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p53缺失和突变对人肺癌细胞系恶性表型影响的比较
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作者 汪惠 赖百塘 +7 位作者 李金照 杨学惠 张春彦 岳文涛 张洪涛 李曦 湛秀萍 王 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第4期245-249,共5页
目的　比较研究外源正义和反义 p5 3对所转染细胞系恶性表型的影响。 方法　构建正义和反义 p5 3cDNA真核细胞表达载体 pEGFP p5 3 (RS)和 pEGFP p5 3 (AS) ,用Lipofectin介导转染 80 1D细胞。PCR检测外源 p5 3和neo基因。荧光显微镜检... 目的　比较研究外源正义和反义 p5 3对所转染细胞系恶性表型的影响。 方法　构建正义和反义 p5 3cDNA真核细胞表达载体 pEGFP p5 3 (RS)和 pEGFP p5 3 (AS) ,用Lipofectin介导转染 80 1D细胞。PCR检测外源 p5 3和neo基因。荧光显微镜检查转染细胞绿荧光蛋白。免疫组化染色检测突变蛋白表达。比较pEGFP p5 3 (AS) 80 1D和 pEGFP p5 3 (RS) 80 1D的集落形成试验和裸鼠移植试验。用流式细胞术分析细胞周期。结果　PCR检测出外源 p5 3和neo基因存在于细胞 ,细胞可见绿色荧光。免疫组化检测示pEGFP p5 3(AS) 80 1D突变蛋白呈阴性 ,母系为阳性 ,表明反义 p5 3能封闭突变p5 3蛋白表达。pEGFP p5 3 (RS) 80 1D和pEGFP p5 3 (AS) 80 1D细胞集落形成率和裸鼠移植成瘤性均降低 ,pEGFP p5 3 (RS) 80 1D更为明显。pEGFP p5 3 (AS) 80 1D细胞周期阻滞于G1期。结论　在同一细胞背景下 ,p5 3缺失比p5 3突变对恶性增殖起更重要的作用。外源野生型p5 3在肿瘤细胞中可恢复重建其功能 ,外源反义 p5 3可封闭突变蛋白表达 ,阻止细胞停留于G1期。 展开更多
关键词 肺癌细胞系 恶性表型 P53基因 转染细胞 集落形成 基因缺失 基因突变 流式细胞术
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