-
题名胎儿间充质干细胞cDNA扣除文库的构建
被引量：1
- 1
-
-
作者
杨莉
王冬梅
李梁
白慈贤
曹华
李廷玉
裴雪涛
-
机构
北京输血研究所干细胞研究室
重庆医科大学附属儿童医院营养研究室
-
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2002年第2期89-92,共4页
-
基金
北京市248重大创新工程基金资助项目(编号 9550 2 1 380 0 )
国家基础研究发展规划项目(973)资助项目(编号G1 9990 5430 0 )
-
文摘
为了获得胎儿和成人间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)的差异表达基因 ,尤其是在胎儿MSC中特异表达的基因 ,应用抑制扣除杂交技术构建了胎儿和成人MSCcDNA扣除文库。首先 ,分别从胎儿和成人MSC中提取总RNA ,按照SMARTPCR方法依次合成单链和双链cDNA ,经RsaⅠ酶切后 ,胎儿MSCcDNA分别与两种不同的接头连接 ,再与成人MSCcDNA经过两次扣除杂交及两轮抑制性PCR扩增后 ,将产物与T载体连接构建成cDNA扣除文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增。结果 :文库扩增后共获得 890个克隆 ,对所获得的克隆进行PCR扩增鉴定 ,获得 76 8个阳性克隆 ,阳性率为 86 .3%。插入片段大小分布在 0 .2 - 1kb ,平均为 4 0 0 - 6 0 0bp。结论 :抑制扣除杂交技术是一种简便、有效的筛选差异表达基因的方法。胎儿MSCcDNA扣除文库的构建为进一步筛选、克隆胎儿MSC中特异性表达的功能相关基因奠定了基础。
-
关键词
间充质干细胞
抑制扣除杂交
cDNA扣除文库
胎儿
构建
文库扩增
骨髓
成人
特异表达基因
-
Keywords
mesenchymal stem cell
suppression subtractive hybridization
cDNA subtractive library
-
分类号
R329.2
[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R318.5
[医药卫生—生物医学工程]
-
