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全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性被引量：9: 1; 作者孟晓光甄里 +5 位作者刘悦玫侯利平刘丹李斌欧阳伟民魏开华《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期343-348,共6页; 评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特... 展开更多; 关键词全柱成像毛细管等电聚焦电泳电荷异质性重组蛋白质药物抗体药学研究; 在线阅读下载PDF 职称材料

联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原被引量：3: 2; 作者侯利平傅海媛 +10 位作者陶亚岚黄亚娟孙云波宋纯艳夏云飞杨保安韩治国肖汉族郑俊杰甄蓓魏开华《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期783-788,共6页; 建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对... 展开更多; 关键词多肽偶联碳二亚胺偶联法监测抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用被引量：1: 3; 作者宋纯艳张拓 +6 位作者侯利平原剑黄亚娟韩治国刘曙晨甄蓓魏开华《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期917-921,927,共6页; 获得一种趋于均相反应体系的比浊法,用于重组人溶菌酶活性的研究,并建立相关操作规程和质量标准.通过显微计数法进行底物菌液质控,改进酶与菌液的混合方式和最佳酶用量,采用“双直线法”优化反应计时区间,并精确测定重组人溶菌酶含量.... 展开更多; 关键词重组人溶菌酶比浊法双直线法 Lowry法; 在线阅读下载PDF 职称材料

IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析被引量：1: 4; 作者崔新玲胡志上 +3 位作者孟晓光钱小红朱涛应万涛《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期939-945,共7页; 对单克隆抗体药物对照品(IgG1型)进行了全面的结构表征。采用ExactiveplusEMR质谱测定了去N糖前后抗体的精确分子量,并通过计算N糖含量得出其完整分子量为148285.0~149020.8,完整去糖后分子量为145810.4,N糖含量为1.67%~2.15%。优化了... 展开更多; 关键词抗体对照品分子量等电点电荷异质性肽图; 在线阅读下载PDF 职称材料

MALDI-TOF质谱准内标法及其用于rhTPO复杂糖一致性研究被引量：2: 5; 作者刘悦玫侯利平 +2 位作者杨梅孟晓光魏开华《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1458-1463,共6页; 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)准内标法准确测定重组人血小板生成素(rhTPO)仿制药和原研药中4类糖修饰的相对含量,并进行样本间和批间一致性比较。结合多种切糖酶逐步切除rhTPO的N-糖、唾液酸和O-糖;以牛血清白蛋... 展开更多; 关键词重组人血小板生成素(rhTPO) 基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 准内标法糖含量糖化; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性被引量：9: 1; 作者孟晓光甄里刘悦玫侯利平刘丹李斌欧阳伟民魏开华; 机构北京正旦国际科技有限责任公司北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室国家蛋白质科学中心(北京) 江汉大学护理与医学技术学院北京绿绵科技有限公司军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 出处《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期343-348,共6页; 基金国家高技术研究发展计划863项目(2014AA020906) 国家科技部重大仪器专项(2012YQ18011710) 蛋白质组学国家重点实验室课题(SKLP-O201412); 文摘评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。; 关键词全柱成像毛细管等电聚焦电泳电荷异质性重组蛋白质药物抗体药学研究; Keywords capillary isoelectric focusing electrophoresis -whole column imaging detection （cIEF -WCID） charge heterogeneity recombinant protein drug antibody pharmaceutical research; 分类号 O657.8 [理学—分析化学] O629.73 [理学—有机化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原被引量：3: 2; 作者侯利平傅海媛陶亚岚黄亚娟孙云波宋纯艳夏云飞杨保安韩治国肖汉族郑俊杰甄蓓魏开华; 机构中南大学药学院军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心、蛋白质组学国家重点实验室、国家蛋白质科学中心(北京) 中山大学肿瘤防治中心北京正旦国际科技有限责任公司湖南金健药业有限责任公司; 出处《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期783-788,共6页; 基金 863项目(2012AA020205) 国家科技部重大仪器专项(2012YQ18011710); 文摘建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对加样顺序、投料比、偶联时间等关键条件进行考察,采用UV和SDS-PAGE对反应产物进行联合监测,以偶联比和偶联率联合评价反应条件。加样顺序为多肽和载体蛋白先混合再加到碳二亚胺中,三者质量比为1∶1∶1,偶联时间为12 h,偶联比在4∶1～12∶1之间,偶联率在9%～20%之间,所得SP0104多抗效价达到1∶80 000,MALDI-TOF质谱分析证实该抗体准确捕获目标抗原。用优化的偶联方法制备多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效价均在1∶1万以上,最高可达1∶51.2万。所建碳二亚胺多肽偶联联合监测法简便实用,可提高多肽抗体制备的成功率。; 关键词多肽偶联碳二亚胺偶联法监测抗体; Keywords peptide coupling carbodiimide coupling monitoring antibody; 分类号 O657.77 [理学—分析化学] O629.7 [理学—有机化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用被引量：1: 3; 作者宋纯艳张拓侯利平原剑黄亚娟韩治国刘曙晨甄蓓魏开华; 机构中南大学药学院军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心北京正旦国际科技有限责任公司; 出处《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期917-921,927,共6页; 基金国家高技术研究发展计划863项目(2012AA020205 2014AA020906) +1 种基金国家科技部传染病重大专项(2013ZX10002009-001-001); 文摘获得一种趋于均相反应体系的比浊法,用于重组人溶菌酶活性的研究,并建立相关操作规程和质量标准.通过显微计数法进行底物菌液质控,改进酶与菌液的混合方式和最佳酶用量,采用“双直线法”优化反应计时区间,并精确测定重组人溶菌酶含量.显微镜菌体计数法确定0.3 mg/mL底物菌液中菌体数保持在1.1 ×108个/mL左右;酶与菌液在样品池内经吸排法快速混合可趋近均相体系;酶的最佳用量为3μg;确定反应计时区间为0～60s;依据所制定的酶活性操作规程,确定重组人溶菌酶活性质量标准为45 000～ 65 000U/mg,日内、日间相对标准偏差均小于5％;优选Lowry法并精确测定蛋白含量为（1.0±0.1）mg/mL.改进后的方法稳定性得到明显提高,且操作简便、结果可靠,已被3家研究单位、企业验证并接受.建立的重组人溶菌酶活性和含量测定质量标准及操作规程具有实际参考价值.; 关键词重组人溶菌酶比浊法双直线法 Lowry法; Keywords recombinant human lysozyme turbidimetry double line method Lowry method; 分类号 O657.3 [理学—分析化学] O629.8 [理学—有机化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析被引量：1: 4; 作者崔新玲胡志上孟晓光钱小红朱涛应万涛; 机构天津科技大学生物工程学院北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室中国计量科学研究院北京正旦国际科技有限责任公司天津康希诺生物股份有限公司; 出处《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期939-945,共7页; 基金国家重点研发计划(2017YFF0205400,2016YFA0501300) 国家自然基金重点项目(81530021) 创新基金课题(BWS14J052,16CXZ027); 文摘对单克隆抗体药物对照品(IgG1型)进行了全面的结构表征。采用ExactiveplusEMR质谱测定了去N糖前后抗体的精确分子量,并通过计算N糖含量得出其完整分子量为148285.0~149020.8,完整去糖后分子量为145810.4,N糖含量为1.67%~2.15%。优化了全柱成像实时等电聚焦毛细管电泳(WCID-cIEF)检测方法,结果显示该抗体等电点分布在8.21~8.74之间,其中主成分等电点为8.61,相对含量为61.43%。继而使用离子交换色谱检测了电荷异质性,发现碱性峰含量为4.1%,酸性峰含量为23.9%,主峰含量为72.0%,与WCID-cIEF结果吻合,并证明了方法间良好的重现性。通过切糖前后的肽图分析,获得糖肽分布信息,识别出糖修饰位点及重轻链的互补决定区(CDR),甲硫氨酸(M)的氧化位点及氧化率,并通过抗体还原前后的肽图解析出二硫键连接。研究结果同时提示该抗体对照品无C末端糖化修饰现象。; 关键词抗体对照品分子量等电点电荷异质性肽图; Keywords reference antibody molecular weight isoelectric point (pI ) charge heterogeneity peptide mapping; 分类号 O657 [理学—分析化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名MALDI-TOF质谱准内标法及其用于rhTPO复杂糖一致性研究被引量：2: 5; 作者刘悦玫侯利平杨梅孟晓光魏开华; 机构安徽医科大学研究生院军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质药物国家工程研究中心; 出处《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1458-1463,共6页; 基金国家高技术研究发展计划863项目(2014AA020906) 国家科技部重大仪器专项(2012YQ18011710) 蛋白质组学国家重点实验室课题(SKLP-O201412); 文摘采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)准内标法准确测定重组人血小板生成素(rhTPO)仿制药和原研药中4类糖修饰的相对含量,并进行样本间和批间一致性比较。结合多种切糖酶逐步切除rhTPO的N-糖、唾液酸和O-糖;以牛血清白蛋白(BSA)为标准品,与样本非混合点靶;采用MALDI-TOF质谱准内标法检测,分别获得各样本完整含糖分子量及不同层次切糖后分子量;通过分子量差值计算4类糖修饰的相对含量;最后比较仿制药与原研药样本间和批间一致性。以BSA多电荷峰对rhTPO切糖前后的MALDI-TOF质谱测定值进行准内标法校正,BSA多电荷峰之间相对标准偏差(RSD)均≤0.075%,批间RSD为0.001%~0.004%,方法误差均<0.01%。rhTPO仿制药N-糖、O-糖唾液酸、O-糖和糖化糖的相对含量分别约为24.6%、2.9%、9.0%和5.1%,批间一致性良好,且总糖含量与文献值一致;rhTPO原研药N-糖、O-糖唾液酸、O-糖和糖化糖的相对含量分别约为25.6%、2.9%、7.9%和3.5%,总糖含量较文献值偏低。与rhTPO原研药相比,仿制药糖基化糖相对含量基本一致,糖化糖含量有差异。rhTPO糖化糖研究未见文献报道,其差异是不同厂家rhTPO之间差异的重要因素,主要由发酵工艺差异导致。; 关键词重组人血小板生成素(rhTPO) 基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 准内标法糖含量糖化; Keywords recombinant human thrombopoietin （rhTPO） matrix assisted laser desorption ionizationtime of flight mass spectrometry（ MALDI- TOF MS） quasi-internal calibration glycan contents gly-cation; 分类号 O657.63 [理学—分析化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性	孟晓光甄里刘悦玫侯利平刘丹李斌欧阳伟民魏开华	《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心	2017	9	在线阅读下载PDF 职称材料
2	联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原	侯利平傅海媛陶亚岚黄亚娟孙云波宋纯艳夏云飞杨保安韩治国肖汉族郑俊杰甄蓓魏开华	《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用	宋纯艳张拓侯利平原剑黄亚娟韩治国刘曙晨甄蓓魏开华	《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析	崔新玲胡志上孟晓光钱小红朱涛应万涛	《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	MALDI-TOF质谱准内标法及其用于rhTPO复杂糖一致性研究	刘悦玫侯利平杨梅孟晓光魏开华	《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心	2017	2	在线阅读下载PDF 职称材料