猪瘟病毒E2蛋白纳米颗粒的制备及在家兔上的免疫原性分析

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作者 张晓玲 何兴林 +6 位作者 张梦迪 李鹏飞 孙玉梅 马海龙 朱红梅 张梦佳 李文涛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2301-2311,共11页

本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗,并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板,对其胞外域进行人源密码子优化,通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与Sp... 本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗,并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板,对其胞外域进行人源密码子优化,通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与SpyTag融合表达)以及纳米骨架蛋白LS(lumazine synthase-protein A),原核表达系统纯化纳米骨架蛋白mi3(mi3-SpyCatcher),进一步组装成纳米颗粒LS-E2-pFc NP和mi3-E2 NP,并通过透射电镜和动态光散射试验进行鉴定,各组蛋白分别与ISA201佐剂乳化,制备亚单位疫苗。选用1.5~2.0 kg重的日本长耳大白兔35只,随机分为7组,包括空白对照组(n=3)、PBS阴性对照组(n=3)、E2组(n=5)、E2-pFc组(n=5)、LS-E2-pFc NP组(n=5)、mi3-E2 NP组(n=5)和CSFV E2商业化亚单位疫苗组(n=3)。于0、21 d进行肌肉注射免疫,42 d将CSFV C株经耳缘静脉按照100 RID50·只-1进行攻毒,通过阻断ELISA、中和试验、体温监测和RT-qPCR等试验评估兔的特异性抗体水平、中和抗体水平、兔体定型热反应以及脾脏病毒载量。结果显示,各组分蛋白成功表达,纯化后的蛋白条带单一,纯度较高。透射电镜可观察到粒径在10~70 nm的纳米颗粒结构,动态光散射试验观察到mi3-E2平均粒径(68 nm)大于mi3(42.73 nm),LS-E2-pFc平均粒径(42.4 nm)大于LS(13 nm)。免疫试验结果表明,E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗均有良好的免疫效果,攻毒前7 d,血清中特异性抗体阻断率均在89%以上,组间差异不显著(P>0.05)。攻毒后,PBS阴性对照组出现典型的兔体定型热反应,其余免疫组的体温变化不明显;攻毒后7 d,E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗组的中和抗体效价分别为1∶10392.4、1∶37168.4、1∶75473.6、1∶20201.8、1∶2407,其中,LS-E2-pFc NP组的中和抗体水平最高。RT-qPCR结果显示,E2组有一只兔检出低拷贝的病毒载量,拷贝数为5.83 copies·μL^(-1),其余免疫组未检到病毒载量。以上结果显示LS-E2-pFc NP免疫组效果最好,中和抗体水平最高。这种“标记”疫苗可以对自然感染和免疫接种的动物进行鉴别诊断,有助于猪场净化猪瘟。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2亚单位疫苗 自组装纳米疫苗 中和抗体

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2014年猪群常见细菌性疫病的分离鉴定与流行病学调查 被引量：10

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作者 郭龙 汤细彪 +4 位作者 刘田 董超 刘峰 喻红艳 吴斌 《养殖与饲料》 2015年第10期1-3,共3页

2014年华中农业大学动物疫病诊断中心对湖北、湖南、河南、广东、浙江等21个省市送检的12 452份临床病料进行细菌分离、生化试验和PCR方法鉴定,共分离出3 926株致病菌,并对其中所分离到的225株副猪嗜血杆菌和231株链球菌采用玻片凝集方... 2014年华中农业大学动物疫病诊断中心对湖北、湖南、河南、广东、浙江等21个省市送检的12 452份临床病料进行细菌分离、生化试验和PCR方法鉴定,共分离出3 926株致病菌,并对其中所分离到的225株副猪嗜血杆菌和231株链球菌采用玻片凝集方法进行血清型分型。结果表明链球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、波氏杆菌、致病性大肠杆菌和猪丹毒丝菌等9种病原菌已严重影响我国规模化养猪业的健康生产。 展开更多

关键词 猪 细菌 血清型 分离鉴定 流行病学

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2014年规模化猪场临床主要疫病的血清学检测 被引量：7

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作者 喻红艳 汤细彪 +4 位作者 董超 刘田 常天明 吴文婷 吴斌 《养殖与饲料》 2015年第11期1-3,共3页

华中农业大学动物疫病诊断中心2014年针对全国26个省市地区规模化猪场送检的38 375份血清样品进行了临床常见疫病的血清学分析,主要包括猪瘟(HC)、伪狂犬病(PR)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS,猪蓝耳病)、猪圆环病毒病(PCV2)、猪细小病毒病(... 华中农业大学动物疫病诊断中心2014年针对全国26个省市地区规模化猪场送检的38 375份血清样品进行了临床常见疫病的血清学分析,主要包括猪瘟(HC)、伪狂犬病(PR)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS,猪蓝耳病)、猪圆环病毒病(PCV2)、猪细小病毒病(PP)、乙型脑炎(JE)等。结果显示,送检血清样品猪瘟抗体检测阳性率为80.56%,其中育肥猪和保育猪送检样品的猪瘟抗体阳性率分别为72.23%和46.23%。伪狂犬病野毒鉴别诊断阳性检出率为27.34%,高于往年同期水平。猪繁殖与呼吸综合征抗体平均阳性率为80.76%。圆环病毒病抗体阳性率为79.55%。 展开更多

关键词 规模化猪场 疫病 血清学检测 阳性率

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2013年全国规模化猪场主要疫病血清学调查分析 被引量：5

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作者 杨正玉 汤细彪 +4 位作者 董超 喻红艳 樊杰 吴斌 陈焕春 《养殖与饲料》 2014年第9期6-8,共3页

运用ELISA方法对全国26个省市地区的34 260份血样进行了HC、PR、PRRS、PCV2、FMD、PP、JE等病毒性疾病的血清抗体检测评估,分析了不同区域不同时期各疾病抗体水平的差异,比较了近三年来国内各疾病抗体水平变化趋势,为规模化猪场当前主... 运用ELISA方法对全国26个省市地区的34 260份血样进行了HC、PR、PRRS、PCV2、FMD、PP、JE等病毒性疾病的血清抗体检测评估,分析了不同区域不同时期各疾病抗体水平的差异,比较了近三年来国内各疾病抗体水平变化趋势,为规模化猪场当前主要疾病防控提供参考依据。 展开更多

关键词 ELISA 抗体 阳性率 伪狂犬病

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一例猪巴氏杆菌病的诊断与防控 被引量：4

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作者 王久红 孙琪 +4 位作者 于学祥 张丙周 库旭钢 范盛先 何启盖 《养猪》 2019年第6期94-96,共3页

猪巴氏杆菌病(Swine pasteurellosis)是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm)引起猪的一种散发性、热性传染病,常以败血症和炎性出血过程为主要特征。巴氏杆菌病的暴发和流行给养猪业造成了巨大的经济损失。研究对湖北某黑猪场... 猪巴氏杆菌病(Swine pasteurellosis)是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm)引起猪的一种散发性、热性传染病,常以败血症和炎性出血过程为主要特征。巴氏杆菌病的暴发和流行给养猪业造成了巨大的经济损失。研究对湖北某黑猪场一例巴氏杆菌病进行诊断,通过猪场实地调查、临床检查、病理剖检和实验室检测,最终确诊该场为A型多杀性巴氏杆菌感染所致发病。并通过药敏试验,筛选敏感药物,改善猪舍环境等一系列针对性措施,效果显著。该案例可为猪场巴氏杆菌病的诊断和防控提供参考。 展开更多

关键词 猪巴氏杆菌病 诊断 防控

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不同猪繁殖与呼吸综合征疫苗组合体液免疫效果评估 被引量：2

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作者 任文慧 阮胜男 +5 位作者 库旭钢 张海峰 于学祥 田梓翰 何启盖 江云波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期21-28,共8页

为了比较不同猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对体液免疫效果的影响,本试验选择新引进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性后备母猪的3个猪场,将各场内猪只按体重分为3个阶段:7~20、20~35和35~50 kg,各场分别从... 为了比较不同猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对体液免疫效果的影响,本试验选择新引进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性后备母猪的3个猪场,将各场内猪只按体重分为3个阶段:7~20、20~35和35~50 kg,各场分别从中选取20头猪,共180头猪。每场选用1种免疫方案,第1组混合疫苗组,为首次免疫PRRS弱毒疫苗(CH-1R株),28 d后加强免疫PRRS灭活疫苗(CH-1a株);第2组弱毒疫苗组,为2次均免疫PRRS弱毒疫苗;第3组灭活疫苗组,为2次均免疫PRRS灭活疫苗。疫苗首次免疫后14、28、42和56 d采集猪血清,进行特异性PRRSV ELISA(N蛋白)检测和中和抗体评价;首次免疫后14和28 d采集猪血液,进行PRRSV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血液内是否存在PRRSV;统计试验猪分娩后头胎的活仔数、断奶仔猪数和窝均总仔数,进行临床数据比较分析。结果显示,35~50 kg体重阶段猪只接种疫苗后ELISA检测抗体水平增高较其他2个阶段更明显。混合疫苗组在免疫56 d时血清ELISA阳性率为100%,且ELISA结果极显著高于弱毒疫苗组和灭活疫苗组(P<0.01)。尽管各组没有产生特异性抗NADC30-like毒株的中和抗体,但针对PRRSV经典和高致病性毒株的中和抗体保护效价结果显示,混合疫苗组在免疫56 d时中和抗体效价极显著高于弱毒疫苗组和灭活疫苗组(P<0.01);RT-qPCR检测未发现阳性猪;各组试验猪分娩后头胎的活仔数、断奶仔猪数和窝均总仔数之间差异不显著(P>0.05)。结果表明,混合疫苗组对体液免疫的促进效果显著优于弱毒疫苗组和灭活疫苗组。该试验为临床正确选择PRRS疫苗免疫方案提供了科学数据。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 疫苗 体液免疫评估 ELISA抗体 中和抗体

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江西省某规模化猪场暴发猪蓝耳病的调查研究 被引量：1

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作者 陈永华 汪恩奇 +7 位作者 张颖 宋伟 吴梦珍 高晓娜 蔡高峰 郑展宏 库旭钢 刘平 《生物灾害科学》 2024年第4期536-545,共10页

【目的】通过对蓝耳病进行流行病学调查,找出防控漏洞,并提出针对性改良建议,为后续猪场生产中规避相关安全隐患问题提供理论借鉴。【方法】对江西省某大型规模猪场从猪蓝耳病阴性场转为阳性场进行了调查,并利用酶联免疫吸附试验(ELISA... 【目的】通过对蓝耳病进行流行病学调查,找出防控漏洞,并提出针对性改良建议,为后续猪场生产中规避相关安全隐患问题提供理论借鉴。【方法】对江西省某大型规模猪场从猪蓝耳病阴性场转为阳性场进行了调查,并利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和双重荧光实时RT-PCR两种检测手段对该母猪场2023年全年进行PRRS病原学监测。【结果】通过调查既往病史得知该母猪场于2023年以前从未爆发过PRRS。在2023年暴发PRRS中,发现母猪群体和仔猪群体的PRRSV平均抗体水平较低,均匀度较差,且在2023年该母猪场PRRS暴发时期多集中于1~6月份,存在经典毒株和高致病性变异株混合感染的情况。【结论】蓝耳疫情对该猪场的生产存在不同程度的影响,主要体现在蓝耳疫情导致猪场抗体阳性水平波动,抗原阳性检出率高;疫情还引发猪场生产水平下降,具体表现为母猪因繁殖障碍和高烧不退而死淘的数量上升,母猪空胎、返情、流产现象频发,健康仔猪的产出量大幅度下降,进而对猪场的经济效益产生了极大的负面影响。 展开更多

关键词 PRRS 猪只群体 血清学检测 病原学检测

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猪圆环病毒3型的分离及致病性分析 被引量：7

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作者 库旭钢 于学祥 +5 位作者 孙琪 李盼盼 张梦佳 罗锐 钱平 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1568-1578,共11页

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/... 猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/CH/HB/XY/2018,全基因组测序分析表明,该毒株属于PCV3a-IM基因亚型。分别用PCV3阳性病料初始匀浆液和第8代细胞培养物采用滴鼻和肌肉注射2种方式感染28日龄断奶仔猪,每组试验猪5头,并设置空白对照组。通过观察和分析试验猪的临床表现、体温、增重、病毒血症、各组织的病毒载量和病理变化等方面评价仔猪感染试验结果。结果显示:PCV3阳性病料初始匀浆液和细胞培养物在感染断奶仔猪后均会引起仔猪出现体温上升、消瘦、皮炎和生长缓慢等现象;病毒血症时间超过14 d,但21 d消失,病毒的组织分布结果表明,PCV3主要感染扁桃体、淋巴结等免疫器官,在脾、肺和扁桃体等组织中的病毒载量最高;感染猪可出现间质性肺炎、淋巴小结增生和嗜酸性粒细胞增多等病理变化。本研究表明PCV3/CH/HB/XY/2018毒株对断奶仔猪有致病性,为PCV3的致病机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 分离 致病性 病毒载量

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基于16S rDNA高通量测序技术分析受水灾影响猪场水样的菌群特征 被引量：2

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作者 洪勃 孙琪 +3 位作者 李栋凡 于学祥 库旭钢 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2092-2100,共9页

2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括1... 2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括19份猪饮用水、22份场内积雨水和7份废弃污水,采用菌落计数和高通量测序技术,对样品的细菌总数和菌群丰度进行分析研究,同时对采集的水样开展消毒剂杀菌试验。结果发现:饮用水、积雨水和污水中的平均含菌量分别为1.55×10^(5)、1.88×10^(8)和3.70×10^(9)CFU·mL^(-1),其中污水中的细菌总数最多,其次为积雨水,饮用水中的细菌总数最少,但远超国家饮用水的安全标准。本研究在不同种类的水样中均检测到了链球菌属、埃希氏杆菌属、弓形杆菌属、不动杆菌属和假单胞菌属等潜在的致病菌属,以及嗜低温弓形杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和豚鼠气单胞菌等致病菌。杀菌试验显示,氯制剂终浓度达到2500mg·L^(-1),作用30 min即可杀灭积雨水和污水中所有的细菌。本研究发现,水灾后养猪场内的水样中含有多种致病菌,规模化猪场可选用含氯消毒剂对场内污染的水体进行消杀,以确保人和猪群的健康安全。 展开更多

关键词 16S rDNA 猪场 洪水 细菌

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猪胸膜肺炎放线杆菌ApxI毒素中和试验的建立与初步应用 被引量：3

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作者 胡耀方 吴昊 +4 位作者 江昌盛 库旭钢 孙琪 于学祥 何启盖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期158-164,共7页

为建立测定血清中猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外毒素ApxI中和抗体的方法,本研究采用(NH4)2SO4沉淀法从血清10型APP培养液中经盐析浓缩提取具有溶血活性的天然毒素ApxI,将毒素与待检血清在37℃孵育2 h,加入4%猪红细胞悬液并反应0.5 h,利用... 为建立测定血清中猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外毒素ApxI中和抗体的方法,本研究采用(NH4)2SO4沉淀法从血清10型APP培养液中经盐析浓缩提取具有溶血活性的天然毒素ApxI,将毒素与待检血清在37℃孵育2 h,加入4%猪红细胞悬液并反应0.5 h,利用酶标仪测定反应混合物上清液的OD_(540nm)值判断溶血程度,计算出能够保护50%红细胞不发生溶血的最低血清稀释倍数,即为该血清的中和效价。利用该方法进一步检测了副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌等阳性血清,无交叉反应,表明该方法特异性较强;利用该方法最高能够检测到中和效价为1:1580的APP ApxI毒素抗体阳性的猪血清,表明建立的中和试验具有较高的敏感性;以BALB/c小鼠为模型的感染试验结果表明,当其血清中ApxI毒素抗体的中和效价达到1:20时能够为小鼠提供有效保护。采用建立的方法检测临床采集的103份猪血清样品,能够有效检测其中和抗体,表明该方法可以应用于临床检测可分泌ApxI毒素的APP的感染和含ApxI毒素的亚单位疫苗免疫效果评估,为评价亚单位疫苗的免疫效果和猪传染性胸膜肺炎的诊断提供了技术支持。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxI毒素 中和试验

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当前新发伪狂犬病的分子流行特点及防控方案 被引量：3

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作者 吴成龙 胡睿铭 +1 位作者 王滇 汤细彪 《中国猪业》 2016年第8期15-20,共6页

猪伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种急性传染病,主要以种猪繁殖障碍、新生仔猪急性死亡、断奶-育肥猪莫名发热和呼吸道症状为主要临床表现,已成为猪场重点防控的病毒性传染病。20世纪80年代,该病在我国大面积暴发流行,给国内... 猪伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种急性传染病,主要以种猪繁殖障碍、新生仔猪急性死亡、断奶-育肥猪莫名发热和呼吸道症状为主要临床表现,已成为猪场重点防控的病毒性传染病。20世纪80年代,该病在我国大面积暴发流行,给国内养殖业带来严重损失。随着伪狂犬病疫苗的广泛应用,该病得到了很好的控制,在国内一直处于平息状态。但自2011年以来,猪伪狂犬病卷土重来,先后在全国不同地区暴发流行,引起了业界的广泛关注和深刻反思。"伪狂犬病毒是否发生变异或毒力增强"、"猪伪狂犬病防控方案是否出现漏洞"、"传统疫苗还能不能提供有效保护"等种种猜测一直在业内流传,笔者所在实验室近年来进行了大量的研究,并相继从临床分离到三十多株伪狂犬病新变异毒株,一些研究结果和数据分析或许为猪伪狂犬病疫情再发找到了佐证。针对猪伪狂犬病流行新形势和发病新特点,结合临床疫情处理和成功防控案例,及时调整免疫策略,探寻一种更为有效的伪狂犬病免疫方案,在当前变异伪狂犬病阳性感染场或受威胁场推广应用中显得尤为重要。 展开更多

关键词 伪狂犬病 变异 进化树分析 免疫方案 保护力

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一例猪瘟混合感染副猪嗜血杆菌和猪蛔虫的案例诊治 被引量：1

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作者 陈晓雨 于学祥 +3 位作者 孙琪 库旭钢 范盛先 何启盖 《猪业科学》 2020年第7期76-80,共5页

2019年11月底,湖北某商品猪场保育猪只出现厌食、消瘦、呼吸困难、咳嗽等症状,偶有病猪急性死亡,为查找病因,控制疫情,减少损失,依次通过流行病学调查、病理剖检和实验室检测,最终确定该发病猪场为感染猪瘟病毒,进而继发感染Hps-4混合感... 2019年11月底,湖北某商品猪场保育猪只出现厌食、消瘦、呼吸困难、咳嗽等症状,偶有病猪急性死亡,为查找病因,控制疫情,减少损失,依次通过流行病学调查、病理剖检和实验室检测,最终确定该发病猪场为感染猪瘟病毒,进而继发感染Hps-4混合感染,并伴随蛔虫感染导致。通过筛选敏感药物治疗,优化生产管理,成功控制了此次疫情。该案例对此次疫情进行了分析总结,就加强生物安全建设,优化养殖管理,实现生产质量可控提供了参考建议。也为猪瘟混合感染呼吸系统细菌性疾病的防控提供参考。 展开更多

关键词 保育猪 混合感染 诊断 防控

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