伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^+突变株的构建及其生物学特性研究

1

作者 刘正飞 陈焕春 +2 位作者 周复春 方六荣 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期304-307,共4页

本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质粒 pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK 15 ,细胞出现病变后 ,反复冻融 3次收毒 ,按 1∶5稀释接种于IBRS 2细胞。在X gal存在下挑取蓝斑 ,蓝斑筛选 3次 ,再进行空斑试验 ,... 本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质粒 pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK 15 ,细胞出现病变后 ,反复冻融 3次收毒 ,按 1∶5稀释接种于IBRS 2细胞。在X gal存在下挑取蓝斑 ,蓝斑筛选 3次 ,再进行空斑试验 ,同时用PCR扩增LacZ基因 ,经 3次空斑纯化 ,随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因 ,证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+ 突变株。TCID50 试验表明 ,TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响 ;Balb/C小鼠试验表明 。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 Bartha株 TK^-/LacZ^+突变株 生物学特性

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伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/gE^-/gI^-基因缺失疫苗的安全性和保护力研究 被引量：17

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作者 刘正飞 陈焕春 +2 位作者 吴斌 何启盖 秦永辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期70-73,共4页

对PrVEaTK-/gE-/gI-基因缺失疫苗的安全性和保护力进行了系统的研究。试验表明,该基因缺失疫苗105 0TCID50和106 0TCID50病毒剂量对妊娠母猪、新生仔猪和育肥猪均是安全的,并可保护妊娠母猪抵抗107 1TCID50强毒的攻击。新生仔猪免疫30d... 对PrVEaTK-/gE-/gI-基因缺失疫苗的安全性和保护力进行了系统的研究。试验表明,该基因缺失疫苗105 0TCID50和106 0TCID50病毒剂量对妊娠母猪、新生仔猪和育肥猪均是安全的,并可保护妊娠母猪抵抗107 1TCID50强毒的攻击。新生仔猪免疫30d后,gE鉴别ELISA试验表明,PrVEaTK-/gE-/gI-免疫猪不产生针对gE的抗体。育肥猪在二次免疫后中和抗体水平显著升高。以105 0TCID50和106 0TCID50疫苗病毒接种家兔、猫和奶山羊等非靶动物,结果非靶动物未出现精神异常或死亡现象,说明该基因缺失疫苗具有极高的生物安全性。 展开更多

关键词 伪狂犬病 病毒 鄂A株 TK^-/gE^-/gI^-基因 基因缺失 疫苗 安全性 保护力

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28S rDNA PCR-RFLP分析在侧耳属系统发育研究中的应用 被引量：31

3

作者 马富英 罗信昌 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期201-205,共5页

对侧耳属 18个种 5 2个菌株及 3个其它属的菌株的 2 8SrDNA 5’端进行PCR扩增 ,得到长度约为 1.4 6kb的片段。对该片段分别用 7种限制性内切酶AluⅠ、BamHⅠ、HaeⅢ、HhaⅠ、HinfⅠ、MspⅠ、TaqⅠ酶切 ,结果表明 ,MspⅠ酶切片段多态性最... 对侧耳属 18个种 5 2个菌株及 3个其它属的菌株的 2 8SrDNA 5’端进行PCR扩增 ,得到长度约为 1.4 6kb的片段。对该片段分别用 7种限制性内切酶AluⅠ、BamHⅠ、HaeⅢ、HhaⅠ、HinfⅠ、MspⅠ、TaqⅠ酶切 ,结果表明 ,MspⅠ酶切片段多态性最高 ,AluⅠ对侧耳属无酶切多态性。聚类分析结果表明 ,菌株间的相似系数为 0 .5 6 9～ 1.0 0 0 ,在 92 %相似水平可将侧耳分为 5大类 :Ⅰ .红平菇和桃红侧耳 ;Ⅱ .鲍鱼菇和囊盖侧耳 ;Ⅲ .具核侧耳 ;Ⅳ .金顶侧耳 ;Ⅴ . 展开更多

关键词 28S RDNA PCR-RFLP分析 侧耳属 系统发育 应用 食用菌 大亚基核糖体DNA 聚合酶链式反应 限制性酶切分析

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小麦根圈细菌中PGPR的筛选及其初步鉴定 被引量：10

4

作者 王平 冯新梅 +2 位作者 王国新 董彪 李阜棣 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期352-356,共5页

通过不灭菌砂培，比较了３１ 株荧光色素产生菌和２２ 株耐寒细菌接种处理麦种后对麦苗株高、地上部干重及总干重的影响，获得具有小麦生长刺激作用的荧光色素产生菌和耐寒细菌各３ 株，其中的２ 株耐寒细菌也是荧光色素产生菌。通过离... 通过不灭菌砂培，比较了３１ 株荧光色素产生菌和２２ 株耐寒细菌接种处理麦种后对麦苗株高、地上部干重及总干重的影响，获得具有小麦生长刺激作用的荧光色素产生菌和耐寒细菌各３ 株，其中的２ 株耐寒细菌也是荧光色素产生菌。通过离体拮抗试验，得到了７ 株对小麦根腐病原菌及５ 株对小麦全蚀病原菌有抑制作用的根圈细菌。选取分别对小麦土传根腐病原菌和全蚀病原菌具有较强拮抗作用的２ 个菌株Ｘｌ６ 和Ｘｙｇ９（ 该菌株对麦苗生长也有较强刺激作用） 进行了初步鉴定，分别属于Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓｂｉｏｖａｒ 展开更多

关键词 荧光假单胞菌群 PGPR 筛选 拮抗作用 小麦

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外源抗药性基因导入香菇体内的研究 被引量：8

5

作者 闫培生 李桂舫 +1 位作者 罗信昌 周启 《食用菌学报》 2002年第1期6-9,共4页

利用PEG转化法将携有潮霉素抗药性基因的质粒载体导入香菇原生质体内 ,获得了抗性转化子 ,但转化率较低 ,每微克DNA仅有 0 .5个转化子。点杂交证实 ,外源基因已整合到香菇染色体上 ;不同转化子在抗性平板上生长速率不同 ,且转化子有丝... 利用PEG转化法将携有潮霉素抗药性基因的质粒载体导入香菇原生质体内 ,获得了抗性转化子 ,但转化率较低 ,每微克DNA仅有 0 .5个转化子。点杂交证实 ,外源基因已整合到香菇染色体上 ;不同转化子在抗性平板上生长速率不同 ,且转化子有丝分裂是稳定的。香菇转基因技术的成功 ,为利用该技术克隆香菇内源基因及启动子 ,将外源有益目的基因导入香菇体内 ,为培育香菇基因工程菌株提供了可能。 展开更多

关键词 抗药性 基因导入 香菇 遗传转化 基因工程

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导入四碳二羧酸转移酶基因对费氏中华根瘤菌共生固氮效率的影响 被引量：8

6

作者 李友国 李杰 +2 位作者 刘墨青 周岷江 周俊初 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第5期1-7,共7页

将来自苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti)的四碳二羧酸转移酶基因(dctABD)经 pIJ2 92 5克隆到广宿主、稳定性质粒 pTR10 2上 ,获得诱导型表达的重组质粒 pHN2 0 2。在此基础上再引入来自 pDB30所含的发光酶基因 (luxAB)作分子标... 将来自苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti)的四碳二羧酸转移酶基因(dctABD)经 pIJ2 92 5克隆到广宿主、稳定性质粒 pTR10 2上 ,获得诱导型表达的重组质粒 pHN2 0 2。在此基础上再引入来自 pDB30所含的发光酶基因 (luxAB)作分子标记 ,以 pTR10 2为基础构建成带有dctABD和luxAB的重组质粒 pHN2 0 5。经三亲本接合转移 ,将重组质粒 pHN2 0 5导入费氏中华根瘤菌 (Sinorhizobium fredii)HNO1,GR3和YC4。与出发菌相比较的盆栽试验结果表明 :HN0 1(pHN2 0 5)和GR3(pHN2 0 5)分别在宁镇一号和川早一号大豆上能显著提高植株地上部分干重 (生物量 )和总氮量 ,YC4 (pHN2 0 5)在黑龙 33大豆上能同时显著提高植株地上部分干重 (生物量 ) ,总氮量和根瘤鲜重。本研究结果表明 :导入dctABD基因对共生固氮效率的增效性与受体根瘤菌和大豆品种等因素有关。以luxAB为报告基因进行的转移接合子培养条件下分离单菌落和共生条件下形成根瘤的发光活性检测结果表明 :pHN2 0 5可在供试费氏中华根瘤菌中稳定遗传。 展开更多

关键词 四碳二羧酸转移酶基因 费氏中华根瘤菌 发光酶

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苏云金芽孢杆菌及其杀虫晶体蛋白作用机制的研究进展 被引量：13

7

作者 刘子铎 喻子牛 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期207-213,共7页

综合叙述了苏云金芽胞杆菌Bacillusthuringiensis和杀虫晶体蛋白的作用机制及在不同水平上解释这些机制的一些流行模型和有关亚分子结构的作用

关键词 苏云金芽胞杆菌 杀虫晶体蛋白 作用机制

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利用PCR技术直接鉴定苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因型的快速方法 被引量：3

8

作者 刘子铎 林黎阳 +2 位作者 孙明 陈亚华 喻子牛 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期5-8,共4页

根据PCR程序中热变性温度可使菌体裂解，释放出DNA的原理，利用苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白不同基因型的特异混合引物，对苏云金芽孢杆菌营养体直接进行PCR分析。根据不同基因型的特异扩增产物片段的分子量大小便可直接确定该苏云金芽... 根据PCR程序中热变性温度可使菌体裂解，释放出DNA的原理，利用苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白不同基因型的特异混合引物，对苏云金芽孢杆菌营养体直接进行PCR分析。根据不同基因型的特异扩增产物片段的分子量大小便可直接确定该苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的基因型。本文对本室筛选天然菌株和苏云金芽孢杆菌克隆菌株分别进行了cryl基因的PCR分析。表明，该法结果可靠快速易行，在方法学上，为苏云金芽孢杆菌菌株鉴定、新菌株的筛选和基因型分析提供了极大的方便。 展开更多

关键词 微生物农药 苏云金杆菌 杀虫晶体蛋白 基因型

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异育银鲫对嗜水气单胞菌灭活菌苗的免疫应答 被引量：9

9

作者 张秋胜 陈昌福 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期271-274,共4页

采用福尔马林灭活的嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)菌苗免疫接种异育银鲫 ,通过测定受免鱼血清中凝集抗体效价 ,溶菌酶活性 ,血液中吞噬细胞的吞噬活性 ,杀菌活性并通过鱼体攻毒试验 ,探讨了异育银鲫对福尔马林灭活的嗜水气单胞菌... 采用福尔马林灭活的嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)菌苗免疫接种异育银鲫 ,通过测定受免鱼血清中凝集抗体效价 ,溶菌酶活性 ,血液中吞噬细胞的吞噬活性 ,杀菌活性并通过鱼体攻毒试验 ,探讨了异育银鲫对福尔马林灭活的嗜水气单胞菌菌苗的免疫应答状况。结果表明 ,接种 2 8d后 ,受免鱼血清中凝集抗体效价和溶菌酶活性均值分别为 1∶18.89和 15 6 .36U/ml,相应的对照组则为 1∶0 .83和 138.6 8U/ml;受免鱼血液中白细胞吞噬百分比和吞噬指数分别为 6 3.38%和 6 .0 2 ,而对照组的分别为 47.95 %和 5 .0 8;免疫组和对照组白细胞的杀菌指数分别为 1.5 9和 1.15 ;受免鱼的免疫保护力达到 73.7%。 展开更多

关键词 异育银鲫 嗜水气单胞菌 免疫应答 灭活菌苗

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苏云金芽胞杆菌的遗传多样性 I.遗传标记及其应用 被引量：3

10

作者 张宏宇 曾晓慧 +1 位作者 邓望喜 喻子牛 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期59-62,共4页

关键词 苏云金芽胞杆菌 遗传多样性 遗传标记

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用Tn5标记带发光酶基因的华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakui)7653R质粒 被引量：2

11

作者 郭先武 张忠明 +3 位作者 胡福荣 莫才清 李阜棣 陈华癸 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期147-150,共4页

在ｐＲＫ２０７３的辅助作用下，通过三亲本接合转移，将Ｔｎ５（ｓａｃＢ－ｌｕｘＡＢ）插入华癸根瘤菌７６５３Ｒ菌株基因组中。将３２００个Ｔｎ５标记菌株影印到含有８％蔗糖的ＹＭＡ平板，检测这些菌株的发光酶活性和新霉素抗性。... 在ｐＲＫ２０７３的辅助作用下，通过三亲本接合转移，将Ｔｎ５（ｓａｃＢ－ｌｕｘＡＢ）插入华癸根瘤菌７６５３Ｒ菌株基因组中。将３２００个Ｔｎ５标记菌株影印到含有８％蔗糖的ＹＭＡ平板，检测这些菌株的发光酶活性和新霉素抗性。共获得８个菌株，其选择标记消失。质粒检测发现其共生质粒有不同程度的缺失甚至消除。结瘤实验证明，所有共生质粒部分缺失（有的缺失达１／３）的菌株依然结瘤。经用ｌｕｘＡＢ探针的分子杂交证实，８个菌株中有３个对应的标记菌株其Ｔｎ５插在共生质粒上。 展开更多

关键词 华癸根瘤菌 共生质粒 分子标记 发光酶基因

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2株重组根瘤菌在4个大豆品种根圈中定殖动态的比较研究 被引量：3

12

作者 李友国 周俊初 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期531-534,共4页

在灭菌和未灭菌土盆栽缩影条件下 ,比较研究了重组大豆根瘤菌HN0 1DL和TA113QD在 4个不同品种大豆根圈中的定殖动态与水平 ,并初步考察了其与共生效应的关系。结果表明 :HN0 1DL在渝豆 1号和宁镇 1号大豆根圈表现出较强的适应性和竞争... 在灭菌和未灭菌土盆栽缩影条件下 ,比较研究了重组大豆根瘤菌HN0 1DL和TA113QD在 4个不同品种大豆根圈中的定殖动态与水平 ,并初步考察了其与共生效应的关系。结果表明 :HN0 1DL在渝豆 1号和宁镇 1号大豆根圈表现出较强的适应性和竞争性 ,而TA113QD则在Williams大豆根圈的适应性较强 ,在宁镇 1号大豆根圈的适应性较差 ,且供试菌在 4种大豆根圈定殖动态与水平的差异在共生效应上也有一定程度的反映 。 展开更多

关键词 重组根瘤菌 大豆 品种 根圈 定殖动态 比较研究 共生效应

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费氏中华根瘤菌共生质粒缺失对结瘤和固氮能力的影响 被引量：2

13

作者 缪礼鸿 马向东 周俊初 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期117-122,共6页

费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01在大豆上的结瘤表现为非品种专一性,其共生质粒pSymHN01b在诱动转入另一非品种专一性结瘤菌株WWG18SR后,获得的转移接合子WWG18SRN1中的pSymHN01b缺失约40 kb。盆栽结瘤试验证明,pSymHN01b的... 费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01在大豆上的结瘤表现为非品种专一性,其共生质粒pSymHN01b在诱动转入另一非品种专一性结瘤菌株WWG18SR后,获得的转移接合子WWG18SRN1中的pSymHN01b缺失约40 kb。盆栽结瘤试验证明,pSymHN01b的缺失导致WWG18SRN1由非品种结瘤菌株转变为大豆品种专一性结瘤菌株,并失去了在所有供试的大豆品种上固氮的能力。在获得了完整的pSymHN01b的转移接合子WWG18SRN2存在时,WWG18SRN1在黑农33上的结瘤受到抑制。 展开更多

关键词 费氏中华根瘤菌 共生质粒缺失 结瘤 固氮能力

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根瘤菌的结瘤基因与结瘤因子 被引量：4

14

作者 郭先武 《生物技术通报》 CAS CSCD 1998年第4期16-21,共6页

根瘤菌的结瘤基因与结瘤因子郭先武（华中农业大学农业部农业微生物重点实验室武汉４３００７０）根瘤菌侵染豆科植物形成根瘤，并合成ＮＨ３供植物利用，其自身也在植物环境中得以有效延续。这就是根瘤菌与宿主植物的共生关系。形成共... 根瘤菌的结瘤基因与结瘤因子郭先武（华中农业大学农业部农业微生物重点实验室武汉４３００７０）根瘤菌侵染豆科植物形成根瘤，并合成ＮＨ３供植物利用，其自身也在植物环境中得以有效延续。这就是根瘤菌与宿主植物的共生关系。形成共生关系的基因分成三类［７］，一类是... 展开更多

关键词 根瘤菌 结瘤基因 结瘤因子 植物信号分子

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黑木耳菌株的分子鉴定与遗传多样性(英文) 被引量：3

15

作者 闫培生 蒋家慧 +1 位作者 罗信昌 周启 《莱阳农学院学报》 2001年第4期297-301,共5页

利用rDNA -RFLP和RAPD对黑木耳菌株进行了鉴定和遗传从样性评估。结果表明 ,ITS的HaeⅢ和MspⅠ酶切电泳图谱可用于黑木耳种的快速鉴定 ,筛选的RAPD引物与标记可用于黑木耳菌株的快速鉴定 ;供试黑木耳菌株的DNA相似系数是已分析的食用菌... 利用rDNA -RFLP和RAPD对黑木耳菌株进行了鉴定和遗传从样性评估。结果表明 ,ITS的HaeⅢ和MspⅠ酶切电泳图谱可用于黑木耳种的快速鉴定 ,筛选的RAPD引物与标记可用于黑木耳菌株的快速鉴定 ;供试黑木耳菌株的DNA相似系数是已分析的食用菌中相似系数最低的种类 ,表明黑木耳菌株拥有丰富的遗传多样性。 展开更多

关键词 分子鉴定 遗传多样性 胶质食用菌 木耳 黑栮菌株

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利用发光酶基因监测根瘤菌重组质粒的转移性

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作者 李友国 周俊初 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期1-4,共4页

经三亲本杂交,比较测定了重组大豆根瘤菌HN01DNL和TA11DNL中所含重组质粒pHN307在人工滤膜和灭菌土壤杂交条件下、向华癸中生根瘤菌7653R和荧光假单胞菌Pf.X1-5的转移频率;并初步跟踪了pHN307在根盒-土壤缩影、小区试验和环境释放中向... 经三亲本杂交,比较测定了重组大豆根瘤菌HN01DNL和TA11DNL中所含重组质粒pHN307在人工滤膜和灭菌土壤杂交条件下、向华癸中生根瘤菌7653R和荧光假单胞菌Pf.X1-5的转移频率;并初步跟踪了pHN307在根盒-土壤缩影、小区试验和环境释放中向土著细菌的转移性,为考察所构建重组根瘤菌在田间应用时的安全性提供了一定的实验依据。 展开更多

关键词 重组质粒 转移性 发光酶基因 大豆根瘤菌

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碳源对苏云金芽胞杆菌融合基因cry1D-lacZ表达的影响 被引量：1

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作者 张利莉 Aronson I.Arthur 喻子牛 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期301-304,共4页

本研究检测了在不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中不同碳源对杀虫晶体蛋白cry1D -lacZ融合基因表达的影响。研究表明 ,cry1D -lacZ在同一菌株中的表达因碳源不同而异 ,在碳源相同的条件下不同菌株的表达也不相同 ,而衍生菌株HD - 133... 本研究检测了在不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中不同碳源对杀虫晶体蛋白cry1D -lacZ融合基因表达的影响。研究表明 ,cry1D -lacZ在同一菌株中的表达因碳源不同而异 ,在碳源相同的条件下不同菌株的表达也不相同 ,而衍生菌株HD - 133- 5的代谢途径非常特殊。琥珀酸钠作碳源时导致芽胞形成提前 ,cry1D -lacZ融合基因表达也随之提前。而以乙酸钠作碳源时 ,在不同亚种的菌株中都能高水平、持续稳定地表达。 展开更多

关键词 碳源 苏云金芽胞杆菌 融合基因 cry1D-lacZ 表达

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