的克隆、序列分析及其表达 被引量：3

3

作者 肖少波 陈焕春 +2 位作者 方六荣 何启盖 洪文洲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期174-179,共6页

对含伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PrV）Ea株gD基因部分编码序列,gI、gE和11k基因全序列、28k基因部分序列的质粒pSKB4.5进行亚克隆,构建了只含完整gE基因（长1.78kb）的重组质粒pSDM1.78+,并采用双脱氧末端终止法对全序列进行了分... 对含伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PrV）Ea株gD基因部分编码序列,gI、gE和11k基因全序列、28k基因部分序列的质粒pSKB4.5进行亚克隆,构建了只含完整gE基因（长1.78kb）的重组质粒pSDM1.78+,并采用双脱氧末端终止法对全序列进行了分析,发现同国外标准毒株Rice株相比较,在核苷酸和氨基酸水平均存在一定程度的差异。进一步将gE基因克隆到高效真核表达载体pcDNA3.1+的KpnI和BamHI位点之间,构建了gE基因的真核表达质粒pcDNA-gE。体外转染 IBRS-2细胞,经间接免疫荧光法检测证实了gE基因在IBRS-2细胞中得到了表达,表达的蛋白具有生物学活性。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 GE基因 克隆 序列分析 体外表达

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猪大肠杆菌水肿毒素SLT-IIeA基因的克隆和序列分析 被引量：8

4

作者 刘国平 吴斌 +2 位作者 刘梦元 何启盖 陈焕春 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期122-125,共4页

研究以本地猪水肿病大肠杆分离物ED1株为材料 ,利用 PCR克隆了含猪水肿病大肠杆菌 (VTEC) slt-IIe A基因 987bp的片段 ,并测定了含该克隆片段的 Bam HI、Hind 酶切片段的核苷酸序列。结果表明 ,slt-IIe A基因的编码区全长 960 bp,编码 3... 研究以本地猪水肿病大肠杆分离物ED1株为材料 ,利用 PCR克隆了含猪水肿病大肠杆菌 (VTEC) slt-IIe A基因 987bp的片段 ,并测定了含该克隆片段的 Bam HI、Hind 酶切片段的核苷酸序列。结果表明 ,slt-IIe A基因的编码区全长 960 bp,编码 3 1 9个氨基酸的蛋白质 ,序列与国外报导的 S1 1 79株进行比较发现其核苷酸同源性为 98.9%。经推导的氨基酸序列的同源性为 99.7%。这为进一步研究 slt-IIe A的生物学特性。 展开更多

关键词 猪 大肠杆菌 水肿毒素 SLT—ⅡeA基因 基因克隆 序列分析

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RT-PCR快速诊断禽流感 被引量：9

5

作者 王贵华 金梅林 陈焕春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期67-70,共4页

目前,禽流感检测方法较多,但均费时费力,且灵敏度不高。本研究立足于临床实际,选择A型流感病毒核蛋白(NP)基因序列保守区,设计了一对特异性引物,从临床病料中提取RNA,建立了一步法单管逆转录＿聚合酶链反应(RT＿PCR)快速诊断方法,该方... 目前,禽流感检测方法较多,但均费时费力,且灵敏度不高。本研究立足于临床实际,选择A型流感病毒核蛋白(NP)基因序列保守区,设计了一对特异性引物,从临床病料中提取RNA,建立了一步法单管逆转录＿聚合酶链反应(RT＿PCR)快速诊断方法,该方法快速、灵敏,为RT＿PCR用于禽流感的临床早期确诊和分子流行病学调查奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感 NP基因 RT-PCR A型流感病毒核蛋白 分子流行病学调查 逆转录-聚合酶链反应

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猪乙型脑炎乳胶凝集试验与血凝抑制试验方法的比较 被引量：5

6

作者 贾杏林 陈焕春 +4 位作者 何启盖 王祥 吴斌 方六荣 金梅林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期390-392,共3页

用血凝抑制试验 (HI)和乳胶凝集试验 (LAT)两种方法检测乙型脑炎弱毒疫苗免疫猪血清 ,结果均呈阳性反应。用LAT对来自 12个猪场的 94份猪血清进行了乙型脑炎病毒 (JEV)抗体检测 ,并与HI进行了对比 ,两种方法检测结果阳性符合率和总符合... 用血凝抑制试验 (HI)和乳胶凝集试验 (LAT)两种方法检测乙型脑炎弱毒疫苗免疫猪血清 ,结果均呈阳性反应。用LAT对来自 12个猪场的 94份猪血清进行了乙型脑炎病毒 (JEV)抗体检测 ,并与HI进行了对比 ,两种方法检测结果阳性符合率和总符合率分别为 90 .3% (5 6 /6 2 )和 88.3% (83/94 ) ,两种方法检测结果差异不显著 (p >0 .0 5 )。对来自无乙型脑炎的 12头健康猪血清进行检测 ,两种方法检测结果均为阴性。结果表明 ,用LAT与HI检测乙型脑炎结果符合 ,前者更为简便和实用。 展开更多

关键词 乙型脑炎 乳胶凝集试验 血凝抑制试验

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猪白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2

7

作者 江云波 方六荣 +5 位作者 肖少波 张辉 潘永飞 罗锐 李彬 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期841-845,共5页

本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成... 本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成熟pIL-15蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-28a的6×His下游,构建重组表达质粒pET-pIL15,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为15 ku的重组蛋白,其表达量占总菌体蛋白量的17.5%。Western blot试验也证实表达的重组融合蛋白6×His-pIL15能够很好地与抗6×His单抗发生反应。猪IL-15基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础。 展开更多

关键词 猪白细胞介素15 基因克隆 原核表达

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副猪嗜血杆菌病的危害与防治 被引量：8

8

作者 蔡旭旺 陈焕春 +1 位作者 吴斌 刘正飞 《养殖与饲料》 2003年第5期37-39,共3页

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)引起猪的多发性浆膜炎和关节炎,该病又称为革拉泽氏病(Glasser's Disease).

关键词 副猪嗜血杆菌病 猪 危害 防治 症状 流行病学 发病机理 病理变化 诊断

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猪流感的诊断及防制 被引量：4

9

作者 伍锐 王贵华 +1 位作者 金梅林 吴斌 《养殖与饲料》 2003年第4期32-34,共3页

猪流感病毒在一年四季可感染不同日龄、性别和不同品种的猪,引起猪流感.猪流感是一种急性、热性、高度接触性的呼吸道传染病.临床上以突发、高热、流泪、鼻液增多、咳嗽、呼吸困难、精神沉郁为特征.

关键词 流行特征 病原 临床症状 猪流感 诊断 防制

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疯牛病研究进展 被引量：1

10

作者 陈凡 何启盖 +2 位作者 金梅林 吴斌 刘正飞 《养殖与饲料》 2003年第9期37-38,共2页

我国没有疯牛病。农业部曾经发出通知严防疯牛病传入我国。现将此文介绍给大家,供防疫和检疫时参考。

关键词 疯牛病 病原学 发病特点 临床症状 解剖变化 防治

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血吸虫病的危害和防治 被引量：1

11

作者 薛云 陈凡 +1 位作者 何启盖 陈焕春 《养殖与饲料》 2004年第9期30-32,共3页

血吸虫病(Schisosorniasis)俗称"大肚子病",是人或牛、羊、猪等哺乳动物由于血吸虫的成虫寄生所引起的一种传染病和寄生虫病.它是一种严重的人畜共患病.世界上有76个国家和地区有血吸虫病流行,感染人体的血吸虫有19种.我国因... 血吸虫病(Schisosorniasis)俗称"大肚子病",是人或牛、羊、猪等哺乳动物由于血吸虫的成虫寄生所引起的一种传染病和寄生虫病.它是一种严重的人畜共患病.世界上有76个国家和地区有血吸虫病流行,感染人体的血吸虫有19种.我国因为只有日本血吸虫病流行,因此叫日本血吸虫感染为血吸虫病. 展开更多

关键词 血吸虫病 危害 防治 病原学

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牛流行热的诊断和防治

12

作者 蒋增海 陈焕春 吴斌 《养殖与饲料》 2003年第6期39-41,共3页

牛流行热(Bovine Ephemeral Fever),又叫三日热,暂时热,是由弹状病毒科水疱病毒属的病毒引起的牛的一种急性、热性传染病.

关键词 牛 流行热 临床诊断 防治 病原学 血清学 鉴别诊断

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