目的观察热休克蛋白(HSP)27在青年大鼠及老年大鼠心肌缺血预处理时的mRNA和蛋白表达量及变化规律。方法大鼠在体心脏经缺血5 m in、再灌注5 m in(反复3次)预处理后,于0、5、15、45、60 m in取左心室缺血的前壁与非缺血的后壁肌组织分别...目的观察热休克蛋白(HSP)27在青年大鼠及老年大鼠心肌缺血预处理时的mRNA和蛋白表达量及变化规律。方法大鼠在体心脏经缺血5 m in、再灌注5 m in(反复3次)预处理后,于0、5、15、45、60 m in取左心室缺血的前壁与非缺血的后壁肌组织分别匀浆,采用RT-PCR方法观察缺血预处理对青年及老龄大鼠HSP27 mRNA在不同时间点表达的改变情况,离心取上清液及沉淀蛋白分别用W estern B lot检测HSP27在预处理不同时刻可溶性蛋白及不溶性蛋白含量的改变。新鲜冷冻心肌组织采用免疫荧光方法标记HSP27,在激光共聚焦显微镜下观察青年大鼠及老年大鼠在缺血预处理后HSP27在不同时间点的分布情况。结果 (1)经缺血预处理后约15 m in,老年大鼠及青年大鼠HSP27 mRNA的表达即有所增加。(2)青年大鼠心脏缺血预处理后即刻前壁缺血组织HSP27从胞质(上清液)移至不溶性成分细胞骨架(沉淀),至15 m in时大部分移到沉淀中,在45 m in时HSP27则几乎全部复位到上清液中。(3)免疫组织学检查显示青年大鼠HSP27在IPC后15 m in向Z线及润盘部位聚集;老年大鼠中HSP27移位程度与青年大鼠相比明显减弱。结论老年大鼠心肌组织中小分子HSP丧失移位能力,可能是老年大鼠缺血预处理保护作用减弱的重要原因之一。展开更多
文摘目的观察热休克蛋白(HSP)27在青年大鼠及老年大鼠心肌缺血预处理时的mRNA和蛋白表达量及变化规律。方法大鼠在体心脏经缺血5 m in、再灌注5 m in(反复3次)预处理后,于0、5、15、45、60 m in取左心室缺血的前壁与非缺血的后壁肌组织分别匀浆,采用RT-PCR方法观察缺血预处理对青年及老龄大鼠HSP27 mRNA在不同时间点表达的改变情况,离心取上清液及沉淀蛋白分别用W estern B lot检测HSP27在预处理不同时刻可溶性蛋白及不溶性蛋白含量的改变。新鲜冷冻心肌组织采用免疫荧光方法标记HSP27,在激光共聚焦显微镜下观察青年大鼠及老年大鼠在缺血预处理后HSP27在不同时间点的分布情况。结果 (1)经缺血预处理后约15 m in,老年大鼠及青年大鼠HSP27 mRNA的表达即有所增加。(2)青年大鼠心脏缺血预处理后即刻前壁缺血组织HSP27从胞质(上清液)移至不溶性成分细胞骨架(沉淀),至15 m in时大部分移到沉淀中,在45 m in时HSP27则几乎全部复位到上清液中。(3)免疫组织学检查显示青年大鼠HSP27在IPC后15 m in向Z线及润盘部位聚集;老年大鼠中HSP27移位程度与青年大鼠相比明显减弱。结论老年大鼠心肌组织中小分子HSP丧失移位能力,可能是老年大鼠缺血预处理保护作用减弱的重要原因之一。
