-
题名Bam HI DNA甲基化酶酶学性质的研究
被引量：1
- 1
-
-
作者
薛继艳
何忠效
-
机构
北京师范大学生物系
-
出处
《生物化学杂志》
CSCD
1991年第1期13-20,共8页
-
基金
国家自然科学基金(高技术)资助项目,项目号:0388011
-
文摘
以Lineweave-Burk plot双倒数作图法测得该酶对底物S-腺苷酰甲硫氨酸(SAM)的K_m=7.69×10^(-6)mol/L,在1mmol/LS-腺苷酰高半胱氨酸(SAH)存在下,Ki=7.33×10^(-4)mol/L,两条直线相交于纵轴,证明SAH是该酶的竞争性抑制剂。该酶最适pH为7.8,对热不稳定。同时还测定了该酶对不同DNA底物的专一性及盐浓度、代谢相关物’两价阳离子、某些酸根等对该酶调节性质的影响。以碘代乙酰胺修饰该酶的SH基’及用二硫苏糖醇(DTT)和巯基乙醇(MSH)保护该酶SH基所作的实验表明SH基是该酶活性中心所必需的,用高效液相色谱(HPLC)法证明该酶所甲基化的碱基为刘氏小球菌(M·L、DNA)分子中的胞嘧啶,且求得甲基化30min后所得甲基化水平为2.39％。同时也证明当用该酶将λDNA甲基化后,可使BamHI限制性核酸内切酶对甲基化后的λDNA丧失切割作用。
-
关键词
米氏常数
抑制剂常数
限制一修饰系统
DNA甲基化水平
-
Keywords
Michaelis Constant(K_(m))
Inhibitor Constant(K_(1))
Restriction-Modification System
DNA Methylation Level
-
分类号
Q550.2
[生物学—生物化学]
-
-
题名BamHI DNA甲基化酶的提纯及物理化学性质
被引量：1
- 2
-
-
作者
薛继艳
何忠效
-
机构
北师大生化专业
北京师范大学生物系中国科学院生物大分子国家重点实验室
-
出处
《生物化学杂志》
CSCD
1990年第6期511-516,共6页
-
基金
国家自然科学基金(高技术)资助项目。项目号:0388011~~
-
文摘
通过硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析,磷酸纤维素亲和层析及SephadexG-100凝胶过滤法,从噬淀粉芽孢杆菌HI(Bacillus amyloliguefaciens HI)提纯了DNA甲基化酶。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,已达电泳均一,比活力提高了326倍。并用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和Sephadex G-100凝胶过滤法测得其天然酶的分子量为273000,又用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它的亚基分子量为34500,故该酶有8个分子量相同的亚基。用凝胶电聚焦法测得其pI_(22 c)=9.0。
-
关键词
DNA甲基化酶
提纯
理化性质
-
Keywords
Chromatography, Electrophoresis, Molecular Weight, Isoelectric Point (pI), Subunit
-
分类号
Q55
[生物学—生物化学]
-
