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多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征 被引量:8
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作者 高斌 肖白 +10 位作者 邹起练 黄尚志 王立荣 钮淑兰 闫梅 雷箴 贾兴元 王战勇 袁海昕 吴燕 刘敬忠 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期934-938,共5页
为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同... 为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3~300ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30ng/μL时,变异系数最小(<10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90~-1.30,患者的△CT值范围是-2.95~-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的。因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。 展开更多
关键词 唐氏综合征 荧光定量PCR 相对定量 △CT值 永生细胞系
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高质量提取大豆叶片总RNA的改良方法 被引量:8
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作者 姚滢秋 陈星 +3 位作者 王璞 梁燕 闫梅 肖白 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第1期133-135,共3页
豆科植物总RNA的提取相对比较困难,大豆叶片富含多糖、蛋白质,传统方法提取效果均不理想。在总RNA的提取方法Trizol法和热酚-氯化锂沉淀法的基础上,针对大豆叶片的特殊性,做了适当的改良,从而获得了完整性好,高纯度的大豆叶片总RNA,并... 豆科植物总RNA的提取相对比较困难,大豆叶片富含多糖、蛋白质,传统方法提取效果均不理想。在总RNA的提取方法Trizol法和热酚-氯化锂沉淀法的基础上,针对大豆叶片的特殊性,做了适当的改良,从而获得了完整性好,高纯度的大豆叶片总RNA,并成功进行了基因片段的RT-PCR实验,结果证实所获得的RNA完全可以适应后续实验要求。 展开更多
关键词 大豆 RNA 提取方法
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半定量PCR检测致龋性变形链球菌技术及应用 被引量:3
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作者 肖白 王建秋 +1 位作者 刘敬忠 李昌义 《中国感染控制杂志》 CAS 2002年第1期8-11,共4页
目的 创建一种临床半定量检测致龋性变形链球菌的分子生物学方法。方法 采用靶基因与参照基因同步扩增法 ,根据变形链球菌葡聚糖酶 (dexA)基因序列 ,作者设计一对特异性引物 ,以 pET2 3b质粒DNA为参照基因。对 196名儿童的唾液样品进... 目的 创建一种临床半定量检测致龋性变形链球菌的分子生物学方法。方法 采用靶基因与参照基因同步扩增法 ,根据变形链球菌葡聚糖酶 (dexA)基因序列 ,作者设计一对特异性引物 ,以 pET2 3b质粒DNA为参照基因。对 196名儿童的唾液样品进行半定量PCR检测并进行常规培养法的对比研究。结果  196份唾液样品半定量PCR检测致龋性变形链球菌≥ 10 5CFU/ml唾液的检出率为 91.3%。与常规培养计量法的对比符合率为94 .9%。结论 变形链球菌PCR半定量检测是一种早期发现龋病活性的新方法 ,具有快速可靠 ,特异性强 ,符合率高等特点 。 展开更多
关键词 半定量PCR 变形链球菌 龋齿
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肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白Ⅰ相关激酶TNN13K基因突变的研究 被引量:2
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作者 王红梅 高明明 +4 位作者 肖白 刘敬忠 周燕 杨新春 王明生 《中国心血管杂志》 2009年第1期59-61,共3页
目的对肥厚型心肌病患者进行TNNI3K基因进行测序分析,探讨此范围内有无基因突变位点。方法对56例无血缘关系的肥厚型心肌病患者及30名健康对照者的TNNI3K基因第18~19及23外显子进行聚合酶链反应扩增产物,设计内引物直接测序,观察有无... 目的对肥厚型心肌病患者进行TNNI3K基因进行测序分析,探讨此范围内有无基因突变位点。方法对56例无血缘关系的肥厚型心肌病患者及30名健康对照者的TNNI3K基因第18~19及23外显子进行聚合酶链反应扩增产物,设计内引物直接测序,观察有无基因突变,并对发生突变的患者进行临床特点分析。结果肥厚型心肌病患者及正常对照者在TNNI3K基因第18~19及23外显子未发现突变位点。结论目前在中国人群肥厚型心肌病患者中未发现TNNI3K基因突变位点。 展开更多
关键词 心肌病 肥厚型 肌钙蛋白I 基因
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中国人细胞色素P4501A1基因外显子7的多态性分析 被引量:1
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作者 张利群 褚金花 +2 位作者 周艳 朱章菱 邓一夫 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第4期323-325,共3页
为探讨中国人与吸烟致癌力有关的细胞色素P4 5 0 1A1 (cytochromeP4 5 0 1A1 ,CYP1A1 )基因催化部位 (外显子 7)的多态性分布情况 ,分析了 4 5 8例中国人CYP1A1基因外显子 7的多态性分布频率。结果显示这种多态性在男女之间没有显著差异... 为探讨中国人与吸烟致癌力有关的细胞色素P4 5 0 1A1 (cytochromeP4 5 0 1A1 ,CYP1A1 )基因催化部位 (外显子 7)的多态性分布情况 ,分析了 4 5 8例中国人CYP1A1基因外显子 7的多态性分布频率。结果显示这种多态性在男女之间没有显著差异 ,4 5 8例中国人该基因不同类型的比例分别为Ile/Ile 61 .6%、Ile/Val 2 6.4 %、Val/Val 1 2 .0 % ,其中Val/Val基因型所占的比例显著高于日本人、白种人或非洲 展开更多
关键词 CYP1A1 基因多态性 中国人 肺癌 易感性
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从基因工程乳酸菌中高效提取苯丙氨酸解氨酶的方法研究
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作者 陈星 王璞 +1 位作者 姚滢秋 肖白 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期132-134,138,共4页
为从高表达苯丙氨酸解氨酶(PAL)的基因工程乳酸乳球菌NZ3900/pNZ8149-palart中有效提取所表达的PAL酶,针对乳酸乳球菌的特点,结合各种物理、化学、生物学等方法,探索出一条简便、高效的技术路线。对提取物进行了酶活性测定、分析及细菌... 为从高表达苯丙氨酸解氨酶(PAL)的基因工程乳酸乳球菌NZ3900/pNZ8149-palart中有效提取所表达的PAL酶,针对乳酸乳球菌的特点,结合各种物理、化学、生物学等方法,探索出一条简便、高效的技术路线。对提取物进行了酶活性测定、分析及细菌活性鉴定。结果表明,该混合法可以完全导致细菌死亡,所提取的酶蛋白结构完整,其酶活性达到了等量活菌的92.5%,且该方法中所用到的各种试剂对体外培养细胞的生长无明显影响,为PAL酶在科研及生物医药领域的应用提供了可靠来源。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 苯禹氨酸解氨酶 提取
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