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实时荧光定量PCR非特异性分析
被引量：
6
1
作者
姜文灿
岳素文
+4 位作者
何赏
陈琛
孙慧珍
江洪
王成彬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2017年第5期370-372,共3页
聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而,伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法,该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引...
聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而,伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法,该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引物二聚体(primer dimer,PD)引起。对此,引物设计时使用的中部同序引物对可以从根本上避免PD的产生,从而解决由其引起的非特异性问题。该文从PCR的发展和本质、PCR非特异性产生的原因和应对策略等方面作一总结及分析。
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关键词
实时荧光定量PCR
非特异性
引物二聚体
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职称材料
影响内标双重PCR靶模板检测灵敏度的因素分析
被引量：
2
2
作者
姜文灿
岳素文
+4 位作者
江洪
梁爽
苑晓舟
葛素君
王成彬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016年第4期244-246,共3页
目的在内标双重PCR系统中寻找影响靶模板检测灵敏度的主要因素,并比较不同检测体系的灵敏度。方法针对HBV基因设计普通引物对和中部同序引物对,比较引物二聚体（PD）含量;控制内标基因的Ct值约为30,调整内标引物浓度为10、8、5、2、1μm...
目的在内标双重PCR系统中寻找影响靶模板检测灵敏度的主要因素,并比较不同检测体系的灵敏度。方法针对HBV基因设计普通引物对和中部同序引物对,比较引物二聚体（PD）含量;控制内标基因的Ct值约为30,调整内标引物浓度为10、8、5、2、1μmol/L,比较不同体系的检测灵敏度;控制内标引物的用量不变,分别测定内标基因Ct值在15、20、25、30时的靶模板检测灵敏度。结果中部同序引物PD的Ct值在35以上,普通引物对PD的Ct值在30~33之间;10、8、5、2、1μmol/L浓度的内标引物需要内标模板的浓度分别为5×10^4、5×10^4、5×10^4、5×10^5、5×10^7IU/m L;不同内标引物用量检测灵敏度均为5×10^3IU/m L,仅使用中部同序引物的单重PCR检测灵敏度为5×10^2IU/m L;内标Ct值在15、20、25、30时靶模板检测的灵敏度分别为5×10^5、5×10^4、5×10^3、5×10^3IU/m L。结论在双重PCR检测体系中,对靶模板检测灵敏度影响最大的因素为内标的模板量,仅使用中部同序引物对的单重PCR具有最高的灵敏度。
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关键词
双重PCR
引物二聚体
内标系统
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职称材料
题名
实时荧光定量PCR非特异性分析
被引量：
6
1
作者
姜文灿
岳素文
何赏
陈琛
孙慧珍
江洪
王成彬
机构
中国人民解放军总医院临检科
温州医科大学
检验
医学院/生命科学学院
北京泰格瑞分子检验有限公司
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2017年第5期370-372,共3页
基金
国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ03026107)
文摘
聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而,伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法,该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引物二聚体(primer dimer,PD)引起。对此,引物设计时使用的中部同序引物对可以从根本上避免PD的产生,从而解决由其引起的非特异性问题。该文从PCR的发展和本质、PCR非特异性产生的原因和应对策略等方面作一总结及分析。
关键词
实时荧光定量PCR
非特异性
引物二聚体
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
影响内标双重PCR靶模板检测灵敏度的因素分析
被引量：
2
2
作者
姜文灿
岳素文
江洪
梁爽
苑晓舟
葛素君
王成彬
机构
温州医科大学
检验
医学院
北京泰格瑞分子检验有限公司
中国人民解放军总医院临检科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016年第4期244-246,共3页
基金
国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ03026107)
文摘
目的在内标双重PCR系统中寻找影响靶模板检测灵敏度的主要因素,并比较不同检测体系的灵敏度。方法针对HBV基因设计普通引物对和中部同序引物对,比较引物二聚体（PD）含量;控制内标基因的Ct值约为30,调整内标引物浓度为10、8、5、2、1μmol/L,比较不同体系的检测灵敏度;控制内标引物的用量不变,分别测定内标基因Ct值在15、20、25、30时的靶模板检测灵敏度。结果中部同序引物PD的Ct值在35以上,普通引物对PD的Ct值在30~33之间;10、8、5、2、1μmol/L浓度的内标引物需要内标模板的浓度分别为5×10^4、5×10^4、5×10^4、5×10^5、5×10^7IU/m L;不同内标引物用量检测灵敏度均为5×10^3IU/m L,仅使用中部同序引物的单重PCR检测灵敏度为5×10^2IU/m L;内标Ct值在15、20、25、30时靶模板检测的灵敏度分别为5×10^5、5×10^4、5×10^3、5×10^3IU/m L。结论在双重PCR检测体系中,对靶模板检测灵敏度影响最大的因素为内标的模板量,仅使用中部同序引物对的单重PCR具有最高的灵敏度。
关键词
双重PCR
引物二聚体
内标系统
Keywords
duplex PCR
primer-dimer
internal control system
分类号
R446.19 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
实时荧光定量PCR非特异性分析
姜文灿
岳素文
何赏
陈琛
孙慧珍
江洪
王成彬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2017
6
在线阅读
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职称材料
2
影响内标双重PCR靶模板检测灵敏度的因素分析
姜文灿
岳素文
江洪
梁爽
苑晓舟
葛素君
王成彬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016
2
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
统计分析
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