期刊导航
期刊开放获取
上海教育软件发展有限公..
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
2
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
分子信标-TaqMan探针法实时荧光定量PCR新型探针及引物
被引量：
8
1
作者
姜文灿
岳素文
+2 位作者
江洪
葛素君
王成彬
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期107-114,共8页
在TaqMan探针法实时荧光定量PCR中,排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体(Primer Dimer,PD)引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验;然后通过双重PCR的干扰实验选择合适的内标基因,并使用内标质粒检...
在TaqMan探针法实时荧光定量PCR中,排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体(Primer Dimer,PD)引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验;然后通过双重PCR的干扰实验选择合适的内标基因,并使用内标质粒检测验证中部同序引物排除PD干扰的实用性;最后比较探针法不同体系检测HBV基因的灵敏度。结果表明,引物与探针聚合实验中,含有反义碱基的HBVP4在重复实验中未出现假阳性;竞争性双重PCR和非竞争性双重PCR两模板开始出现干扰作用的浓度差分别为20倍和100倍;对于内标基因,使用中部同序引物对以及普通引物对分别可以检测到10-9和10-8稀释度;3种HBV基因检测体系,使用普通引物对可以检测到Ct33左右,加入内标系统和使用中部同序引物对均可检测到Ct35左右。在TaqMan-分子信标结构调整的基础上引入反义碱基可以在排除由引物和探针聚合延伸引起的假阳性问题;在探针法中,使用中部同序引物对和加入内标系统均可降低PD的干扰程度,提升检测的灵敏度。
展开更多
关键词
实时荧光定量PCR
TAQMAN探针
反义碱基
引物二聚体
内标系统
在线阅读
下载PDF
职称材料
一种新的引物二聚体形成机制
被引量：
7
2
作者
刘姗姗
岳素文
+2 位作者
江洪
王成彬
吕建新
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期53-58,共6页
目的 通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR无模板测试技术,阐明引物二聚体形成的机制,解决PCR反应中引物二聚体形成的问题,推动SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术的应用.方法采用 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测不同特点的典型引物对...
目的 通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR无模板测试技术,阐明引物二聚体形成的机制,解决PCR反应中引物二聚体形成的问题,推动SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术的应用.方法采用 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测不同特点的典型引物对形成引物二聚体的Ct值,检测特异的反义核苷酸、短寡核苷酸对二聚体的影响,测试优化方案在HBV DNA定量检测中的效果.结果 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR测试发现,3′端连续6～7碱基反向互补的引物对的Ct值：5.0、10.0、11.0;与另一引物中部连续6个碱基反向互补的Ct值：30.0、28.0、29.5;与另一引物5′末端连续6个碱基反向互补的引物对的Ct值：32.0、29.5、31.0.普通引物对测试的Ct值：27.5、29.0、31.0;中间部分同向相同的引物对测试的Ct值：36.5、43.0、39.0;同向相同的引物对未形成二聚体,反向相同引物对测试Ct值是30.5.低温预处理的短寡核苷酸促进二聚体形成,而在热启动PCR反应中无作用,特异的反义核酸抑制二聚体.PCR增效剂推后普通引物对的二聚体1个循环,推后部分同向相同的引物对的二聚体10个循环.中间部分相同的引物对检测低浓度质粒标准品比普通引物对检测结果更精确.结论 提出一种新的引物二聚体形成机制：引物对在3′末端碱基反向互补结合的基础上,借助剩余序列的同向互补力量拉近彼此在空间上的距离,从而进行延伸反应形成引物二聚体.中间偏3′端同向相同的引物对可以有效抑制引物二聚体,并且该作用可以被其他优化方法加强.
展开更多
关键词
SYBR
GreenⅠ
引物二聚体
形成机制
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
分子信标-TaqMan探针法实时荧光定量PCR新型探针及引物
被引量：
8
1
作者
姜文灿
岳素文
江洪
葛素君
王成彬
机构
中国人民解放军总医院临检科
温州医科大学
检验
医学院生命科学学院
北京泰格瑞分子检验有限公司
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期107-114,共8页
基金
国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ03026107)
文摘
在TaqMan探针法实时荧光定量PCR中,排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体(Primer Dimer,PD)引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验;然后通过双重PCR的干扰实验选择合适的内标基因,并使用内标质粒检测验证中部同序引物排除PD干扰的实用性;最后比较探针法不同体系检测HBV基因的灵敏度。结果表明,引物与探针聚合实验中,含有反义碱基的HBVP4在重复实验中未出现假阳性;竞争性双重PCR和非竞争性双重PCR两模板开始出现干扰作用的浓度差分别为20倍和100倍;对于内标基因,使用中部同序引物对以及普通引物对分别可以检测到10-9和10-8稀释度;3种HBV基因检测体系,使用普通引物对可以检测到Ct33左右,加入内标系统和使用中部同序引物对均可检测到Ct35左右。在TaqMan-分子信标结构调整的基础上引入反义碱基可以在排除由引物和探针聚合延伸引起的假阳性问题;在探针法中,使用中部同序引物对和加入内标系统均可降低PD的干扰程度,提升检测的灵敏度。
关键词
实时荧光定量PCR
TAQMAN探针
反义碱基
引物二聚体
内标系统
Keywords
real time fluorescent quantitative PCR
TaqMan probe
antisense base
primer dimer
internal control
分类号
R440 [医药卫生—诊断学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
一种新的引物二聚体形成机制
被引量：
7
2
作者
刘姗姗
岳素文
江洪
王成彬
吕建新
机构
温州医科大学
检验
医学院
北京泰格瑞分子检验有限公司
中国人民解放军总医院临床
检验
科
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期53-58,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81071426)
军队“十二五”重大专项资助项目(No.AWS11Z005-4)
文摘
目的 通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR无模板测试技术,阐明引物二聚体形成的机制,解决PCR反应中引物二聚体形成的问题,推动SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术的应用.方法采用 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测不同特点的典型引物对形成引物二聚体的Ct值,检测特异的反义核苷酸、短寡核苷酸对二聚体的影响,测试优化方案在HBV DNA定量检测中的效果.结果 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR测试发现,3′端连续6～7碱基反向互补的引物对的Ct值：5.0、10.0、11.0;与另一引物中部连续6个碱基反向互补的Ct值：30.0、28.0、29.5;与另一引物5′末端连续6个碱基反向互补的引物对的Ct值：32.0、29.5、31.0.普通引物对测试的Ct值：27.5、29.0、31.0;中间部分同向相同的引物对测试的Ct值：36.5、43.0、39.0;同向相同的引物对未形成二聚体,反向相同引物对测试Ct值是30.5.低温预处理的短寡核苷酸促进二聚体形成,而在热启动PCR反应中无作用,特异的反义核酸抑制二聚体.PCR增效剂推后普通引物对的二聚体1个循环,推后部分同向相同的引物对的二聚体10个循环.中间部分相同的引物对检测低浓度质粒标准品比普通引物对检测结果更精确.结论 提出一种新的引物二聚体形成机制：引物对在3′末端碱基反向互补结合的基础上,借助剩余序列的同向互补力量拉近彼此在空间上的距离,从而进行延伸反应形成引物二聚体.中间偏3′端同向相同的引物对可以有效抑制引物二聚体,并且该作用可以被其他优化方法加强.
关键词
SYBR
GreenⅠ
引物二聚体
形成机制
Keywords
real-time fluorescent quantitative PCR
SYBR GreenI
primer-dimer
formation mechanism
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
分子信标-TaqMan探针法实时荧光定量PCR新型探针及引物
姜文灿
岳素文
江洪
葛素君
王成彬
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
一种新的引物二聚体形成机制
刘姗姗
岳素文
江洪
王成彬
吕建新
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部
