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新质生产力视域下临床免疫学检验技术课程“课题化”实验教学改革与实践
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作者 杨巍 王刚 +3 位作者 艾金霞 王雪松 王淼 孙丽媛 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期1228-1231,共4页
新质生产力视域下,培养掌握现代技术、具备专业知识的创新型人才是高校教育教学改革的新方向、新机遇。本文介绍了在临床免疫学检验技术课程中实施“课题化”实验教学的实践过程,初步探索了培养医学检验技术专业新质人才的可能途径。
关键词 新质生产力 临床免疫学检验技术“ 课题化”实验教学 新质人才
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非手术子宫注射法建立大鼠盆腔炎模型的研究
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作者 杨美艳 颜峰 +3 位作者 王雪楠 胡凯歆 高鸿霞 潘晓燕 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第1期13-29,共17页
目的非手术法建立高效、稳定的大鼠盆腔炎模型,并评估验证其在药效试验中的应用。方法雌性SD大鼠随机分为对照组、苯酚7 d模型组、苯酚10 d模型组、苯酚造模治疗组、低浓度菌液模型组、高浓度菌液模型组和菌液造模治疗组。模型组和治疗... 目的非手术法建立高效、稳定的大鼠盆腔炎模型,并评估验证其在药效试验中的应用。方法雌性SD大鼠随机分为对照组、苯酚7 d模型组、苯酚10 d模型组、苯酚造模治疗组、低浓度菌液模型组、高浓度菌液模型组和菌液造模治疗组。模型组和治疗组SD大鼠以非手术法子宫腔注射25%苯酚凝胶、2×10^(7)个或2×10^(8)个大肠埃希菌和金黄色葡萄链球菌的混合菌,以构建盆腔炎模型。治疗组大鼠灌胃中成药金刚藤胶囊,对照组大鼠在相同时间给予等体积的溶剂溶液。观察大鼠的健康状况、体重变化和子宫外观;计算子宫系数;苏木素-伊红(HE)染色检测子宫和输卵管的病理变化、子宫内膜厚度和腺体数量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平;免疫荧光染色检测巨噬细胞标志物CD68蛋白表达;Western blot检测大鼠子宫中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达。结果模型组大鼠的死亡率只有5%;与对照组相比,造模后大鼠体重下降、子宫系数增加、子宫和输卵管出现不同程度的病理变化、内膜变薄、腺体数量减少、血清IL-1β、IL-6、TNF-α的水平和子宫组织中巨噬细胞的数量显著增加、Toll样受体4/核因子-κB(Toll-like receptor 4/nuclear factor kappa-B,TLR4/NF-κB)信号通路被激活;苯酚7 d模型和低浓度菌液模型被判定为轻度盆腔炎模型,苯酚10 d模型和高浓度菌液模型被判定为重度盆腔炎模型;中成药金刚藤胶囊治疗后,子宫和输卵管的病理症状明显缓解,符合临床盆腔炎的药效评估。结论通过非手术法利用苯酚和混合菌液建立的大鼠盆腔炎模型可以更好地模拟临床由于不同原因导致的不同程度病理状态的盆腔炎,适用于药物药效作用评价和盆腔炎病理机制的阐明。 展开更多
关键词 非手术法 盆腔炎 动物模型 子宫病理
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多重耐药铜绿假单胞菌群体感应相关基因表达及其对生物膜形成和耐药性的影响
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作者 刘岩 潘蓓珍 +4 位作者 杨继飞 张先宇 丁文博 宋伶俐 赵云冬 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期921-928,共8页
目的:探讨临床多重耐药铜绿假单胞菌群体感应相关基因表达对生物膜形成和耐药性的影响,阐明耐药性增加的机制。方法:收集77株铜绿假单胞菌,根据其耐药性将菌株分为多重耐药组和敏感组,微孔板法构建生物膜筛选最佳形成条件,采用光学显微... 目的:探讨临床多重耐药铜绿假单胞菌群体感应相关基因表达对生物膜形成和耐药性的影响,阐明耐药性增加的机制。方法:收集77株铜绿假单胞菌,根据其耐药性将菌株分为多重耐药组和敏感组,微孔板法构建生物膜筛选最佳形成条件,采用光学显微镜观察2组铜绿假单胞菌生物膜形成情况,结晶紫染色半定量法检测2组铜绿假单胞菌生物膜形成能力,微量肉汤稀释法检测2组铜绿假单胞菌对群体感应抑制剂呋喃酮(C-30)的最低抑菌浓度(MIC)值,试剂盒法提取2组铜绿假单胞菌的RNA,改良TRIzol法提取2组铜绿假单胞菌中多重耐药组浮游态和生物膜态RNA,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组以及加入C-30抑制剂前后铜绿假单胞菌中lasR/I、RhlR/I和PqsR/A mRNA表达水平。结果:77株铜绿假单胞菌标本中有56株多重耐药株(多重耐药组),21株全敏感株(敏感组)。构建生物膜最佳条件,当铜绿假单胞菌浓度为1.5×10^(8)CFU·mL^(-1)、培养时间为48 h时生物膜形成量最多;77株铜绿假单胞菌标本的生物膜阳性率为91%,其中生物膜强阳性、中等阳性、弱阳性和阴性分别占16%、34%、41%及9%,多重耐药株的生物膜阳性率为96%,且多重耐药组的生物膜形成能力高于敏感组(P<0.05)。当群体感应抑制剂C-30的浓度为8 mg·L^(-1)时,可抑制多数铜绿假单胞菌生物膜的形成,且浓度越高,抑制作用越明显;浮游态RNA和生物膜态RNA的吸光度(A)值在1.8~2.0。RT-qPCR法,与浮游态比较,生物膜态的铜绿假单胞菌重群体感应相关基因lasR/I、RhlR/I和PqsR/A mRNA表达水平升高(P<0.01);与未加抑制剂组比较,加入抑制剂组铜绿假单胞菌中生物膜态的群体感应相关基因lasR/I、RhlR/I和PqsR/A mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论:多重耐药铜绿假单胞菌的群体感应相关基因高表达会促进生物膜的形成,从而导致耐药性增加。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 生物膜 群体感应系统 实时荧光定量PCR 耐药性
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人参属药用植物化感物质种类及其作用机制研究进展 被引量:1
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作者 周亭亭 战宇 +3 位作者 李琼 王恩鹏 黄鑫 陈长宝 《特产研究》 2025年第1期184-188,195,共6页
人参属药用植物在栽培过程中存在连作障碍现象,而化感自毒作用是造成其连作障碍的关键因素之一。目前,化感物质种类的筛选和化感作用机理是植物生理生态研究的重点方向。本文通过搜索Web of Science数据库、提炼LetPub智库资源整理了人... 人参属药用植物在栽培过程中存在连作障碍现象,而化感自毒作用是造成其连作障碍的关键因素之一。目前,化感物质种类的筛选和化感作用机理是植物生理生态研究的重点方向。本文通过搜索Web of Science数据库、提炼LetPub智库资源整理了人参属药用植物化感作用的文献,梳理和总结了化感物质种类及化感作用机制。人参属化感物质主要为酚酸类和皂苷类,剖析其作用机制主要是通过影响植物生长发育、影响细胞膜结构、功能及基因表达等方面,本研究提出在深入探究化感作用机制的同时,应关注人参植物与其他植物种间化感物质互惠作用,基于此互惠作用的人参栽培模式的优化,以及如何利用人参化感物质抑制病虫草害等未来发展方向。 展开更多
关键词 人参属药用植物 化感物质 化感作用 机制研究
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钙敏感受体在心肌损伤中介导的信号通路研究进展
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作者 沈明妹 吕俞娇 +4 位作者 张尚博 周鑫辰 董姝含 张卓 刘永超 《中国全科医学》 北大核心 2025年第18期2301-2306,共6页
钙敏感受体(CaSR)是一种G蛋白偶联受体,可以诱导高度扩散的信使以激活各种细胞反应。最近研究认为CaSR介导内质网、线粒体、细胞核之间的信号通信,且此过程与心肌损伤相关。心肌细胞为永久细胞,不可再生。因此,本文将重点介绍CaSR在心... 钙敏感受体(CaSR)是一种G蛋白偶联受体,可以诱导高度扩散的信使以激活各种细胞反应。最近研究认为CaSR介导内质网、线粒体、细胞核之间的信号通信,且此过程与心肌损伤相关。心肌细胞为永久细胞,不可再生。因此,本文将重点介绍CaSR在心肌损伤中的相关调控机制,梳理其介导的复杂细胞内信号转导网络,为寻找心肌损伤治疗新靶点提供思路。 展开更多
关键词 心肌损伤 心肌肥大 心肌纤维化 钙敏感受体
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灵芝多糖对心肌保护作用机制的研究进展
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作者 张尚博 刘永超 +1 位作者 齐鸿伟 孔繁利 《天然产物研究与开发》 北大核心 2025年第9期1775-1783,共9页
心肌损伤是心血管疾病最严重的病理后果也是其高死亡率的重要原因。造成心肌损伤的原因有多种,如缺血再灌注损伤、毒物和药物、炎症作用及各种代谢性疾病。灵芝(Ganoderma lucidum)是我国历史悠久的中味药材,可益气血、安心神、健脾胃... 心肌损伤是心血管疾病最严重的病理后果也是其高死亡率的重要原因。造成心肌损伤的原因有多种,如缺血再灌注损伤、毒物和药物、炎症作用及各种代谢性疾病。灵芝(Ganoderma lucidum)是我国历史悠久的中味药材,可益气血、安心神、健脾胃。存在于灵芝细胞壁中的灵芝多糖(G. lucidum polysaccharides,GLPs)是其最有效的成分之一,尽管近些年GLPs对心肌保护作用的相关研究越来越多,但综合性的相关探讨却缺乏梳理。该文章介绍了GLPs可缓解缺血再灌注损伤、降血糖、清除体内自由基、降血脂、改善抗癌药物及脓毒血症对心肌的损害等功效,梳理了近年来多篇相关性研究,为临床心肌损伤患者的预防和治疗及后续研究提供参考。 展开更多
关键词 灵芝多糖 心肌损伤 作用机制 氧化应激
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双重核酸纸条快速检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因
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作者 刘岩 杨建宇 +6 位作者 周钰娇 丁文博 张先宇 高林然 潘蓓珍 杨继飞 赵云冬 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第2期387-394,共8页
目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA,以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因,分别用6-FAM标记prfA... 目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA,以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因,分别用6-FAM标记prfA上游引物5'端,Biotin标记prfA下游引物5'端,Digoxin标记hly上游引物5'端和Biotin标记hly下游引物5'端,建立单核细胞增生李斯特菌的毒素基因检测方法,通过克隆转化、测序分析,克隆阳性对照品,研发试剂盒并对试剂盒特异性、灵敏度、复现性及稳定性进行评价,并通过样品检测对试剂盒进行验证。结果水煮法提取的单核细胞增生李斯特菌浓度为148.81±0.97ng/μL,A_(260)/A_(280)在1.8~2.0范围内;PCR产物经克隆转化、测序对比,与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%;特异性检测,仅单核细胞增生李斯特菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、蜡样芽胞杆菌无交叉反应;灵敏度检测,最低检测限为10^(-2)ng/μL,比琼脂糖凝胶电泳高10倍;复现性检测,不同实验室不同人员分别对核酸试纸条进行验证,结果一致;稳定性检测,在第6、9、12月对核酸试纸条进行验证,稳定性较好。样品检测结果显示,本试剂盒可准确快速的检出样品中单核细胞增生李斯特菌。结论本剂盒可同时检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因,具有特异性强、灵敏度高、复现性好、稳定性好等优点,对保障食品安全具有现实意义。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 prfA hly 双重核酸试纸条
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基于AS1411核酸适配体和金纳米颗粒组装新型生物传感器及其在超灵敏检测肿瘤细胞中的应用
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作者 王艳艳 杨柳 +7 位作者 韩浩健 徐永权 邢文竹 许萌 陈恋菊 文庆莲 赵云冬 郝峰 《分析科学学报》 北大核心 2025年第1期21-27,共7页
AS1411核酸适配体可与表达在肿瘤细胞上的核蛋白结合,将其与纳米材料偶联建立一种传感平台,用于肿瘤细胞的超灵敏检测。以金纳米颗粒(AuNPs)为中心,通过金-硫醇键将聚乙二醇(PEG)衍生物与AuNPs链接。在反应体系中加入巯基聚乙二醇马来... AS1411核酸适配体可与表达在肿瘤细胞上的核蛋白结合,将其与纳米材料偶联建立一种传感平台,用于肿瘤细胞的超灵敏检测。以金纳米颗粒(AuNPs)为中心,通过金-硫醇键将聚乙二醇(PEG)衍生物与AuNPs链接。在反应体系中加入巯基聚乙二醇马来酰亚胺(SH-PEG-MAL)偶联剂,生成AuNPs-SH-PEG-MAL。进一步,将带有5-羧基荧光素(5-FAM)的AS1411核酸适配体与AS1411互补DNA单链结合,形成传感探针,最终构建了一个“开关式”的特异性检测传感器。所制备的传感器在10~300个细胞/mL范围内,荧光强度与人宫颈癌Hela细胞和人乳腺癌MCF-7细胞浓度呈良好线性关系。Hela细胞的线性相关系数为R^(2)=0.991、检出限5个细胞/mL;MCF-7细胞的线性相关系数为R^(2)=0.983,检出限为7个细胞/mL。本研究建立的传感器具有重复性好、稳定性强等优点,实现了“超灵敏”检测肿瘤细胞的目的,有望为临床肿瘤患者早期诊断提供新的思路和技术手段。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 AS1411 核酸适配体 金纳米颗粒 传感器
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蜡样芽孢杆菌cytK和nhe毒素基因双重核酸试纸条快速检测方法的建立及其评价
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作者 杨继飞 潘蓓珍 +6 位作者 刘岩 周钰娇 杨建宇 张先宇 丁文博 李昊宇 孙丽媛 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期516-525,共10页
目的:采用聚合酶链式反应(PCR)和胶体金技术建立1种蜡样芽孢杆菌cytK和nhe2种毒素基因双重核酸试纸条快速检测方法,并对其特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行评价。方法:采用煮沸法提取蜡样芽孢杆菌DNA,以蜡样芽孢杆菌细胞毒素cytK和... 目的:采用聚合酶链式反应(PCR)和胶体金技术建立1种蜡样芽孢杆菌cytK和nhe2种毒素基因双重核酸试纸条快速检测方法,并对其特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行评价。方法:采用煮沸法提取蜡样芽孢杆菌DNA,以蜡样芽孢杆菌细胞毒素cytK和非溶血性肠毒素nhe为靶基因设计特异性引物,通过克隆转化鉴定PCR产物,确定胶体金标记链霉亲和素、质量控制线(C线)、cytK检测线(T_(1))和nhe检测线(T_(2))最佳标记量,组装核酸试纸条并对其特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行评价。结果:蜡样芽孢杆菌DNA浓度为248 mg·L^(-1),纯度为1.8~2.0;经克隆转化和测序比对,PCR产物与GenBank数据库中已登记的蜡样芽孢杆菌cytK和nhe相似性均为100%。在pH为7.0的条件下,每200μL胶体金溶液中链霉亲和素最佳标记量为6.0μL;质量控制线(C线)最佳标记量为2.00 g·L^(-1),cytK基因检测线(T1)最佳标记量为0.550 g·L^(-1),nhe基因检测线(T_(2))最佳标记量为0.2 g·L^(-1)。特异性检测,仅蜡样芽孢杆菌组显示阳性结果,试纸条与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌无交叉反应,与电泳结果一致;灵敏度检测,当双重核酸试纸条中蜡样芽孢杆菌DNA浓度降至10^(-2)mg·L^(-1)时,可观察到C线、T1线和T_(2)线3个条带,检测限为琼脂糖凝胶电泳(10^(-1)mg·L^(-1))的1/10;重复性检测,由不同实验室不同人员对试纸条进行验证,结果一致;稳定性检测,在第6、9和12个月进行试纸条稳定性验证,稳定性良好。结论:本研究建立的双重核酸试纸条法可以同时检测蜡样芽孢杆菌cytK和nhe毒素基因,灵敏度高,特异性强,可实现快速可视化检测。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 cytK NHE 双重核酸试纸条
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基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价 被引量:5
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作者 姜菲菲 李昊宇 +5 位作者 贾慧建 王丹 赵潇颖 王岳峰 周童 孙丽媛 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1223-1228,共6页
目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设... 目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。结果:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^(-1),纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^(-1)mg·L^(-1);稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。结论:建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。 展开更多
关键词 蜡样芽胞杆菌 毒素基因 多重聚合酶链式反应 灵敏度 煮沸法
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临床免疫学检验技术课堂教学与课程思政相结合的教学展示——以胶体金免疫层析技术为例 被引量:3
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作者 杨巍 艾金霞 +3 位作者 王雪松 王刚 王淼 孙丽媛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1211-1213,共3页
本文以“胶体金免疫层析技术”的课堂教学为例,介绍了在新型冠状病毒感染疫情防控背景下,教师如何把专业知识与课程思政有效融合,在完成教学目标的同时,实现对学生的思想道德素质的提升,落实立德树人综合教育理念的探索和实践。
关键词 临床免疫学检验技术 课程思政 胶体金免疫层析技术
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北五味子在胸主动脉瘤发生发展中作用机制的网络药理学和分子对接技术分析 被引量:2
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作者 李妍 侯月 +4 位作者 牟星蔚 刘冰清 万红 刘畅 夏薇 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期414-425,共12页
目的:探讨北五味子(SCF)在胸主动脉瘤(TAA)发生发展过程中的作用,并阐明其可能的机制。方法:整合中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Uniprot、Swiss TargetPrediction、CTD、GeneCards、OpenTargets和OMIM多个数据库获取SCF作用于... 目的:探讨北五味子(SCF)在胸主动脉瘤(TAA)发生发展过程中的作用,并阐明其可能的机制。方法:整合中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Uniprot、Swiss TargetPrediction、CTD、GeneCards、OpenTargets和OMIM多个数据库获取SCF作用于TAA的潜在靶点;利用String数据库和Cytoscape软件构建靶点蛋白-蛋白互作(PPI)网络,并进行拓扑网络分析得到SCF作用于TAA的核心靶点;借助Omicshare在线分析平台对潜在作用靶点进行潜在靶点的基因本体(GO)和京都基因组与基因百科全书(KEGG)富集分析;通过GEO数据库提取SCF有效成分—五味子酯乙(SchB)刺激大鼠主动脉平滑肌细胞基因表达谱,验证核心靶点表达水平;应用Autodock软件将核心靶点进行分子对接验证。结果:获得SCF影响TAA的潜在靶点46个,GO富集分析主要涉及细胞增殖、催化活性和蛋白质代谢等生物学过程,KEGG富集分析主要涉及血管内皮生长因子(VEGF)、受体酪氨酸蛋白激酶(ErbB)和缺氧诱导因子1(HIF-1)3条信号通路,拓扑网络分析得到信号转导与转录激活因子3(STAT3)和基质金属蛋白酶9(MMP9)等10个核心靶点。基因表达谱分析,与转化生长因子β1(TGF-β1)组比较,SchB-TGF-β1组核心靶基因STAT3和MMP9表达水平明显下调(P<0.05)。结论:SCF的主要活性成分SchB等可能通过靶向STAT3等信号通路,抑制血管平滑肌中MMP9表达水平,进而减轻主动脉中细胞外基质降解,发挥抑制TAA发生发展的作用。 展开更多
关键词 网络药理学 北五味子 胸主动脉瘤 分子对接
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基于锦灯笼对白血病作用机制的网络药理学和分子对接技术的生物信息学分析 被引量:1
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作者 汪洺卉 刘墨祎 +6 位作者 王鹤霖 李迎 汪香君 惠赫童 范馨元 王添琦 刘丽梅 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期74-83,共10页
目的:基于网络药理学探讨锦灯笼(PCF)在白血病发生发展过程的作用,阐明其生物活性成分主要作用靶点和信号通路相关机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库以“锦灯笼”为关键词检索其生物活性成分及对应的潜在靶点... 目的:基于网络药理学探讨锦灯笼(PCF)在白血病发生发展过程的作用,阐明其生物活性成分主要作用靶点和信号通路相关机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库以“锦灯笼”为关键词检索其生物活性成分及对应的潜在靶点,并采用蛋白质数据库(PDB)和小分子药物靶点预测在线平台(Swiss Target Prediction)网站对其潜在靶点进行评估预测。采用GeneCards、OMIM和DrugBank数据库以“Leukemia”为关键词对相关靶点进行检索。利用Draw Veen Diagram在线软件将PCF生物活性成分靶点与白血病靶点交集,得到的交集靶点即为PCF作用于白血病的靶点;利用基因/蛋白相互作用检索搜查工具(STRING)数据库获取交集靶点蛋白的蛋白-蛋白互作(PPI)网络信息并进行可视化处理;采用注释可视化和集成发现数据库(DAVID)对交集基因进行基因本体(GO)生物功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,并利用Cytoscape 3.7.2软件对PPI网络进行拓扑分析筛选核心靶点和核心活性成分,采用AutoDock和PyMol软件进行分子对接验证。结果:对TCMSP数据库检索结果进行筛选后得到6个PCF活性成分,收集PCF与白血病的共同靶点29个。GO富集分析主要涉及造血或淋巴器官的发育、蛋白代谢调控和细胞凋亡等生物进程;KEGG信号通路富集分析主要包括癌症通路、肿瘤坏死因子(TNF)和T细胞受体(TCR)等信号通路。拓扑网络分析得到蛋白激酶B1(AKT1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)等10个核心靶点,结合KEGG信号通路筛选出核心活性成分谷甾醇和禾本甾醇。分子对接,PCF活性成分谷甾醇与原癌基因JUN及禾本甾醇与AKT1和Caspase-3对接能均<-6.0 kcal·mol-1,表明对接较好。结论:PCF的主要活性成分谷甾醇和禾本甾醇可能通过调控JUN、AKT1和Caspase-3等基因参与癌症通路和TCR等信号通路,进而影响白血病的发生发展。 展开更多
关键词 网络药理学 分子对接技术 锦灯笼 白血病
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改良SELEX技术筛选福氏志贺菌2a特异性适配体
14
作者 王国臻 王玉格 +3 位作者 兰春阳 李翔 李明成 付桂莲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1226-1230,共5页
目的:构建与福氏志贺菌2a高亲和性、特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库。方法:体外合成76 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNA),运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria SELEX),福氏志贺菌2a作为靶标与文库ssDN... 目的:构建与福氏志贺菌2a高亲和性、特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库。方法:体外合成76 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNA),运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria SELEX),福氏志贺菌2a作为靶标与文库ssDNA反应;通过优化PCR反应,将Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化技术用于次轮反应文库的制备,荧光分光光度计跟踪筛选过程,流式细胞仪克隆测序特异性单链核酸适配体,生物信息学技术分析其一、二级结构。结果:经过PCR技术10轮正向筛选和6轮消减菌筛选,通过Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化,ssDNA平均回收率高达72.33%。依据一级结构的同源序列建立了36个寡核苷酸探针组群。流式细胞仪分析获得1条与福氏志贺菌2a特异性结合的适配体(命名ZH-21)。结论:基于全菌消减SELEX技术,结合Lambda酶外切及凝胶层析纯化技术,建立一种快速、稳定、高效、特异性高和成本低的筛选福氏志贺菌2a特异性单链核酸适配体的方法。 展开更多
关键词 全菌消减SELEX技术 福氏志贺菌2a 凝胶层析纯化技术 适配体
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冬凌草甲素介导Sirt1信号轴抑制溃疡性结肠炎的机制研究
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作者 王茂楠 徐博 +2 位作者 李林玥 李姝蓉 李明成 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1461-1466,共6页
目的:利用葡聚糖硫酸钠盐(DSS)构建小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型,探讨冬凌草甲素(Ori)通过介导Sirt1信号通路缓解UC的作用及分子机制,寻找治疗UC的新药。方法:60只BALB/c小鼠随机分为正常组(NC)、模型组(DSS)、DSS+美沙拉嗪缓释颗粒组(AC)... 目的:利用葡聚糖硫酸钠盐(DSS)构建小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型,探讨冬凌草甲素(Ori)通过介导Sirt1信号通路缓解UC的作用及分子机制,寻找治疗UC的新药。方法:60只BALB/c小鼠随机分为正常组(NC)、模型组(DSS)、DSS+美沙拉嗪缓释颗粒组(AC)、DSS+低剂量Ori组(Ori-L)、DSS+中剂量Ori组(Ori-M)和DSS+高剂量Ori组(Ori-H),每组10只。除NC组外,其余各组小鼠自由饮用3%DSS水溶液7 d,造模成功后,Ori-L组、Ori-M组和Ori-H组分别灌胃50、100、150 mg/kg Ori混悬液,NC组及DSS组自由饮用蒸馏水,AC组灌胃美沙拉嗪缓释颗粒100 mg/kg,连续治疗10 d。记录小鼠体质量变化并进行疾病活动指数(DAI)评分;治疗结束后,ELISA检测血清IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;摘取完整结肠组织,测量长度,进行HE染色,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组结肠组织Sirt1、NF-κB和p53表达。结果:造模成功后,与NC组相比,其余5组小鼠出现体质量下降、DAI评分升高以及结肠长度缩短现象,Sirt1表达受到明显抑制,NF-κB和p53表达显著升高,且伴有明显炎症病理学特征。相较于DSS组,Ori-L、Ori-M和Ori-H以及AC组小鼠实验期间体质量减轻幅度较小,DAI评分显示其疾病活动较低,且结肠长度缩短程度相对较小,Sirt1表达受抑制程度较低,NF-κB和p53表达上升幅度相对较小,AC组结果证明Ori对UC有治疗效果。结论:Ori能改善小鼠UC,其作用可能与调控Sirt1信号有关。 展开更多
关键词 冬凌草甲素 溃疡性结肠炎 Sirt1信号通路 炎症因子
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VEGF对小鼠卵巢类固醇合成相关基因表达的影响及其机制 被引量:1
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作者 张智慧 高鸿霞 +3 位作者 王国庆 侯巍 邹畅 芦小单 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期679-685,共7页
目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对小鼠卵巢类固醇合成相关基因表达的影响及其机制。方法利用四环素可逆调节VEGF表达的转基因小鼠模型,采用聚合酶链反应(PCR)法鉴定小鼠基因型,通过喂食强力霉素将20只小鼠分为VEGF表达正常组(Dox+)与V... 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对小鼠卵巢类固醇合成相关基因表达的影响及其机制。方法利用四环素可逆调节VEGF表达的转基因小鼠模型,采用聚合酶链反应(PCR)法鉴定小鼠基因型,通过喂食强力霉素将20只小鼠分为VEGF表达正常组(Dox+)与VEGF表达抑制组(Dox-)(n=10)。采用Western blotting检测卵巢组织中VEGF蛋白的表达情况;荧光定量PCR检测VEGF、VEGF受体2(KDR)及已知在卵泡发育中发挥作用的基因卵泡刺激素(FSH)、抑制素B(INHBB)mRNA的表达情况。HE染色观察卵巢组织的变化。取小鼠卵巢组织提取总RNA进行转录组测序,并通过FPKM、log2FC值分析相关差异基因。结果与Dox+组比较,Dox-组VEGF mRNA和蛋白水平明显降低,KDR mRNA水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与Dox+组比较,Dox-组卵泡发育障碍,并出现闭锁卵泡。根据测序结果分析筛选出两组小鼠的卵泡发育相关基因、类固醇合成相关基因具有明显差异(P<0.05);富集分析发现小鼠卵巢中VEGF主要参与调控卵巢类固醇生成等通路。荧光定量PCR结果显示,与Dox+组相比,Dox-组小鼠卵巢组织中卵泡发育相关基因(INHBB、FSHR)明显上调(P<0.05),类固醇合成的关键基因(StAR、CYP11A1、3β-HSD)明显下调(P<0.05),定量结果与测序结果基本一致。结论VEGF抑制可使小鼠卵泡发育障碍,其可能的机制是通过下调卵巢类固醇合成相关基因FSH、INHBB的表达从而阻碍胆固醇代谢来实现的。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 卵泡发育 性类固醇激素 转录组测序
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灵芝活性成分抗肿瘤机制研究进展 被引量:6
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作者 吕俞娇 周姝婷 +2 位作者 王丽娜 沈明妹 刘永超 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期947-954,共8页
恶性肿瘤是我国慢性病死亡的主要原因之一,其发病率和死亡率呈现逐年增加趋势。恶性肿瘤的晚期非手术治疗是改善患者预后,提高其生存质量的重要手段。传统中药灵芝具有抗肿瘤作用,在多种恶性肿瘤治疗中发挥作用。本文就近五年来国内外... 恶性肿瘤是我国慢性病死亡的主要原因之一,其发病率和死亡率呈现逐年增加趋势。恶性肿瘤的晚期非手术治疗是改善患者预后,提高其生存质量的重要手段。传统中药灵芝具有抗肿瘤作用,在多种恶性肿瘤治疗中发挥作用。本文就近五年来国内外应用灵芝活性成分针对肿瘤的作用研究进行系统综述,探讨灵芝活性成分抗肿瘤的作用机制,为灵芝活性成分应用于临床奠定理论基础。 展开更多
关键词 灵芝 灵芝多糖 灵芝三萜 灵芝酸 抗肿瘤
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有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立 被引量:5
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作者 李洋洋 崔琳 +2 位作者 张宇彤 郑佳慧 艾金霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期428-434,共7页
目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记;优化试... 目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记;优化试纸条工作参数,并进行性能测试。结果抗血清效价在1∶32~1∶64之间,蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量(M r)25000和55000处出现目的条带,纯度较好;试纸条反应时间在5~10 min,样本检测限为200 ng/mL,特异性及准确性良好,试纸条有效期为6个月。结论建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法,适合大量样本的现场初筛。 展开更多
关键词 乙酰胆碱酯酶 多克隆抗体 有机磷农药 胶体金试纸条 免疫层析法
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多菌灵人工抗原的合成及其鼠源性多克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 张宇彤 李洋洋 +1 位作者 郑佳慧 艾金霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期163-167,共5页
目的合成多菌灵人工抗原,制备多菌灵多克隆抗体并鉴定其特性。方法利用混合酸酐法引入羧基制备多菌灵半抗原。将小分子半抗原与大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成多菌灵人工抗原和包被抗原,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SD... 目的合成多菌灵人工抗原,制备多菌灵多克隆抗体并鉴定其特性。方法利用混合酸酐法引入羧基制备多菌灵半抗原。将小分子半抗原与大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成多菌灵人工抗原和包被抗原,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行鉴定。用制备的人工抗原免疫小鼠获得抗多菌灵多克隆抗体,利用间接ELISA对抗体效价以及特异性进行测定。结果成功制备多菌灵人工抗原。免疫小鼠后获得的抗体效价可达1:12800。抗体对多菌灵的半数抑制剂量(IC_(50))为0.107μg/mL,且与苯菌灵、噻菌灵的交叉反应率均<1%。结论成功获得高敏感性、高特异性的多克隆抗体,为多菌灵残留快速检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 多菌灵 人工抗原 多克隆抗体
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Anoctamin家族中钙激活氯离子通道调节剂筛选及应用研究进展 被引量:1
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作者 吴明达 洪啟元 +6 位作者 兰月娇 姚岚 习诗婷 刘雪莹 高俊涛 郑锴 郝峰 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期445-454,共10页
钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊... 钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊性纤维化、高血压、腹泻和哮喘等疾病具有潜在治疗作用。自2008年Ano1首次被发现后,先后出现了多种CaCC特异性调节剂的筛选方法,主要包括基于荧光蛋白的高通量初级筛选、电生理膜片钳技术和虚拟筛选,进而发现了多种药理学作用不同的小分子调节剂。本文综述了目前较为主流的筛选方法的原理和优缺点,并对迄今发现的Ano1特异性调节剂的化学结构和潜在的应用进展进行综述。 展开更多
关键词 钙激活氯离子通道 Anoctamin Ano1 Ano2 高通量筛选 特异性调节剂
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