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实时荧光PCR法检测食品中亚利桑那沙门氏菌 被引量:13
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作者 王青龙 蔡雪凤 +6 位作者 周艳霞 曹悦 张跃川 朱晓龙 巩有博 耿健强 何湘漪 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第6期179-182,共4页
沙门氏菌(Salmonella)是食品检测过程中最常见的致病菌之一,亚利桑那沙门氏菌(Salmonella arizonae)又是沙门氏菌中比较难鉴定的亚种。该实验通过实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法快速准确的检测亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌。根据Ge... 沙门氏菌(Salmonella)是食品检测过程中最常见的致病菌之一,亚利桑那沙门氏菌(Salmonella arizonae)又是沙门氏菌中比较难鉴定的亚种。该实验通过实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法快速准确的检测亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌。根据GenBank公布的亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌gud D基因序列,分别设计引物和Taqman探针。使用10株不同血清型的沙门氏菌标准菌株、88株沙门氏菌分离株和29株食品中常见食源性致病菌进行实时荧光PCR特异性实验。结果显示,该实验所设计的引物探针特异性非常好。实时荧光PCR灵敏性试验结果表明,检测灵敏度可达到1~10 CFU/m L的添加浓度。经模拟污染样品验证,所建立的实时荧光PCR方法与传统方法的检测结果相一致,具有检测周期短、操作简便的优势。 展开更多
关键词 沙门氏菌 亚利桑那沙门氏菌 实时荧光PCR
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特殊医学用途婴儿配方食品中牛磺酸含量的测定 被引量:2
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作者 姚程晨 杨丽梅 林立 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2022年第12期44-48,共5页
建立特殊医学用途婴儿配方食品中牛磺酸的检测方法。无乳糖配方、乳蛋白部分水解配方以及氨基酸配方等特殊医学用途婴儿配方食品中的牛磺酸经水提取并沉淀蛋白后,稀释10倍后用丹磺酰氯衍生,以10 mmol/L乙酸钠和乙腈作为流动相进行洗脱,... 建立特殊医学用途婴儿配方食品中牛磺酸的检测方法。无乳糖配方、乳蛋白部分水解配方以及氨基酸配方等特殊医学用途婴儿配方食品中的牛磺酸经水提取并沉淀蛋白后,稀释10倍后用丹磺酰氯衍生,以10 mmol/L乙酸钠和乙腈作为流动相进行洗脱,用高效液相色谱仪二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果表明:牛磺酸的标准曲线为y=4.427x+1.197,牛磺酸在质量浓度1~50μg/mL范围内具有良好的线性关系,相关系数R^(2)=0.999,该方法的检出限为0.53 mg/100 g,定量限为1.60 mg/100 g,加标回收率范围为89.6%~103.9%,精密度(Relative standard deviation,RSD)为0.19%~5.02%。该方法衍生充分,受基质干扰小,分离效果显著,适用于特殊医学用途婴儿配方食品中牛磺酸含量的检测。 展开更多
关键词 特殊医学用途婴儿配方食品 牛磺酸 高效液相色谱法 衍生 稀释
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超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中24种真菌毒素 被引量:8
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作者 丁学妍 邵瑞婷 张涵璐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第24期325-334,共10页
运用基质分散固相萃取净化,建立牛奶中24种真菌毒素(黄曲霉毒素B_(1)、黄曲霉毒素B_(2)、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、玉米赤霉酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、β-... 运用基质分散固相萃取净化,建立牛奶中24种真菌毒素(黄曲霉毒素B_(1)、黄曲霉毒素B_(2)、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、玉米赤霉酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、T-2毒素、HT-2霉素、伏马毒素B_(1)、伏马毒素B_(2)、伏马毒素B_(3)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、交链孢霉单甲基醚、交链孢酚、腾毒素、细交链孢菌酮酸)多残留检测的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品经80%乙腈溶液(体积分数)提取,通过基质分散固相萃取净化,氮吹至近干,1 mL 50%乙腈溶液(体积分数)复溶,采用超高效液相色谱-串联质谱进行测定。经ACQUITY UPLC HSS T3反相柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分离,梯度洗脱,采用电喷雾离子源-多反应监测模式采集。24种目标物的相关系数(R2)均大于0.985,加标回收率为71.0%~123.0%,相对标准偏差均小于10%。该方法具有操作简单、重复性好、灵敏度高、杂质干扰小等特点,可以用于牛奶中24种真菌毒素的检测。 展开更多
关键词 基质分散固相萃取 真菌毒素 超高效液相色谱-串联质谱 牛奶
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液相色谱-质谱联用技术检测婴幼儿乳粉中的丙烯酰胺 被引量:8
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作者 于晓瑾 王浩 +2 位作者 张杉 张旭 陈江龙 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2019年第5期50-52,64,共4页
建立了婴幼儿乳粉中的丙烯酰胺的高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定方法。样品加水溶解超声提取后,利用乙腈除蛋白,正己烷除脂,使用Hypersil GOLD C18柱(50 mm×4.6 mm(i.d.),1.9μm)分离,经梯度洗脱分离,用电喷雾正离子MRM模式... 建立了婴幼儿乳粉中的丙烯酰胺的高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定方法。样品加水溶解超声提取后,利用乙腈除蛋白,正己烷除脂,使用Hypersil GOLD C18柱(50 mm×4.6 mm(i.d.),1.9μm)分离,经梯度洗脱分离,用电喷雾正离子MRM模式检测,同位素内标定量,可以对婴幼儿配方乳粉中的丙烯酰胺进行定量分析。结果表明:该方法的检出限为5μg/kg,定量限为10μg/kg,线性范围10.0μg/L^200.0μg/L,加标回收率介于86.7%~106.8%之间,相对标准偏差3.07%~9.61%(n=6)。 展开更多
关键词 液相色谱-质谱联用技术 婴幼儿乳粉 丙烯酰胺
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实时荧光定量PCR法鉴定发酵乳中嗜热链球菌 被引量:2
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作者 王青龙 貌达 +6 位作者 周燕霞 刘凯 李爽 杨霞 王雨婷 王军红 蔡雪凤 《中国酿造》 CAS 北大核心 2022年第7期149-154,共6页
该研究通过系统发育树分析确定目标基因,根据目的基因设计特异性引物和探针,建立一种能够快速准确鉴定发酵乳中嗜热链球菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)法,通过特异性、灵敏性和抗干扰实验对所建立方法进行验证,并使用该方法... 该研究通过系统发育树分析确定目标基因,根据目的基因设计特异性引物和探针,建立一种能够快速准确鉴定发酵乳中嗜热链球菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)法,通过特异性、灵敏性和抗干扰实验对所建立方法进行验证,并使用该方法对市售的60份标识含有嗜热链球菌的发酵乳样品进行检测。结果表明,recA基因具有种间特异性,种间差异率>10%,以其为目的基因建立的RT-fqPCR方法能够特异性的检测嗜热链球菌;绝对灵敏度达1 pg/μL,相对灵敏度达10^(3) CFU/mL;在培养物水平和基因组水平抗干扰能力良好。采用该方法从60份标识含有嗜热链球菌的发酵乳样品中均能检测出嗜热链球菌,说明实时荧光定量PCR方法能够快速、准确的对发酵乳中嗜热链球菌进行检测。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 嗜热链球菌 RECA基因 发酵乳 分子鉴定技术
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实时荧光定量PCR法鉴定婴幼儿配方乳粉中动物双歧杆菌乳亚种 被引量:2
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作者 王青龙 貌达 +9 位作者 周燕霞 李爽 王雨婷 杨霞 冉令辉 李庆尧 王凯毅 汤娱涵 丁珊珊 蔡雪凤 《中国酿造》 CAS 北大核心 2022年第6期224-230,共7页
该研究通过系统发育树分析确定目标基因,并设计引物和探针,建立一种婴幼儿配方乳粉中动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)鉴定方法。通过特异性、灵敏性和抗干扰实验对... 该研究通过系统发育树分析确定目标基因,并设计引物和探针,建立一种婴幼儿配方乳粉中动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)鉴定方法。通过特异性、灵敏性和抗干扰实验对该方法进行验证,并对市售的64份标识含有动物双歧杆菌乳亚种的婴幼儿配方乳粉样品进行检测。结果表明,atpD基因在动物双歧杆菌乳亚种间具有较高的种间特异性,种间差异率>10%,确定其为目标基因。基于该基因建立的RT-fqPCR方法能够特异性的检测动物双歧杆菌乳亚种,检测绝对灵敏度可以达到1 pg/μL,相对灵敏度可以达到10^(3) CFU/mL;基因水平和培养物水平抗干扰能力良好。采用该方法从64份标识含有动物双歧杆菌乳亚种的乳粉样品中均能检测出动物双歧杆菌乳亚种,表明基于atpD基因建立的RT-fqPCR方法能够快速准确的对动物双歧杆菌乳亚种进行检测。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 动物双歧杆菌乳亚种 atpD基因 鉴定 婴幼儿配方乳粉
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