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小鼠骨生成诱导因子基因逆转录病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
郑翠侠
张晓娜
+2 位作者
韩兵
宋怀东
马勤耘
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1501-1504,共4页
目的构建小鼠骨生成诱导因子(OIF)基因重组逆转录病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法 PCR法扩增OIF-3FLAG基因,测序后克隆入逆转录病毒载体pMSCV PIG(Puro-IRES-GFP)的相应位点,构建重组逆转录病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,...
目的构建小鼠骨生成诱导因子(OIF)基因重组逆转录病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法 PCR法扩增OIF-3FLAG基因,测序后克隆入逆转录病毒载体pMSCV PIG(Puro-IRES-GFP)的相应位点,构建重组逆转录病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,并对重组体进行测序鉴定。应用脂质体分别将PMSCV PIG-OIF-3FLAG和VSVG、GAG-POL辅助病毒包装载体共转染至293T包装细胞,48h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达;收集包装细胞上清液,进一步用含有包装病毒的上清液再感染293T细胞,48 h后加入3μg/mL嘌呤霉素(puromycin),连续7d,筛选病毒感染的稳定表达pMSCVPIG-OIF-3FLAG的293T细胞株,分别采用Real-time PCR技术和Western blotting方法检测293T细胞OIF mRNA及其蛋白表达。结果构建OIF基因逆转录病毒表达载体PMSCV PIG-OIF-3FLAG,经酶切及测序鉴定证实目的基因插入位点和读码框架正确;病毒感染293T细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达小鼠OIF的293T细胞株;Real-time PCR和Western blotting鉴定证实OIF mRNA和蛋白在该细胞株中呈高表达。结论成功构建小鼠OIF基因的逆转录病毒载体,并获得稳定高表达OIF基因的293T细胞株。
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关键词
逆转录病毒载体
小鼠骨生成诱导因子
293T细胞
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职称材料
题名
小鼠骨生成诱导因子基因逆转录病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
郑翠侠
张晓娜
韩兵
宋怀东
马勤耘
机构
上海
交通大学
医学院
附属
第九人民
医院
呼吸
病
科
医学院附属瑞金医院分子医学中心上海市内分泌代谢病研究所
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1501-1504,共4页
基金
上海市自然科学基金(10ZR1418300)~~
文摘
目的构建小鼠骨生成诱导因子(OIF)基因重组逆转录病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法 PCR法扩增OIF-3FLAG基因,测序后克隆入逆转录病毒载体pMSCV PIG(Puro-IRES-GFP)的相应位点,构建重组逆转录病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,并对重组体进行测序鉴定。应用脂质体分别将PMSCV PIG-OIF-3FLAG和VSVG、GAG-POL辅助病毒包装载体共转染至293T包装细胞,48h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达;收集包装细胞上清液,进一步用含有包装病毒的上清液再感染293T细胞,48 h后加入3μg/mL嘌呤霉素(puromycin),连续7d,筛选病毒感染的稳定表达pMSCVPIG-OIF-3FLAG的293T细胞株,分别采用Real-time PCR技术和Western blotting方法检测293T细胞OIF mRNA及其蛋白表达。结果构建OIF基因逆转录病毒表达载体PMSCV PIG-OIF-3FLAG,经酶切及测序鉴定证实目的基因插入位点和读码框架正确;病毒感染293T细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达小鼠OIF的293T细胞株;Real-time PCR和Western blotting鉴定证实OIF mRNA和蛋白在该细胞株中呈高表达。结论成功构建小鼠OIF基因的逆转录病毒载体,并获得稳定高表达OIF基因的293T细胞株。
关键词
逆转录病毒载体
小鼠骨生成诱导因子
293T细胞
Keywords
retroviral vector； mouse osteoinductive factor； 293T cell；
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠骨生成诱导因子基因逆转录病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达
郑翠侠
张晓娜
韩兵
宋怀东
马勤耘
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
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