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全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性
被引量：
9
1
作者
孟晓光
甄里
+5 位作者
刘悦玫
侯利平
刘丹
李斌
欧阳伟民
魏开华
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期343-348,共6页
评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特...
评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。
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关键词
全柱成像毛细管等电聚焦电泳
电荷异质性
重组蛋白质药物
抗体
药学研究
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职称材料
IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析
被引量：
1
2
作者
崔新玲
胡志上
+3 位作者
孟晓光
钱小红
朱涛
应万涛
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期939-945,共7页
对单克隆抗体药物对照品(IgG1型)进行了全面的结构表征。采用ExactiveplusEMR质谱测定了去N糖前后抗体的精确分子量,并通过计算N糖含量得出其完整分子量为148285.0~149020.8,完整去糖后分子量为145810.4,N糖含量为1.67%~2.15%。优化了...
对单克隆抗体药物对照品(IgG1型)进行了全面的结构表征。采用ExactiveplusEMR质谱测定了去N糖前后抗体的精确分子量,并通过计算N糖含量得出其完整分子量为148285.0~149020.8,完整去糖后分子量为145810.4,N糖含量为1.67%~2.15%。优化了全柱成像实时等电聚焦毛细管电泳(WCID-cIEF)检测方法,结果显示该抗体等电点分布在8.21~8.74之间,其中主成分等电点为8.61,相对含量为61.43%。继而使用离子交换色谱检测了电荷异质性,发现碱性峰含量为4.1%,酸性峰含量为23.9%,主峰含量为72.0%,与WCID-cIEF结果吻合,并证明了方法间良好的重现性。通过切糖前后的肽图分析,获得糖肽分布信息,识别出糖修饰位点及重轻链的互补决定区(CDR),甲硫氨酸(M)的氧化位点及氧化率,并通过抗体还原前后的肽图解析出二硫键连接。研究结果同时提示该抗体对照品无C末端糖化修饰现象。
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关键词
抗体对照品
分子量
等电点
电荷异质性
肽图
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职称材料
题名
全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性
被引量：
9
1
作者
孟晓光
甄里
刘悦玫
侯利平
刘丹
李斌
欧阳伟民
魏开华
机构
北京
正旦国际科技有限责任公司
北京
蛋白质
组
研究
中心
蛋白质
组
学
国家
重点
实验室
国家
蛋白质
科学
中心
(
北京
)
江汉大
学
护理与医
学
技术
学
院
北京
绿绵科技有限公司
军事医
学
科学
院放射与辐射医
学
研究
所
出处
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期343-348,共6页
基金
国家高技术研究发展计划863项目(2014AA020906)
国家科技部重大仪器专项(2012YQ18011710)
蛋白质组学国家重点实验室课题(SKLP-O201412)
文摘
评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。
关键词
全柱成像毛细管等电聚焦电泳
电荷异质性
重组蛋白质药物
抗体
药学研究
Keywords
capillary isoelectric focusing electrophoresis -whole column imaging detection （cIEF -WCID）
charge heterogeneity
recombinant protein drug
antibody
pharmaceutical research
分类号
O657.8 [理学—分析化学]
O629.73 [理学—有机化学]
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职称材料
题名
IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析
被引量：
1
2
作者
崔新玲
胡志上
孟晓光
钱小红
朱涛
应万涛
机构
天津科技大
学
生物工程
学
院
北京
蛋白质
组
研究
中心
蛋白质
组
学
国家
重点
实验室
中国计量
科学
研究
院
北京
正旦国际科技有限责任公司
天津康希诺生物股份有限公司
出处
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期939-945,共7页
基金
国家重点研发计划(2017YFF0205400,2016YFA0501300)
国家自然基金重点项目(81530021)
创新基金课题(BWS14J052,16CXZ027)
文摘
对单克隆抗体药物对照品(IgG1型)进行了全面的结构表征。采用ExactiveplusEMR质谱测定了去N糖前后抗体的精确分子量,并通过计算N糖含量得出其完整分子量为148285.0~149020.8,完整去糖后分子量为145810.4,N糖含量为1.67%~2.15%。优化了全柱成像实时等电聚焦毛细管电泳(WCID-cIEF)检测方法,结果显示该抗体等电点分布在8.21~8.74之间,其中主成分等电点为8.61,相对含量为61.43%。继而使用离子交换色谱检测了电荷异质性,发现碱性峰含量为4.1%,酸性峰含量为23.9%,主峰含量为72.0%,与WCID-cIEF结果吻合,并证明了方法间良好的重现性。通过切糖前后的肽图分析,获得糖肽分布信息,识别出糖修饰位点及重轻链的互补决定区(CDR),甲硫氨酸(M)的氧化位点及氧化率,并通过抗体还原前后的肽图解析出二硫键连接。研究结果同时提示该抗体对照品无C末端糖化修饰现象。
关键词
抗体对照品
分子量
等电点
电荷异质性
肽图
Keywords
reference antibody
molecular weight
isoelectric point (pI )
charge heterogeneity
peptide mapping
分类号
O657 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性
孟晓光
甄里
刘悦玫
侯利平
刘丹
李斌
欧阳伟民
魏开华
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
9
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职称材料
2
IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析
崔新玲
胡志上
孟晓光
钱小红
朱涛
应万涛
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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职称材料
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