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β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性高效筛选体系的构建与应用 被引量：4
1
作者 吕波 冯旭东 李春 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第8期3189-3194,共6页
分子改造是提高β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)在生产单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)过程中的键选择性的有效方法,但高通量筛选方法的缺失是限制其发展的重要瓶颈。为解决该问题,在大肠杆菌中构建了组成型表达β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E),利... 分子改造是提高β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)在生产单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)过程中的键选择性的有效方法,但高通量筛选方法的缺失是限制其发展的重要瓶颈。为解决该问题,在大肠杆菌中构建了组成型表达β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E),利用温度诱导表达噬菌体裂解酶SRRz实现原位裂解的一锅法(one-pot)甘草酸键选择性筛选体系(CELS);同时考察了启动子强度对PGUS-E外源表达的效果,优化了不同温度下裂解酶SRRz的表达对酶释放效率的影响。结果表明,CELS筛选体系成功实现了集培养、产酶、裂解和反应于一体化工艺,并将其应用于PGUS-E的非理性改造,获得了一系列键选择性显著提高的突变酶。研究证明,TIM桶状结构域中α螺旋结构的变化对甘草酸键选择性的改善有很大的影响。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖醛酸苷酶 生物催化 分子生物学 优化设计 键选择性
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细胞转运蛋白及其工程化应用 被引量：1
2
作者 杨坤 王颖 李春 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第4期1410-1417,共8页
细胞转运蛋白种类繁多,在细胞中进行营养物质的摄取、代谢产物释放以及信号传递等生理活动中发挥着重要作用。根据细胞转运蛋白的转运方式可分为:通道蛋白、载体蛋白和ATP驱动泵,其中,ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporters)... 细胞转运蛋白种类繁多,在细胞中进行营养物质的摄取、代谢产物释放以及信号传递等生理活动中发挥着重要作用。根据细胞转运蛋白的转运方式可分为:通道蛋白、载体蛋白和ATP驱动泵,其中,ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporters)属于细胞中依赖三磷酸腺苷(ATP)水解供能的跨膜转运蛋白,其参与动物细胞的多药耐药性以及植物体在外界胁迫条件下的自我防御而受到广泛关注。对细胞转运蛋白的清晰认识是进行有效利用的基础,因此本文综述了植物、动物和微生物细胞中有关代谢产物和药物等物质转运相关的ABC转运蛋白的结构、转运机制。总结了当前细胞转运蛋白在各领域的工程化应用进展和需要解决的问题,旨在为更全面高效地利用细胞转运蛋白进行抗癌新药的研究开发、提高农作物的抗逆性和微生物细胞工厂的高效生物制造提供借鉴。 展开更多
关键词 生物膜 转运蛋白 传递 生物制造 合成生物学
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核糖核酸开关用于微生物细胞工厂的智能与精细调控 被引量：2
3
作者 赵雨佳 张根林 +1 位作者 周晓宏 李春 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期3811-3819,共9页
利用代谢工程与合成生物技术对细胞内复杂的代谢网络和调控网络进行重构和改造,以建立合成新化合物或提高目标产物产量的微生物细胞工厂是当今绿色化工技术发展的方向之一。微生物代谢途径的调控受环境和遗传的双重影响,细胞通过全局转... 利用代谢工程与合成生物技术对细胞内复杂的代谢网络和调控网络进行重构和改造,以建立合成新化合物或提高目标产物产量的微生物细胞工厂是当今绿色化工技术发展的方向之一。微生物代谢途径的调控受环境和遗传的双重影响,细胞通过全局转录因子、信使分子和反馈抑制等方式响应环境变化来维持细胞的内稳态;同时细胞还受自身遗传基因线路的调控,在转录、翻译以及翻译后修饰过程中调控特定基因的表达。核糖核酸开关是一类调控基因线路表达的RNA元件,通过与金属离子、糖类衍生物、氨基酸、核酸衍生物以及辅酶等特异性配体结合发生的构象变化,从而启动或阻断m RNA的转录、翻译、拼接等过程来调控基因的表达。核糖核酸开关作为天然的生物感受器和效应器通过人工设计可成为微生物细胞工厂智能化和精细化调控的分子工具,并在化工、医药、环保、食品等领域得到广泛应用。 展开更多
关键词 核糖核酸开关 微生物细胞工厂 精细调控 生物转化 优化 代谢工程 合成生物学
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大肠杆菌温敏耐热系统的构建与应用 被引量：1
4
作者 贾海洋 孙欢 +2 位作者 孙翔英 冯旭东 李春 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期2613-2619,共7页
发酵过程中热胁迫不仅影响微生物的生长和生产,还因冷却控温增加了生产成本。通过人工设计合成的温敏型RNA开关调控来源于腾冲嗜热菌(Thermoanaerobacter tengcongensis MB4)的热激蛋白Dna K的表达,该温敏型耐热系统显著提高了大肠杆菌... 发酵过程中热胁迫不仅影响微生物的生长和生产,还因冷却控温增加了生产成本。通过人工设计合成的温敏型RNA开关调控来源于腾冲嗜热菌(Thermoanaerobacter tengcongensis MB4)的热激蛋白Dna K的表达,该温敏型耐热系统显著提高了大肠杆菌的耐热性,同时还减少了大肠杆菌在37℃过表达热激蛋白的代谢负荷。将该系统应用于产赖氨酸大肠杆菌的高温发酵,不仅强化了其在40℃下的生长能力,而且显著提高了其在高温下的生产能力,赖氨酸产量比对照组提高了2.95倍。温敏型耐热系统的应用为人工耐热生物系统的构建提供了新方法。 展开更多
关键词 生物技术 合成生物学 发酵 耐热性 RNA温敏开关 热激蛋白 赖氨酸
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生物制造过程中的微生物生长与调控 被引量：1
5
作者 侯慧 李春 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1837-1844,共8页
提高生物基产品的产量和生产效率是生物制造发展的目标。由于微生物具有生长快、营养要求简单和基因操作简便等特点,常用作生物基产品制造过程中的底盘宿主,因此,产品制造过程中微生物细胞的生长与调控尤为重要,其生长调控会直接或间接... 提高生物基产品的产量和生产效率是生物制造发展的目标。由于微生物具有生长快、营养要求简单和基因操作简便等特点,常用作生物基产品制造过程中的底盘宿主,因此,产品制造过程中微生物细胞的生长与调控尤为重要,其生长调控会直接或间接地影响生物基产品的合成效率。微生物的生长不仅受外界环境如温度、溶氧量、p H等的影响,而且还受微生物本身的生长与调控机制如细胞分裂调控、必需基因表达调控、程序化死亡等的影响。本文综述了利用分子生物学、合成生物学和系统生物学等方法对微生物细胞生长和分裂过程进行分子调控,以提高生物反应速率和目标产物的产量,为化工、食品、生物医药以及环境保护等领域构建高效的生物制造工艺提供新思路。 展开更多
关键词 生物制造 细胞生长 分裂调控 必需基因 程序化死亡 生物产业
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CAAC工艺处理模拟大豆深加工废水厌氧出水 被引量：4
6
作者 付伟超 吴世晗 +3 位作者 朱毅 李晓霞 王金梅 李春 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第7期964-969,共6页
为满足大豆深加工行业废水处理的需要,结合好氧-厌氧耦合(AAC)工艺和移动床生物膜反应器(MBBR),研发了连续化好氧-厌氧耦合(CAAC)工艺.该工艺通过水流方向上交替改变的环境条件,实现大豆深加工废水厌氧出水污染物的去除和剩余污泥减量化... 为满足大豆深加工行业废水处理的需要,结合好氧-厌氧耦合(AAC)工艺和移动床生物膜反应器(MBBR),研发了连续化好氧-厌氧耦合(CAAC)工艺.该工艺通过水流方向上交替改变的环境条件,实现大豆深加工废水厌氧出水污染物的去除和剩余污泥减量化.试验采用模拟大豆深加工废水厌氧出水进行处理,水力停留时间(HRT)≥1.3d时,出水ρ(CODCr)保持在50mg/L以下,CODCr去除率为95%,出水ρ(MLSS)保持在0～15mg/L.经过301d的试验,仅排放污泥1次,表观污泥产率为0.1571,为活性污泥法的31.4%,具备良好的污泥减量化特性. 展开更多
关键词 废水处理 剩余污泥减量化 连续化好氧-厌氧耦合
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磷脂酶高产菌株的筛选、诱变及其在豆油脱胶中的应用 被引量：3
7
作者 王金梅 姜芳燕 +1 位作者 戴大章 李春 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第7期948-952,共5页
采用以磷脂为唯一碳源的限制性培养基,从富油土样中筛选得到一株磷脂酶活性较高的菌株Achromobacter sp.BIT-56.经紫外诱变处理后其磷脂酶活力比原始菌株提高了73.3%,进一步采用紫外-硫酸二乙酯(DES)复合诱变后其磷脂酶活力提高了95.6%... 采用以磷脂为唯一碳源的限制性培养基,从富油土样中筛选得到一株磷脂酶活性较高的菌株Achromobacter sp.BIT-56.经紫外诱变处理后其磷脂酶活力比原始菌株提高了73.3%,进一步采用紫外-硫酸二乙酯(DES)复合诱变后其磷脂酶活力提高了95.6%.利用该菌株生产的磷脂酶进行豆油脱胶研究,其适宜的脱胶条件:脱胶温度为40℃,pH为5.0,加酶量为100U/kg,加水量为4%,脱胶时间为4h,在该条件下脱胶油中磷脂的去除率高达75.6%. 展开更多
关键词 磷脂酶 筛选 诱变 酶法脱胶
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产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8复配对棉花的解盐促生作用 被引量：5
8
作者 赵雅峰 李春 +1 位作者 沈亁炜 武占省 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第12期6103-6105,共3页
[目的]为微生物菌剂的产品开发和应用提供理论依据。[方法]将产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按不同比例复配,研究不同复配组合对棉花的解盐促生作用及其对立枯丝核菌的抑菌效果。[结果]产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组... [目的]为微生物菌剂的产品开发和应用提供理论依据。[方法]将产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按不同比例复配,研究不同复配组合对棉花的解盐促生作用及其对立枯丝核菌的抑菌效果。[结果]产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按1∶(1～2)复配时,对立枯丝核菌具有很好的抑菌效应;两者按1∶(1～2)复配浸种的棉花种子的发芽率为86.67%(是对照组的1.49倍),盆栽试验中棉花种子的发芽率和成苗率分别达到60.00%和50.00%,分别是对照组的1.50和1.67倍。[结论]产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按适当比例复配对盐胁迫条件下的棉花具有显著的促生作用。 展开更多
关键词 棉花 盐胁迫 促生作用
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磷酸鞘胺醇受体在四氯化碳引起的肝纤维化小鼠肝脏的表达
9
作者 杨琳 赵东旭 李丽英 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第5期610-613,共4页
目的研究四氯化碳(CCl4)引起的肝纤维化小鼠肝组织中的磷酸鞘胺醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)受体1、2、3(S1P1-3)mRNA和蛋白含量的变化。方法制备小鼠CCl4肝纤维化模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应方法测定小鼠肝组织S1P1-3mRNA... 目的研究四氯化碳(CCl4)引起的肝纤维化小鼠肝组织中的磷酸鞘胺醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)受体1、2、3(S1P1-3)mRNA和蛋白含量的变化。方法制备小鼠CCl4肝纤维化模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应方法测定小鼠肝组织S1P1-3mRNA表达情况;采用免疫印记(Western blotting)方法测定小鼠肝组织S1P1-3蛋白表达情况。结果CCl4诱导小鼠肝纤维化2周或4周后,与对照组相比,小鼠肝组织的S1P1mRNA的表达差异无统计学意义,而S1P2、S1P3mRNA的表达显著上调(P<0.05);与之相对应,S1P1的蛋白表达差异无统计学意义,而S1P2、S1P3的蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论在CCl4引起的小鼠肝纤维化形成过程中,S1P、S1P在mRNA和蛋白水平均显著上调,表明S1P相关受体在肝纤维化发生过程中起重要作用。 展开更多
关键词 肝脏纤维化 磷酸鞘胺醇 磷酸鞘胺醇受体
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大肠杆菌耐热元器件的构建及其应用 被引量：2
10
作者 孙翔英 刘月芹 +3 位作者 孙欢 贾海洋 戴大章 李春 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期3128-3135,共8页
以提高大肠杆菌耐热性为目的，基于腾冲嗜热菌（Thermoanaerobacter tengcongensis MB4）热激蛋白基因T.te-HSP20构建了诱导型耐热元器件 T7-T.te-HSP20和组成型耐热元器件 gapA-T.te-HSP20，转入大肠杆菌（Escherichia coli）获得工程... 以提高大肠杆菌耐热性为目的，基于腾冲嗜热菌（Thermoanaerobacter tengcongensis MB4）热激蛋白基因T.te-HSP20构建了诱导型耐热元器件 T7-T.te-HSP20和组成型耐热元器件 gapA-T.te-HSP20，转入大肠杆菌（Escherichia coli）获得工程菌 E. coli-TH 和 E. coli-GH。工程菌E. coli-TH在30℃和IPTG诱导下，目标蛋白呈可溶性表达，经50℃热激30 min后，存活率提高了3.2倍。高温发酵表明gapA-T.te-HSP20扩宽了工程菌E. coli-GH的最适生长温度的范围（37～43℃），较大程度提高了大肠杆菌的耐热性。抗逆性分析还发现工程菌E. coli-GH具备了耐热与耐丁醇的双重功能，并有一定的抗乙酸和乙醇能力。为工业梯度升温发酵生产生物基产品的高效制造、节省成本提供了新思路。 展开更多
关键词 耐热性 热激蛋白 存活率 抗逆性 大肠杆菌
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