小鼠Lewis肺癌细胞Foxp3的表达对T淋巴细胞增殖的影响及机制 被引量：8

1

作者 历春 盖晓东 +2 位作者 贾婷 付海英 李一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期986-991,996,共7页

目的:检测小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞中Foxp3基因的表达,研究小鼠LLC细胞中Foxp3过表达对T淋巴细胞的增殖和TGF-β1和IL-10表达的影响,探讨LLC细胞中Foxp3的表达在肿瘤免疫逃逸中的作用及可能机制。方法:分别采用RT-PCR和免疫组化染色法检... 目的:检测小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞中Foxp3基因的表达,研究小鼠LLC细胞中Foxp3过表达对T淋巴细胞的增殖和TGF-β1和IL-10表达的影响,探讨LLC细胞中Foxp3的表达在肿瘤免疫逃逸中的作用及可能机制。方法:分别采用RT-PCR和免疫组化染色法检测LLC细胞中Foxp3的mRNA和蛋白表达。构建pcDNA3.1-Foxp3重组质粒,采用FuGENEHD瞬时转染LLC细胞,实验分3组:LLC组,pcDNA3.1-LLC组及pcDNA3.1-Foxp3-LLC组。RT-PCR和免疫组化方法分别检测转染48小时后Foxp3基因的表达,通过淋巴细胞转化试验检测Foxp3过表达对T淋巴细胞增殖的影响,RT-PCR和ELISA方法分别检测Foxp3过表达对TGF-β1和IL-10的mRNA表达及蛋白分泌的影响。结果:在LLC细胞中检测到Foxp3mRNA及蛋白的表达;瞬时转染48小时后pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞中Foxp3表达增高,与LLC组和pcDNA3.1-LLC组相比差异显著(P<0.01);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞及培养上清对T淋巴细胞增殖的抑制率均明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P<0.05);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组TGF-β1、IL-10mRNA和蛋白的表达水平明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P<0.05)。结论:LLC细胞表达Foxp3,Foxp3可能通过上调TGF-β1和IL-10的表达来抑制T淋巴细胞的增殖,进而参与肿瘤的免疫逃逸。 展开更多

关键词 FOXP3 真核表达载体 基因克隆 转染 转化生长因子Β1 白介素10

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结直肠癌组织中B7-H1和B7-H4表达与Foxp3^+调节性T细胞浸润的关联性 被引量：5

2

作者 王丹 李怡飞 +3 位作者 历春 董志恒 董营 盖晓东 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期543-547,696,共6页

目的:探讨B7-H1和B7-H4在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其与肿瘤中Foxp3^+调节性T细胞(Treg)浸润的关系,为判定CRC的生物学行为及预后提供依据。方法:免疫组织化学法检测56例CRC患者肿瘤标本及癌旁正常组织样本中B7-H1、B7-H4蛋白的表达... 目的:探讨B7-H1和B7-H4在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其与肿瘤中Foxp3^+调节性T细胞(Treg)浸润的关系,为判定CRC的生物学行为及预后提供依据。方法:免疫组织化学法检测56例CRC患者肿瘤标本及癌旁正常组织样本中B7-H1、B7-H4蛋白的表达和Treg的浸润情况,并与CRC患者的临床病理特征进行关联性分析。结果:CRC患者CRC组织中B7-H1阳性表达率高于癌旁正常组织(χ~2=72.34,P<0.01)。不同浸润深度的CRC组织中B7-H1表达频数比较差异有统计学意义(P<0.01);淋巴结转移阳性者CRC组织中B7-H1高表达频数高于淋巴结转移阴性者(P<0.01);Duke’s分期C+D者CRC组织中B7-H1高表达频数高于Duke’s分期A+B者(P<0.01)。CRC组织中B7-H4阳性表达率高于癌旁正常组织(χ~2=78.92,P<0.01)。不同浸润深度的CRC组织中B7-H4高表达频数比较差异有统计学意义(P<0.05),淋巴结转移阳性者CRC组织中B7-H4高表达频数高于淋巴结转移阴性者(P<0.05);肿瘤组织中Treg阳性细胞数明显高于癌旁正常组织(P<0.01);分化程度不同CRC组织中Treg阳性细胞数比较差异有统计学意义(P<0.01);淋巴结转移阳性者CRC组织中Treg阳性细胞数高于淋巴结转移阴性者(P<0.01)。Treg浸润与B7-H1的表达有相关性(P<0.01,Cramer’s=0.463),Treg浸润与B7-H4的表达有相关性(P<0.05,Cramer’s=0.320)。结论:B7-H1和B7-H4在CRC组织中呈异常高表达,并与肿瘤中Treg浸润增加有关,可作为评估CRC预后的指标。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 B7-H1 B7-H4 调节性T细胞

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Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义 被引量：5

3

作者 刘楠楠 李玉林 +2 位作者 孙立伟 姜晶 张继红 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期763-767,I0004,共6页

目的:研究细胞信号传导分子Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生发展的关系及意义。方法:选取53例乳腺导管癌和50例癌周正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织和癌周正常组织中Smad2和Smad4蛋白的表达... 目的:研究细胞信号传导分子Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生发展的关系及意义。方法:选取53例乳腺导管癌和50例癌周正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织和癌周正常组织中Smad2和Smad4蛋白的表达水平,并评估二者的表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果:乳腺癌组织中Smad2蛋白表达水平明显高于癌周正常组织(Z=-2.08,P<0.05);乳腺癌组织中Smad4蛋白表达水平明显低于癌周正常组织(Z=-5.01,P<0.01)。乳腺癌组织中Smad2和Smad4蛋白的阳性表达率与患者年龄无关(r=0.035,P>0.05;r=-0.077,P>0.05),与肿瘤大小无关(r=0.128,P>0.05;r=0.133,P>0.05),与淋巴结转移无关(r=0.163,P>0.05;r=0.006,P>0.05),与是否有远处转移无关(r=0.113,P>0.05;r=0.126,P>0.05),与ER的表达无关(r=0.056,P>0.05;r=0.047,P>0.05),与PR的表达无关(r=0.129,P>0.05;r=0.107,P>0.05);但与HER2的阳性表达率呈负相关关系(r=-0.388,P<0.01;r=-0.360,P<0.01),与乳腺癌病理分级呈负相关关系(r=-0.331,P<0.05;r=-0.388,P<0.01);乳腺癌组织中Smad2与Smad4的表达呈正相关关系(r=0.830,P<0.01)。结论:Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为评估乳腺癌恶性程度及预后的重要生物学指标。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 细胞信号传导分子Smad2 细胞信号传导分子Smad4 免疫组织化学

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敲低STAT3基因可下调存活蛋白(survivin)水平促进U87MG胶质瘤细胞凋亡 被引量：8

4

作者 王雷 刘艳波 +1 位作者 赵信理 沈维高 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期789-792,796,共5页

目的探讨信号转导子与转录激活子3(STAT3)特异性小干扰RNA(siRNA)对U87MG胶质瘤细胞的促凋亡作用及其作用机制。方法体外培养U87MG胶质瘤细胞,利用MTT法观察si STAT3质粒对细胞增殖的影响,通过流式细胞术及吖啶橙染色观察其对细胞凋亡影... 目的探讨信号转导子与转录激活子3(STAT3)特异性小干扰RNA(siRNA)对U87MG胶质瘤细胞的促凋亡作用及其作用机制。方法体外培养U87MG胶质瘤细胞,利用MTT法观察si STAT3质粒对细胞增殖的影响,通过流式细胞术及吖啶橙染色观察其对细胞凋亡影响,反转录PCR和Western blot法检测下调STAT3对存活蛋白(survivin)的调控效应。结果 si STAT3质粒可明显抑制U87MG胶质瘤细胞增殖,敲低STAT3可明显促进胶质瘤细胞凋亡,下调STAT3水平可明显降低survivin mRNA和蛋白水平。结论敲低U87MG细胞STAT3可下调survivn水平、促进胶质瘤细胞凋亡。 展开更多

关键词 胶质瘤 信号转导子与转录激活子3(STAT3) RNA干涉 凋亡 SURVIVIN

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pEGFP-N1脂质体转染方法的优化及其应用 被引量：5

5

作者 李凤娥 向国艳 +4 位作者 孔繁利 郝峰 杨紫嫣 郑岩 方芳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期612-616,I0004,共6页

目的:应用脂质体介导的转染方法将pEGFP-N1转染入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中,并获得较佳的优化方案,阐明该优化条件在转染其他目的基因时的适用性。方法:分别选取不同配比的质粒和脂质体,将pEGFP-N1转入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮... 目的:应用脂质体介导的转染方法将pEGFP-N1转染入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中,并获得较佳的优化方案,阐明该优化条件在转染其他目的基因时的适用性。方法:分别选取不同配比的质粒和脂质体,将pEGFP-N1转入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞。转染后36h,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况和转染效率;台盼蓝染色法检测细胞存活率,以此获得优化的转染条件。同时将pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5分别以上述条件转染,并获取相应优化的转染条件。结果:在质粒质量固定的条件下,随着脂质体质量的增加,其转染效率和细胞存活率升高;但是当质粒∶脂质体>1∶4时,转染效率和细胞存活率下降。在质粒和脂质体比例固定而质量增加时,其转染效率和细胞存活率下降;当质粒∶脂质体>3.2μg∶12.8μL时,转染效率降低。应用脂质体介导的方法转染pEGFP-N1和转染pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5时,在质粒与脂质体的配比为1∶4(3.2μg∶12.8μL)时,转染效率达最高。结论:在应用脂质体介导的目的基因转染时,pEGFP-N1优化的转染条件具有较为广泛的适用性,可用作后续目的基因高效转染优化条件。 展开更多

关键词 脂质体 PEGFP-N1 转染 甲状腺滤泡上皮细胞

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天冬酰胺合成酶对移植黑色素瘤APP/PS1小鼠骨骼肌减少的影响 被引量：2

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作者 董营 吕航 +8 位作者 郭家女 郑鸿 郭丹 王力可 王丹 陈昌捷 孙连坤 张勇 于春艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期849-856,共8页

目的:探讨天冬酰胺合成酶(ASNS)在移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白/早老素1(APP/PS1)小鼠骨骼肌减少中的作用,并阐明其作用机制。方法:C57BL/6J(C57)小鼠和APP/PS1小鼠分别移植黑色素瘤B16细胞(C57移植瘤组和APP/PS1移植瘤组),同时... 目的:探讨天冬酰胺合成酶(ASNS)在移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白/早老素1(APP/PS1)小鼠骨骼肌减少中的作用,并阐明其作用机制。方法:C57BL/6J(C57)小鼠和APP/PS1小鼠分别移植黑色素瘤B16细胞(C57移植瘤组和APP/PS1移植瘤组),同时设C57对照组和APP/PS1对照组,每组7只。取小鼠腓肠肌组织,分析天平称量小鼠腓肠肌质量,计算小鼠腓肠肌质量与体质量比值即肌肉减少症指数(SI),采用HE染色观察小鼠腓肠肌组织形态表现,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测小鼠腓肠肌组织中肌肉组织特异萎缩相关基因E3泛素连接酶1(Atrogin-1)、肌肉环指蛋白1(MuRF1)和ASNS mRNA表达水平,Western blotting法检测小鼠腓肠肌组织中ASNS及内质网应激途径相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子4(ATF4)、真核细胞起始因子2α(eIF2α)和磷酸化eIF2α(p-eIF2α)蛋白表达水平。结果:与C57对照组比较,C57移植瘤组小鼠腓肠肌SI降低(P<0.05),腓肠肌细胞呈玻璃样变性,肌浆蓝染,部分细胞核可见核内移现象,小鼠腓肠肌组织中Atrogin-1、MuRF1和ASNS mRNA表达水平升高(P<0.05),ASNS蛋白表达水平升高(P<0.05),GRP78、ATF4蛋白表达水平和p-eIF2α/eIF2α蛋白表达水平比值明显升高(P<0.05);与APP/PS1对照组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠腓肠肌SI降低(P<0.05),腓肠肌部分肌纤维肿胀,部分肌纤维变细,细胞核内移现象多见,肌浆颜色以红色为主,腓肠肌组织中Atrogin-1、MuRF1和ASNS mRNA表达水平升高(P<0.05),ASNS蛋白表达水平升高(P<0.05),GRP78、ATF4蛋白表达水平和p-eIF2α/eIF2α蛋白表达水平比值明显升高(P<0.05);与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠腓肠肌SI降低(P<0.05),腓肠肌组织中Atrogin-1 mRNA表达水平升高(P<0.05),ASNS mRNA水平降低(P<0.05),ASNS蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),GRP78和ATF4蛋白表达水平及p-eIF2α/eIF2α蛋白表达水平比值明显降低(P<0.05)。结论:APP/PS1移植黑色素瘤模型小鼠腓肠肌更易发生肌肉减少,其机制可能与适应性反应ASNS转录水平降低有关,内质网应激PERK-eIF2a-ATF4信号途径可能参与调控ASNS转录活性。 展开更多

关键词 天冬酰胺合成酶 肌肉减少 淀粉样蛋白前体蛋白/早老素1 移植瘤 黑色素瘤B16细胞

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子宫颈浸润性癌组织中α-SMA和FAP表达及临床意义 被引量：3

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作者 李长平 盖晓东 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1248-1252,共5页

目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(ɑ-smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(fibroblast-activating protein,FAP)在正常子宫颈、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)、子宫颈浸润性癌组织的表达,并分析... 目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(ɑ-smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(fibroblast-activating protein,FAP)在正常子宫颈、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)、子宫颈浸润性癌组织的表达,并分析二者表达与子宫颈浸润性癌临床病理指标、浸润转移及预后的关系。方法应用免疫组化Eli Vision两步法检测20例正常子宫颈、20例CIN及98例子宫颈浸润性癌组织中α-SMA和FAP的表达。比较三组中α-SMA和FAP的表达水平,以及二者与子宫颈浸润性癌临床病理特征的相关性。结果α-SMA和FAP在正常子宫颈、CIN中不表达,二者在子宫颈浸润性癌中均表达于肿瘤间质成纤维细胞的胞质内,FAP在肿瘤细胞中有少量表达。α-SMA在子宫颈浸润性癌间质中的阳性率为82.7%(81/98),与临床分期、病理分级和淋巴结转移相关(P<0.05);FAP在子宫颈浸润性癌间质中的阳性率为79.6%(78/98),FAP表达与子宫颈浸润性癌的临床分期、病理分级和淋巴结转移相关(P<0.05);α-SMA和FAP均与患者年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。α-SMA和FAP在子宫颈浸润性癌组织标本中表达在区域上有一致性,在表达强度上呈明显正相关。经直线相关分析α-SMA和FAP呈直线相关(r=0.829,P=0.000)。结论α-SMA和FAP在子宫颈浸润性癌生长、浸润和转移方面发挥一定作用,可作为预测子宫颈浸润性癌预后的可靠指标。 展开更多

关键词 子宫颈肿瘤 Α-SMA FAP 癌相关成纤维细胞 免疫组织化学

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内质网应激PERK-eIF2α-ATF4信号通路在延缓APP/PS1小鼠移植瘤生长中的作用 被引量：1

8

作者 董营 郭家女 +9 位作者 王思懿 郭丹 王力可 温旭 刘立峰 曲萌 于春艳 刘楠楠 王丹 陈昌捷 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期324-330,共7页

目的:探讨内质网应激(ERS)及内质网自噬对移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)小鼠移植瘤生长的抑制作用,并阐明蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(eIF2α)-活化转录因子4(ATF4)通路在其抑制作用中的... 目的:探讨内质网应激(ERS)及内质网自噬对移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)小鼠移植瘤生长的抑制作用,并阐明蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(eIF2α)-活化转录因子4(ATF4)通路在其抑制作用中的可能机制。方法:体外培养B16细胞,通过皮下注射分别植入C57和APP/PS1小鼠背部皮下,建立C57BL/6J和APP/PS1雄性小鼠移植黑色素瘤模型,作为C57移植瘤组(n=7)和APP/PS1移植瘤组(n=7)。观察2组小鼠出瘤时间并计算肿瘤体积,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组小鼠移植瘤组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、PERK和溶酶体组织蛋白酶L(cathepsin L)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组小鼠移植瘤组织中GRP78、PERK、磷酸化PERK(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)和内质网自噬标志蛋白FAM134B蛋白表达水平,免疫组织化学法检测移植瘤组织中蛋白质二硫异构酶(PDI)蛋白表达情况,免疫荧光法测定2组小鼠移植瘤组织中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)水平。结果:与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚,肿瘤体积小(P<0.05),移植瘤组织中ERS相关基因GRP78和PERK mRNA表达水平升高(P<0.05),移植瘤组织中GRP78、p-eIF2α/eIF2α和ATF4蛋白表达水平及p-PERK/PERK比值均升高(P<0.05)。C57移植瘤组肿瘤细胞胞质内多见黑色素颗粒,为移植瘤组织的形态特征,可见少量棕黄色颗粒,为PDI阳性颗粒;APP/PS1移植瘤组肿瘤细胞胞质内可见少量黑色素颗粒和广泛表达的棕黄色颗粒。与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠移植瘤组织中内质网自噬标志蛋白FAM 134B蛋白表达水平升高(P<0.05),cathepsin L mRNA表达水平升高(P<0.05),ATP水平降低(P<0.05)。结论:APP/PS1移植瘤模型小鼠肿瘤生长缓慢,其机制可能与ERS的PERK-eIF2α-ATF4信号通路被激活有关。 展开更多

关键词 蛋白激酶R样内质网激酶 内质网应激 内质网自噬 淀粉蛋白前体蛋白 早老素1 移植黑色素瘤

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Hiwi基因靶向沉默对乳腺癌MCF-7/ADM细胞化疗敏感性的影响

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作者 任爱华 王大伟 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期743-746,共4页

目的:探讨耐阿霉素乳腺癌MCF-7/ADM细胞应用Hiwi基因靶向沉默技术后对阿霉素敏感性的变化,阐明Hiwi基因在乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药机制中的作用。方法:MCF-7/ADM细胞分为对照组、Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组,分别转染Hiwi control、Hi... 目的:探讨耐阿霉素乳腺癌MCF-7/ADM细胞应用Hiwi基因靶向沉默技术后对阿霉素敏感性的变化,阐明Hiwi基因在乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药机制中的作用。方法:MCF-7/ADM细胞分为对照组、Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组,分别转染Hiwi control、Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2 3种不同载体,应用实时定量PCR和Western blotting法检测Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平,判断转染效率。转染后各组乳腺癌MCF-7/ADM细胞加入不同浓度阿霉素(0、0.1、0.5和1.0mg·L^(-1)),0mg·L^(-1)阿霉素组为对照组,采用MTT法检测各组MCF-7/ADM细胞的存活率,即耐药敏感性。结果:与对照组比较,转染后Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2组细胞中Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01)。与对照组比较,经不同浓度阿霉素作用后,Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组细胞存活率明显降低(P<0.01),阿霉素浓度为1.0mg·L^(-1)时,2组细胞存活率分别为(48.15±6.28)%和(41.73±6.17)%,对阿霉素的敏感性明显增强。结论:Hiwi基因在MCF-7/ADM细胞中具有高效的靶向沉默,Hiwi基因沉默后的MCF-7/ADM细胞对阿霉素恢复敏感性。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 Hiwi基因 靶向沉默 MCF-7/ADM细胞 敏感性

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增龄性肌肉减少症小鼠肌肉组织抗氧化能力的特点 被引量：2

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作者 郭丹 温旭 +7 位作者 吴丹妮 王秦玉 刘珊珊 季铎淳 王力可 王丹 董营 于春艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1209-1215,共7页

目的:基于核因子E2相关因子2 (Nrf2)依赖的抗氧化途径探讨增龄后肌肉组织抗氧化应激特点,阐明活性氧(ROS)生成和抗氧化间的动态平衡在增龄性肌肉减少症(肌少症)中的作用。方法:24只C57BL/6J (C57)雄性小鼠随机分为3月龄组(3 M组)、12月... 目的:基于核因子E2相关因子2 (Nrf2)依赖的抗氧化途径探讨增龄后肌肉组织抗氧化应激特点,阐明活性氧(ROS)生成和抗氧化间的动态平衡在增龄性肌肉减少症(肌少症)中的作用。方法:24只C57BL/6J (C57)雄性小鼠随机分为3月龄组(3 M组)、12月龄组(12 M组)和22月龄组(22 M组),取小鼠比目鱼肌组织,计算骨骼肌质量指数(SMI),HE染色观察各组小鼠肌肉组织病理形态表现,2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测各组小鼠肌肉组织中ROS水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠肌肉组织中过氧化物酶体增殖子活化受体γ共激活因子1α (PGC-1α)、Nrf2和抗氧化应激基因mRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠肌肉组织中Nrf2蛋白表达水平。结果:与3 M组比较,12 M组小鼠比目鱼肌肌纤维横截面积增大,部分肌纤维细胞核数量增多,部分肌纤维可见变性改变,SMI值降低,但差异均无统计学意义(P>0.05),肌肉组织中ROS水平升高(P<0.05),Nrf2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),PGC-1α mRNA表达水平明显升高(P<0.01),Nqol、Cat、Gclc、Sod1和Sod2 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),Nrf2蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与12 M组比较,22 M组小鼠比目鱼肌白色肌纤维增多,形态不规则,肌纤维细胞核数量增多并出现核内移现象,肌细胞间隙增大,细胞数量减少,SMI值降低,但差异无统计学意义(P>0.05),肌肉组织中ROS水平明显升高(P<0.01),Nrf2 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),Nqol、Cat、Sod1和Sod2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),而Gclc mRNA表达水平降低(P<0.05),Nrf2蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:增龄性小鼠比目鱼肌表现为肌少症表型,以氧化代谢为主的比目鱼肌具有一定的抗氧化应激能力,与Nrf2依赖的抗氧化途径增强有密切关联。 展开更多

关键词 肌肉减少症 骨骼肌 核因子E2相关因子 线粒体稳态

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卡氏棘阿米巴肌动蛋白1的免疫学特性和细胞黏附功能 被引量：1

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作者 李晶 杨舒越 +3 位作者 赵佳欣 孔繁利 郭思瑶 冯宪敏 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期308-314,共7页

目的:探讨卡氏棘阿米巴(Ac)肌动蛋白1 (Actin 1)(Ac-Actin 1)的免疫学特性,初步阐明Ac-Actin 1介导Ac虫体黏附宿主细胞并参与Ac虫体入侵的作用。方法:以Ac滋养体cDNA为模板,构建原核表达载体pET 22b (+)-Ac-Actin 1,转化大肠埃希菌感受... 目的:探讨卡氏棘阿米巴(Ac)肌动蛋白1 (Actin 1)(Ac-Actin 1)的免疫学特性,初步阐明Ac-Actin 1介导Ac虫体黏附宿主细胞并参与Ac虫体入侵的作用。方法:以Ac滋养体cDNA为模板,构建原核表达载体pET 22b (+)-Ac-Actin 1,转化大肠埃希菌感受态细胞BL21 (DE3);1 mmol·L^(-1)异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)体外诱导表达重组Ac-Actin 1蛋白(rAc-Actin 1),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对rAc-Actin 1进行可溶性分析,通过亲和层析方法纯化带有His标签的rAc-Actin 1。3只新西兰白兔随机分为对照组(1只)和实验组(2只);实验组兔以rAc-Actin 1为免疫原皮下注射400μg,对照组兔注入等量生理盐水,制备抗rAc-Actin 1多克隆兔血清;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组兔抗rAc-Actin 1多克隆抗体效价并测定IgG亚型,Western blotting法检测抗rAc-Actin 1多克隆兔血清与rAc-Actin 1的免疫反应性,间接免疫荧光实验(IFA)检测Ac-Actin 1在Ac滋养体中的定位。以正常滋养体为对照,抗rAc-Actin 1多克隆兔血清阻断Ac滋养体后与Vero细胞共孵育,显微镜观察Ac-Actin 1对Vero细胞的黏附作用。结果:SDSPAGE和BCA蛋白浓度检测,获得高浓度rAc-Actin 1 (1.7 g·L^(-1))蛋白。ELISA法检测,制备的兔抗rAc-Actin1特异性多克隆抗体效价为1∶6 400, IgG1和IgG2a浓度分别为116.76 g·L^(-1)和1 136.15 mg·L^(-1)。Western blotting法检测,兔抗rAc-Actin 1多克隆抗体可与rAc-Actin 1发生特异性结合,具有良好的免疫反应性。IFA检测,rAc-Actin 1主要定位于Ac滋养体的细胞膜上。显微镜观察,与对照组比较,随着抗体与虫体孵育时间的延长,实验组Ac滋养体对Vero细胞的黏附率明显降低(P<0.01),抗rAc-Actin 1特异性多克隆抗体可有效阻断Ac滋养体与Vero细胞的黏附。结论:rAc-Actin 1具有良好的免疫原性和免疫反应性,参与Ac虫体与宿主细胞的黏附作用。 展开更多

关键词 卡氏棘阿米巴 滋养体 细胞黏附 免疫原性 免疫反应性

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