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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析被引量：5: 1; 作者张永富韩春华 +12 位作者林健刘月焕韦海涛祝俊杰赵景义李栋梁马国文布日额李明刚张婷刘永宏马明张秋雨《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第10期4439-4442,4445,共5页; [目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在最适条件下诱导表达,其... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基因表达纯化免疫学活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析被引量：3: 2; 作者张永富马国文 +4 位作者刘月焕刘永宏李明刚张秋雨刘锋《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第12期25-27,30,共4页; 根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计合成一对引物,应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因(N基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF7重组质粒转化DH5a宿主菌... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基N 原核表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽流感病毒A/duck/Fujian/31/2007(H5N1)株M1基质蛋白的原核表达与免疫原性鉴定被引量：1: 3; 作者布日额吴金花 +3 位作者孙立杰李明刚刘洋薛晓阳《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期46-49,共4页; 经生物学软件DNAStar分析,参照已发表的禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)(H5N1)基因组序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约750bp的M1基因片段,将目的片段定向克隆至pET30a表达载体,经酶切及测序鉴定正确后转化BL21表达菌... 展开更多; 关键词 H5N1亚型流感病毒 M1蛋白原核表达免疫原性; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽流感病毒株A/duck/Fujian/31/2007(H5N1)株M1基因的克隆及序列分析被引量：1: 4; 作者布日额任晓峰 +2 位作者李明刚吴金花孙立杰《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期27-30,共4页; 参照GenBank公布的禽流感病毒基质蛋白M1基因序列,设计合成了1对特异性引物,采用RT-PCR法成功扩增并克隆了禽流感病毒M1基因。序列测定结果为M1基因cDNA全长759bp,编码252个氨基酸。将其序列与数株甲型流感病毒M1基因序列进行比较,M1基... 展开更多; 关键词禽流感病毒 M1基因克隆序列分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究: 5; 作者刘永宏刘月焕 +7 位作者王凤龙韩春华林健王金玲杨龙峰赵丽张秋雨张永富《中国动物检疫》 CAS 2009年第7期29-32,共4页; 根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PC... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 ORF6基因克隆原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析被引量：5: 1; 作者张永富韩春华林健刘月焕韦海涛祝俊杰赵景义李栋梁马国文布日额李明刚张婷刘永宏马明张秋雨; 机构内蒙古民族大学动物科技学院北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京市畜牧兽医总站内蒙古民族大学生命科学学院北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司内蒙古农业大学动物科学与医学学院中国农业大学动物医学院; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第10期4439-4442,4445,共5页; 基金北京市农林科学院青年基金项目(2007020122) 北京市科委猪高致病性蓝耳病防控技术子课题; 文摘 [目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。[结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基因表达纯化免疫学活性; Keywords Porcine reproductive and respiratory syndrome virus ORF7 gene Expression Purification Immun ological activity; 分类号 S828 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析被引量：3: 2; 作者张永富马国文刘月焕刘永宏李明刚张秋雨刘锋; 机构内蒙古民族大学动物科技学院北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司内蒙古农业大学动物科学与医学学院; 出处《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第12期25-27,30,共4页; 文摘根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计合成一对引物,应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因(N基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF7重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF7基因序列进行分析。结果表明,ORF7基因的原核表达载体构建成功。ORF7基因序列与美洲型的ORF7基因核苷酸同源性为92.8%～99.7%,与LV株的相应基因核苷酸同源性为65.3%;推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为92.0%～99.2%,与LV株的同源性为65.3%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。本研究为N蛋白的进一步研究和制备诊断性抗原奠定了基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基N 原核表达载体; Keywords porcine reproductive and respiratory syndrome virus ORF7 gene prokaryotic expression vector; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽流感病毒A/duck/Fujian/31/2007(H5N1)株M1基质蛋白的原核表达与免疫原性鉴定被引量：1: 3; 作者布日额吴金花孙立杰李明刚刘洋薛晓阳; 机构内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期46-49,共4页; 基金内蒙古自治区自然科学基金项目(2009MS1113); 文摘经生物学软件DNAStar分析,参照已发表的禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)(H5N1)基因组序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约750bp的M1基因片段,将目的片段定向克隆至pET30a表达载体,经酶切及测序鉴定正确后转化BL21表达菌,经IPTG诱导获得以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,BCA法测定纯化蛋白的浓度为0.656mg/mL,免疫印迹检测结果表明,纯化的重组蛋白具有良好的反应活性。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测结果表明,重组蛋白可产生抗M1蛋白特异性抗体,具有良好的免疫原性。本研究成功表达了流感病毒H5N1的基质蛋白M1,且重组蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研制H5N1亚型流感病毒诊断试剂及基因工程疫苗奠定基础。; 关键词 H5N1亚型流感病毒 M1蛋白原核表达免疫原性; Keywords HSN1 influenza virus matrix protein M1 prokaryotic expression immunogenicity; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽流感病毒株A/duck/Fujian/31/2007(H5N1)株M1基因的克隆及序列分析被引量：1: 4; 作者布日额任晓峰李明刚吴金花孙立杰; 机构内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所东北农业大学动物医学院北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期27-30,共4页; 基金内蒙古自治区自然科学基金项目(2009MS1113); 文摘参照GenBank公布的禽流感病毒基质蛋白M1基因序列,设计合成了1对特异性引物,采用RT-PCR法成功扩增并克隆了禽流感病毒M1基因。序列测定结果为M1基因cDNA全长759bp,编码252个氨基酸。将其序列与数株甲型流感病毒M1基因序列进行比较,M1基因核苷酸同源性为99.1%～99.6%,推导氨基酸同源性为98.8%～99.6%,生物信息学分析表明,M1基因编码的蛋白质具有亲水性,有很强的抗原性,M1蛋白共有6个潜在的N-糖基化位点,可能存在3个蛋白激酶C磷酸化位点,存在2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。; 关键词禽流感病毒 M1基因克隆序列分析; Keywords avian influenza virus M1 gene eloning sequence analysis; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究: 5; 作者刘永宏刘月焕王凤龙韩春华林健王金玲杨龙峰赵丽张秋雨张永富; 机构内蒙古农业大学动物科学与医学学院北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京市延庆县动物卫生监督管理局北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司内蒙古民族大学动物科技学院; 出处《中国动物检疫》 CAS 2009年第7期29-32,共4页; 基金北京市农林科学院青年基金项目(2007020122) 北京市科委猪高致病性蓝耳病防控技术子课题; 文摘根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%～100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET-ORF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 ORF6基因克隆原核表达; Keywords Porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV）： Variant ORF6 gene Cloning and prokaryotic expression; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析	张永富韩春华林健刘月焕韦海涛祝俊杰赵景义李栋梁马国文布日额李明刚张婷刘永宏马明张秋雨	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2009	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析	张永富马国文刘月焕刘永宏李明刚张秋雨刘锋	《中国动物检疫》 CAS 北大核心	2008	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	禽流感病毒A/duck/Fujian/31/2007(H5N1)株M1基质蛋白的原核表达与免疫原性鉴定	布日额吴金花孙立杰李明刚刘洋薛晓阳	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	禽流感病毒株A/duck/Fujian/31/2007(H5N1)株M1基因的克隆及序列分析	布日额任晓峰李明刚吴金花孙立杰	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究	刘永宏刘月焕王凤龙韩春华林健王金玲杨龙峰赵丽张秋雨张永富	《中国动物检疫》 CAS	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料