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DcR3-RNAi-SW480结肠癌稳转细胞模型的建立及方法优化
被引量：
4
1
作者
于玮
何平
+5 位作者
陶莹
李洋
李晶
吴涛
伍冀湘
戴洁
《临床荟萃》
CAS
2012年第22期1964-1967,F0003,共5页
目的建立靶向沉默诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)基因表达的DcR3-RNAi-SW480稳转细胞系,并对其条件及方法进行优化。方法构建靶向沉默DcR3基因的siRNA质粒表达载体,转染SW480细胞,并以G418及流式细胞仪筛选稳转细胞。实验分为3组:DcR...
目的建立靶向沉默诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)基因表达的DcR3-RNAi-SW480稳转细胞系,并对其条件及方法进行优化。方法构建靶向沉默DcR3基因的siRNA质粒表达载体,转染SW480细胞,并以G418及流式细胞仪筛选稳转细胞。实验分为3组:DcR3-RNAi稳转组、阴性对照组、空白对照组。蛋白质印记法(Western-blot)检测DcR3蛋白沉默情况。分别应用琼脂糖凝胶电泳、甲基噻唑基四唑(MTT)比色法、流式细胞术等方法对脂质体与质粒的比例、G418的筛选浓度、筛选的最佳方式等进行优化。结果 DcR3-RNAi稳转细胞组DcR3表达水平较对照组明显降低;在本实验室条件下,脂质体(μl)与DcR3-siRNA质粒(μg)最佳比例为3.5∶1;G418筛选浓度为800mg/L;G418联合流式细胞仪双筛的稳转细胞比例明显高于仅用G418单筛。结论成功建立特异性沉默DcR3基因表达的稳转DcR3-RNAi-SW480细胞系;G418联合流式是筛选稳转细胞较高效的方法;对转染及筛选的条件及方法进行优化,可提高转染与筛选效率。
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关键词
结肠肿瘤
受体
TNF相关凋亡诱导配体
RNA干扰
稳转
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职称材料
题名
DcR3-RNAi-SW480结肠癌稳转细胞模型的建立及方法优化
被引量：
4
1
作者
于玮
何平
陶莹
李洋
李晶
吴涛
伍冀湘
戴洁
机构
首都医
科
大学基础医学院病理系
首都医
科
大学附属
北京
安贞
医院
普外
科
北京航天总医院心电图科
出处
《临床荟萃》
CAS
2012年第22期1964-1967,F0003,共5页
基金
国家自然科学基金(30972886)
文摘
目的建立靶向沉默诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)基因表达的DcR3-RNAi-SW480稳转细胞系,并对其条件及方法进行优化。方法构建靶向沉默DcR3基因的siRNA质粒表达载体,转染SW480细胞,并以G418及流式细胞仪筛选稳转细胞。实验分为3组:DcR3-RNAi稳转组、阴性对照组、空白对照组。蛋白质印记法(Western-blot)检测DcR3蛋白沉默情况。分别应用琼脂糖凝胶电泳、甲基噻唑基四唑(MTT)比色法、流式细胞术等方法对脂质体与质粒的比例、G418的筛选浓度、筛选的最佳方式等进行优化。结果 DcR3-RNAi稳转细胞组DcR3表达水平较对照组明显降低;在本实验室条件下,脂质体(μl)与DcR3-siRNA质粒(μg)最佳比例为3.5∶1;G418筛选浓度为800mg/L;G418联合流式细胞仪双筛的稳转细胞比例明显高于仅用G418单筛。结论成功建立特异性沉默DcR3基因表达的稳转DcR3-RNAi-SW480细胞系;G418联合流式是筛选稳转细胞较高效的方法;对转染及筛选的条件及方法进行优化,可提高转染与筛选效率。
关键词
结肠肿瘤
受体
TNF相关凋亡诱导配体
RNA干扰
稳转
Keywords
colonic neoplasms
receptors
TNF-related apoptosis-inducing ligang
RNA interference
stable transfection
分类号
R735.35 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
DcR3-RNAi-SW480结肠癌稳转细胞模型的建立及方法优化
于玮
何平
陶莹
李洋
李晶
吴涛
伍冀湘
戴洁
《临床荟萃》
CAS
2012
4
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参考文献
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