【目的】建立一种定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量PCR方法。【方法】用RTPCR方法扩增PRRSV的N基因片段,构建含有N基因片段的重组质粒,以不同浓度的PRRSV-N基因重组质粒作为模板来进行检测PRRSV的SYBR Green I荧光定量...【目的】建立一种定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量PCR方法。【方法】用RTPCR方法扩增PRRSV的N基因片段,构建含有N基因片段的重组质粒,以不同浓度的PRRSV-N基因重组质粒作为模板来进行检测PRRSV的SYBR Green I荧光定量PCR扩增。【结果】PRRSV SYBR Green I荧光定量PCR的扩增效率为98.2%,标准曲线的决定系数为0.9995,可准确检测的最低核酸模板浓度为60copies/μL,重复性试验的变异系数小于3%,对3种常见的猪源RNA病毒的检测结果全为阴性。临床检测显示,PRRS病猪的血清中PRRSV载量极显著(P<0.01)高于PRRSV亚临床感染猪。【结论】建立了一种可用于PRRSV定量检测与PRRS早期快速诊断的特异性强、灵敏度高、重复性好的PRRSV SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。展开更多
文摘【目的】建立一种定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量PCR方法。【方法】用RTPCR方法扩增PRRSV的N基因片段,构建含有N基因片段的重组质粒,以不同浓度的PRRSV-N基因重组质粒作为模板来进行检测PRRSV的SYBR Green I荧光定量PCR扩增。【结果】PRRSV SYBR Green I荧光定量PCR的扩增效率为98.2%,标准曲线的决定系数为0.9995,可准确检测的最低核酸模板浓度为60copies/μL,重复性试验的变异系数小于3%,对3种常见的猪源RNA病毒的检测结果全为阴性。临床检测显示,PRRS病猪的血清中PRRSV载量极显著(P<0.01)高于PRRSV亚临床感染猪。【结论】建立了一种可用于PRRSV定量检测与PRRS早期快速诊断的特异性强、灵敏度高、重复性好的PRRSV SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。
