北京鸭胆囊上皮细胞结构功能研究

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作者 王琳 张汤杰 +1 位作者 刘玉芝 崔宗杰 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期623-626,共4页

从北京鸭分离胆囊上皮细胞,用MitoTracker Red定位上皮细胞胞浆的线粒体分布.发现在保留极性和失去极性的上皮细胞中,线粒体在胞浆中均匀分布.用乙酰胆碱(ACh)刺激分离得到的单个胆囊上皮细胞,以Fura-2-AM显微荧光测定胞浆中钙离子浓度... 从北京鸭分离胆囊上皮细胞,用MitoTracker Red定位上皮细胞胞浆的线粒体分布.发现在保留极性和失去极性的上皮细胞中,线粒体在胞浆中均匀分布.用乙酰胆碱(ACh)刺激分离得到的单个胆囊上皮细胞,以Fura-2-AM显微荧光测定胞浆中钙离子浓度的变化,发现ACh(10～20 μmol·L-1)可引起胞浆钙离子浓度的明显变化. 展开更多

关键词 乙酰胆碱 胞浆钙离子浓度 线粒体 胆囊卜皮细胞

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新鲜分离的北京鸭胰腺腺泡细胞中的功能性受体 被引量：1

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作者 郭丽丽 崔宗杰 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期524-527,共4页

对新鲜分离的北京鸭胰腺腺泡，用胆囊收缩素八肽（ＣＣＫ—８）、乌拉胆碱（Ｂｅｔｈ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）进行刺激，检测淀粉酶的分泌．发现ＣＣＫ－８，Ｂｅｔｈ可剂量依赖性地刺激淀粉酶的分泌，而ＶＩＰ对分泌没有刺激作用．... 对新鲜分离的北京鸭胰腺腺泡，用胆囊收缩素八肽（ＣＣＫ—８）、乌拉胆碱（Ｂｅｔｈ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）进行刺激，检测淀粉酶的分泌．发现ＣＣＫ－８，Ｂｅｔｈ可剂量依赖性地刺激淀粉酶的分泌，而ＶＩＰ对分泌没有刺激作用．ＣＣＫ—８对分泌刺激作用的量效曲线呈“钟罩”型．由此可见，在新鲜分离的北京鸭胰腺腺泡细胞中存在ＣＣＫ受体和胆碱能受体，不存在功能性ＶＩＰ，受体． 展开更多

关键词 北京鸭 功能性受体 VIP受体 检测 胰腺腺胞细胞

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cdk2反义RNA对乳腺癌细胞增殖及致瘤性的抑制作用　 被引量：4

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作者 桑建利 边昕 王永潮 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期546-551,共6页

为了研究 ｃｄｋ２对乳腺癌细胞生长及ｃｙｃｌｉｎＡ， ｃｙｃｌｉｎＢ１和ｃｄｋ１（ｃｄｃ２）ｍＲＮＡ表达水平的影响，利用真核表达载体ｐＸＪ４１－ｎｅｏ构建了表达ｃｄｋ２反义ＲＮＡ的重组载体，并用此载体转染了人乳腺癌细胞... 为了研究 ｃｄｋ２对乳腺癌细胞生长及ｃｙｃｌｉｎＡ， ｃｙｃｌｉｎＢ１和ｃｄｋ１（ｃｄｃ２）ｍＲＮＡ表达水平的影响，利用真核表达载体ｐＸＪ４１－ｎｅｏ构建了表达ｃｄｋ２反义ＲＮＡ的重组载体，并用此载体转染了人乳腺癌细胞系Ｂｃａｐ３７，获得了ｃｄｋ２表达受到抑制的细胞模型Ｂｃａｐ３７－ＣＤＫ２ＡＳ，然后将Ｂｃａｐ３７－ＣＤＫ２ＡＳ细胞的生长能力及ｃｙｃｌｉｎＡ， ｃｙｃｌｉｎＢ１和 ｃｄｋ１ ｍＲＮＡ的水平与转入空载体的对照细胞进行了对比分析．结果显示ｃｄｋ２表达受到抑制时，细胞生长速率下降，根据测定出的细胞生长曲线，细胞培养至第７天时，细胞生长抑制率为６４％．在流式细胞术的分析结果中，Ｇ１期细胞占的百分比从３９％增加到４７％，Ｓ期细胞由５１％下降到３９％．棵鼠接种的实验表明，Ｂｃａｐ３７－ＣＤＫ２ＡＳ的致瘤性明显减弱．在对ｃｙｃｌｉｎＡ， ｃｙｃｌｉｎＢ１和ｃｄｋ１ ｍＲＮＡ的分析中发现， Ｂｃａｐ３７－ＣＤＫ２ＡＳ中这３种基因的ｍＲＮＡ水平均有不同程度的下降，依据这些结果可以推测，ｃｄｋ２反义ＲＮＡ可使乳腺癌细胞生长及致瘤性受到抑制，并且ｃｄｋ２表达的抑制将影响ｃｙｃｌｉｎＡ，ｃｙｃｌｉｎＢ和ｃｄｋ１的表达水平． 展开更多

关键词 cdk2反义RNA 乳腺癌 细胞增殖 抑制作用 致瘤性

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中心体异常在咖啡因增强顺铂杀伤人肝癌细胞系中的作用 被引量：1

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作者 齐建国 桑建利 +2 位作者 林海燕 陈晓波 王永潮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期675-680,共6页

为了探讨咖啡因是否影响细胞周期检验点而增强顺铂杀伤肿瘤细胞及其作用机制 ,选取同步化于S期的肝癌细胞系SMMC 772 1,用顺铂和咖啡因进行不同方式的处理 ,包括顺铂处理、咖啡因处理以及先经顺铂 ,再用咖啡因处理 .利用相关方法对不同... 为了探讨咖啡因是否影响细胞周期检验点而增强顺铂杀伤肿瘤细胞及其作用机制 ,选取同步化于S期的肝癌细胞系SMMC 772 1,用顺铂和咖啡因进行不同方式的处理 ,包括顺铂处理、咖啡因处理以及先经顺铂 ,再用咖啡因处理 .利用相关方法对不同处理的细胞进行了分析 ,包括细胞形态 ,细胞生长速率 ,多核细胞的形成与死亡 ,中心体的异常等 .结果显示 ,顺铂与咖啡因联合处理的细胞出现明显的多核化现象 ,多核细胞占总细胞的百分比可以达到 30 %以上 ,高于用顺铂或用咖啡因处理的细胞 .同时观察到多核细胞生存能力较差 ,它们会通过细胞凋亡的形式死亡 .抗中心体人自身免疫血清的免疫荧光结果显示 ,中心体异常与多核细胞的形成直接相关 .在部分多核细胞的核周围有多个不同强度的荧光点 ,在另部分多核细胞中 ,在其中央有一个大的荧光点 ,被多个细胞核围绕 ,荧光较强 .根据结果推测 ,由多个不完整的中心体导致的多极分裂形成多核细胞 ,随后多个中心体聚集到中央形成大的中心体 ,负责间期微管的组装 .结果表明 ,受到顺铂损伤的细胞由于检验点的作用而使细胞周期阻断 ,咖啡因可消除周期的阻断 ,使细胞在中心体未完成正常复制状态下进入有丝分裂 ,产生大量多核细胞 ,这些多核细胞最终发生凋亡 . 展开更多

关键词 中心体 顺铂 咖啡因 多核细胞

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反义细胞周期蛋白E真核表达载体的构建及其对体外人乳腺癌细胞的抑制作用 被引量：3

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作者 桑建利 边昕 王永潮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期165-168,共4页

为了探讨细胞周期蛋白 E(cyclin E)与人乳腺癌细胞恶性特征间的相关性 ,利用反义 RNA抑制基因表达的技术 ,构建了细胞周期蛋白 E反义 RNA的真核表达载体并转入人乳腺癌细胞中 .通过 G41 8筛选出阳性克隆 ,经 PCR和 Western印迹检测 ,确... 为了探讨细胞周期蛋白 E(cyclin E)与人乳腺癌细胞恶性特征间的相关性 ,利用反义 RNA抑制基因表达的技术 ,构建了细胞周期蛋白 E反义 RNA的真核表达载体并转入人乳腺癌细胞中 .通过 G41 8筛选出阳性克隆 ,经 PCR和 Western印迹检测 ,确定细胞中含有重组质粒 ,并且细胞周期蛋白 E蛋白的水平明显降低 ,由此获得了反义 RNA表达载体导致的细胞周期蛋白 E表达受抑制的细胞 .细胞模型建立后 ,观察分析了细胞形态 ,细胞生长的血清依赖性以及软琼脂成集落能力 ,与对照细胞相比所发生的变化 .结果显示 ,细胞周期蛋白 E受抑制后 ,乳腺癌细胞体积变大 ,细胞生长对血清依赖性增加 ,低血清培养到第 6d时 ,细胞密度约为对照细胞的五分之一 ,细胞成集落能力也显著下降 ,软琼脂中克隆形成率下降 57% .这些变化都表明乳腺癌细胞恶性程度由于细胞周期蛋白 E表达受抑制而减弱 ,可以推测 cyclin E与乳腺癌细胞的恶性增殖及非锚定依赖性生长有着明显的关系 . 展开更多

关键词 细胞周期蛋白E 反义RNA 乳腺癌细胞 抑制作用 表达载体

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分离大鼠大脑皮质神经元长时程单细胞内Ca^(2+)的测定

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作者 刘晓红 吕国蔚 崔宗杰 《首都医科大学学报》 CAS 2001年第4期303-303,共1页

关键词 大脑 皮质神经元 单个细胞 钙浓度测定 大鼠

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鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体的构建研究

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作者 李佳慧 李铁 桑建利 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第S1期62-63,共2页

Presenilin1(PS1)的突变是早发家族性老年痴呆发生的重要因素之一。目前对于PS1结构和功能的研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性的蛋白酶,很可能参与众多的细胞信号传导通路,影响细胞分化和调亡、组织及个体的发育等... Presenilin1(PS1)的突变是早发家族性老年痴呆发生的重要因素之一。目前对于PS1结构和功能的研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性的蛋白酶,很可能参与众多的细胞信号传导通路,影响细胞分化和调亡、组织及个体的发育等等。但对于PS1的精细结构和功能目前了解甚少,为探讨PS1的精细结构和功能,本研究构建了鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体。方法:我们设计了扩增PS1的cDNA全长的引物,以C57BL/6小鼠9天胚的RNA为模板,利用RT-PCR的方法从C57BL/6小鼠9天胚中获得PS1的cDNA,经测序确认后,将其克隆到pMD18-TVector中。设计引物:上游5’-GCCGAATTCTATGACAGAGATACCTGCACC-3’;下游5’-GAAGGATCCGATATAAAACTGATGGAATGC-3’,上游含有EcoRI酶切位点,下游含有BamHI酶切位点。利用高保真DNA聚合酶通过PCR方法将pMD18-T-PS1质粒中的PS1基因亚克隆到pEGFP-C1载体中,获得pEGFP-C1-PS1融合蛋白表达载体,然后利用EcoRI和BamHI从pEGFP-C1-PS1融合蛋白中切下PS1基因,从pMD18-T-PS1质粒中切下载体部分,经过连接,获得中间载体,利用该重组载体中的EcoRI和SalI酶切位点,酶切连接入pEGFP-N2载体中,获得pEGFP-N2-PS1融合蛋白表达载体,经测序鉴定后备用。 展开更多

关键词 PS1基因 绿色荧光蛋白 融合蛋白 小鼠

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中心体蛋白centrin研究进展 被引量：3

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作者 陈娴 唐永政 王永潮 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期240-242,共3页

Centrin是普遍存在于中心体上的蛋白成分 ,具有钙离子结合能力。Centrin家族包含多种同源蛋白 ,这些蛋白在结构上高度保守。研究表明centrin可能与细胞的分化 ,纤毛的生成定向和切断 ,精子尾部的生成 ,中心体复制及其结构维持有密切关... Centrin是普遍存在于中心体上的蛋白成分 ,具有钙离子结合能力。Centrin家族包含多种同源蛋白 ,这些蛋白在结构上高度保守。研究表明centrin可能与细胞的分化 ,纤毛的生成定向和切断 ,精子尾部的生成 ,中心体复制及其结构维持有密切关系 ,同时也和细胞的癌变、生长及细胞周期调控有关 。 展开更多

关键词 中心体蛋白 CENTRIN 中心体 纤毛 细胞周期 癌变

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CyclinE反义RNA抑制乳腺癌细胞增殖及p21^(waf1)转录水平 被引量：1

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作者 边昕 桑建利 +1 位作者 彭安 王永潮 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期691-694,共4页

利用反义RNA抑制基因表达的技术 ,发现cyclinE基因在表达受到抑制后 ,乳腺癌细胞增殖速率和致瘤性明显下降 ,结果还表明cyclinE基因的抑制 ,可使p2 1waf1的转录水平上升 ,由此说明cyclinE的异常与乳腺癌的发生有着密切的关系 ,在细胞周... 利用反义RNA抑制基因表达的技术 ,发现cyclinE基因在表达受到抑制后 ,乳腺癌细胞增殖速率和致瘤性明显下降 ,结果还表明cyclinE基因的抑制 ,可使p2 1waf1的转录水平上升 ,由此说明cyclinE的异常与乳腺癌的发生有着密切的关系 ,在细胞周期调控上 p2 1waf1的转录受到cyclinE表达水平的明显影响 . 展开更多

关键词 乳腺癌细胞 细胞周期 RNA抑制基因 转录

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利用Calcium Orange测定Harderian腺细胞中的钙离子浓度

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作者 周衍东 刘玉芝 崔宗杰 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期675-679,共5页

探讨了CalciumOrange作为Harderian腺细胞胞浆Ca2 + 荧光指示探针的可能性 .发现选用 5 5 9nm作为激发光波长时 ,CalciumOrange有较强的吸收 ,而Harderian腺细胞 (含大量卟啉 )在此波长没有吸收 .利用CalciumOrange作为指示剂可以避免... 探讨了CalciumOrange作为Harderian腺细胞胞浆Ca2 + 荧光指示探针的可能性 .发现选用 5 5 9nm作为激发光波长时 ,CalciumOrange有较强的吸收 ,而Harderian腺细胞 (含大量卟啉 )在此波长没有吸收 .利用CalciumOrange作为指示剂可以避免紫外光所引发的原卟啉介导的光动力作用 .在CalciumOrange加载的Harderian腺细胞 ,Ionomycin引起荧光强度的增加 ,而用TritonX 10 0破裂细胞后加入钙离子螯合剂EGTA ,可使CalciumOrange荧光降到低于加入Ionomycin前的强度 .说明用 5 5 9nm为激发光波长 ,CalciumOrange可以用于Harderian腺细胞胞浆Ca2 + 的测定 . 展开更多

关键词 Harderian腺细胞 原卟啉Ⅸ CalciumOrange FURA-2 光动力作用 钙离子浓度 眼球

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除草剂乙草胺抑制大鼠肝脏细胞肾上腺素能受体所介导的胞浆钙振荡(英文)

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作者 刘方圆 张彬彬 崔宗杰 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期43-55,共13页

田间除草剂乙草胺施用之后非常容易进入地表水和地下水,河流溪水中乙草胺浓度可达纳摩尔水平,从而对水生生物产生长期影响.因职业关系而产生的皮肤暴露和吸入,可导致人血液乙草胺浓度达到微摩尔水平.对乙草胺体内动力学的研究,发现肝脏... 田间除草剂乙草胺施用之后非常容易进入地表水和地下水,河流溪水中乙草胺浓度可达纳摩尔水平,从而对水生生物产生长期影响.因职业关系而产生的皮肤暴露和吸入,可导致人血液乙草胺浓度达到微摩尔水平.对乙草胺体内动力学的研究,发现肝脏是乙草胺毒理作用的主要靶器官.已知在肝脏细胞多种生理功能中,钙离子发挥重要作用.本文研究在新鲜分离的大鼠肝脏细胞,乙草胺对肾上腺素能受体所介导胞浆钙振荡的可能影响.实验发现低浓度乙草胺(1、10μmol·L^(-1))对苯丙肾上腺素所诱导钙振荡没有影响,但是高浓度(50、100、200μmol·L^(-1))乙草胺在有些肝脏细胞可逆性抑制苯丙肾上腺素所诱导的胞浆钙振荡.在苯丙肾上腺素2次串联刺激之间短暂加入乙草胺(1、10、100μmol·L^(-1)),乙草胺对肝脏细胞基础钙浓度没有影响,也不影响第2次苯丙肾上腺素刺激所引发胞浆钙振荡.细胞免疫化学研究发现在新鲜分离的大鼠肝脏不同细胞,α1肾上腺素能受体密度存在明显差异.对固定的大鼠肝脏切片进行组织免疫化学检测,发现α1肾上腺素能受体在肝脏小叶的密度梯度分布:α1肾上腺素能受体密度从中央静脉方向到门脉方向从低到高逐渐增加.这种α1肾上腺素能受体的密度梯度分布,可能是乙草胺选择性抑制苯丙肾上腺素刺激分离大鼠肝脏细胞所诱发钙振荡的原因.本文数据揭示,在急性皮肤暴露或乙草胺中毒后可达到的血液浓度,短期施加乙草胺,可一过性抑制肝脏α1肾上腺素能受体所介导的胞浆钙振荡.长期乙草胺暴露,可能对肝脏细胞正常钙信号系统产生持续性不良影响. 展开更多

关键词 乙草胺 肾上腺素能受体 钙振荡 肝脏细胞

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大鼠Harderian腺中卟啉的释放机理 被引量：1

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作者 崔宗杰 王南 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期528-531,共4页

大鼠Ｈａｒｄｅｒｉａｎ腺存在大量叶琳类物质．分离细胞抽提物的荧光激发、发射光谱与标准原叶琳Ⅸ几乎完全重叠，说明大部分叶琳是原叶咐ｆｆ．荧光显微镜下分离的细胞发出很强的红色荧光，在分泌颗粒间隙荧光较分泌颗粒处更强．胆囊... 大鼠Ｈａｒｄｅｒｉａｎ腺存在大量叶琳类物质．分离细胞抽提物的荧光激发、发射光谱与标准原叶琳Ⅸ几乎完全重叠，说明大部分叶琳是原叶咐ｆｆ．荧光显微镜下分离的细胞发出很强的红色荧光，在分泌颗粒间隙荧光较分泌颗粒处更强．胆囊收缩素８肽（ＣＣＫ—８）、乌拉胆碱（Ｂｅｔｈ）皆不能刺激叶琳向胞外的释放．这些结果说明，Ｈａｒｄｅｒｉａｎ腺细胞向胞外释放叶琳不是通过胞吐进行的． 展开更多

关键词 Harderian腺 胆碱能受体 卟啉 释放机理 CCK-8

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“嘎嘣脆”受体--可被单线态氧分子永久激活的G蛋白偶联受体

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作者 崔宗杰 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-8,共8页

光敏剂磺酸化铝络酞菁(SALPC)光动力作用所产生的单线态氧分子(1O2),永久性激活分离大鼠胰腺腺泡细胞内源性的和在HEK293细胞异源表达的胆囊收缩素1型受体(cholecystokinin type 1 receptor, CCK1R).基因编码的蛋白质光敏剂(genetically... 光敏剂磺酸化铝络酞菁(SALPC)光动力作用所产生的单线态氧分子(1O2),永久性激活分离大鼠胰腺腺泡细胞内源性的和在HEK293细胞异源表达的胆囊收缩素1型受体(cholecystokinin type 1 receptor, CCK1R).基因编码的蛋白质光敏剂(genetically encoded protein photosensitiser, GEPP)毒杀红(KillerRed)、迷你单(miniSOG)在胰腺腺泡肿瘤细胞系AR4-2J质膜定位表达后,光动力永久激活AR4-2J细胞内源性CCK1R.细胞特异性KillerRed或miniSOG光动力作用,有望为阐述CCK1R的生理功能提供直接证据.潜在"嘎嘣脆"受体嵌合体的出现,将可实现对其他G蛋白偶联受体的在体原位远程调控.本文综述了实验室发现"嘎嘣脆"受体(可被1O2永久性激活的G蛋白偶联受体)的相关工作背景和已发表的主要研究结果,展望该领域发展前景,预测"嘎嘣脆"受体在疾病治疗中的可能应用. 展开更多

关键词 胆囊收缩素1型受体 “嘎嘣脆”受体 毒杀红 迷你单 单线态氧分子

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