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共表达鸡传染性法氏囊病病毒LX株VP2基因及鸡新城疫病毒PX02/3株F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建
被引量:
5
1
作者
王子书
王萍
+3 位作者
许健
杨大为
李永清
江波
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2020年第11期26-30,I0004,I0005,共7页
为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1...
为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1-10插入pec启动子调控下的NDV PX02/3株的F基因表达盒,成功构建并拯救出同时表达IBDV和NDV保护性抗原基因的重组HVT病毒(rHVT-VP2-F)。经PCR、Western Blot、IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白和F蛋白。本研究为研制rHVT-VP2-F活载体疫苗提供了科学依据。
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关键词
新城疫病毒
传染性法氏囊病病毒
重组火鸡疱疹病毒
F基因
VP
2基因
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职称材料
牛传染性鼻气管炎病毒胶体金检测试纸条的研制和评价
2
作者
刘文晓
张坤
+1 位作者
程晶
李永清
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2024年第11期70-76,共7页
为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法,本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体,以其作为检测原,优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条,验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性,并与实时荧光定...
为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法,本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体,以其作为检测原,优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条,验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性,并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较分析。结果显示,共制备7株针对IBRV的单克隆抗体,其中以胶体金标记的单克隆抗体2B7作为捕获抗体、1B9作为检测抗体,建立的胶体金检测试纸条能够检测样品中的IBRV;该试纸条与病毒性腹泻/黏膜病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌无交叉反应,检测限为4.04×10~4TCID50/0.1 mL,敏感性为86.7%;在室温条件下保存12个月仍能够有效检测IBRV,说明该试纸条稳定性良好。与qPCR比较结果显示,2种方法检测结果的符合率为92.85%,说明该胶体金检测试纸条能够用于IBRV的临床诊断。结果表明,本试验利用IBRV的单克隆抗体建立的胶体金检测试纸条灵敏度高且特异性好,为IBRV抗原检测和流行病学调查提供技术支持。
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关键词
牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)
胶体金检测试纸条
单克隆抗体
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职称材料
鸡补体受体2基因克隆、蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备和鉴定
被引量:
3
3
作者
孔子萌
江波
+3 位作者
蔡云虹
何后军
李永清
靳换
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第1期201-208,共8页
为初步鉴定鸡补体受体2(ChCR2)基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR 2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-...
为初步鉴定鸡补体受体2(ChCR2)基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR 2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM,将两个原核质粒转入大肠杆菌表达系统中表达GST-ChCR2-△TM和His-ChCR2-△TM蛋白。将纯化后的GST-ChCR2-△TM蛋白免疫BALB/c小鼠制备血清多克隆抗体,以His-ChCR2-△TM蛋白为包被原,ELISA检测血清多克隆抗体效价。利用间接免疫荧光试验和Western blotting对抗原抗体的特异结合性进行鉴定。结果显示,扩增到了一条大小为1113 bp的ChCR 2基因条带。成功构建了去掉跨膜区的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM。诱导表达的GST-ChCR2-△TM蛋白在低温(16℃)诱导条件下可溶,而His-ChCR2-△TM蛋白以包涵体的形式存在。经ELISA测定,GST-ChCR2-△TM蛋白免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶512000。间接免疫荧光试验和Western blotting结果显示,制备的抗GST-ChCR2-△TM蛋白血清多克隆抗体可与ChCR2蛋白发生特异性结合。本研究结果为ChCR 2基因的进一步鉴定及鸡乃至禽类的相关免疫学研究提供了参考依据。
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关键词
ChCR2基因
蛋白表达和纯化
多克隆抗体
ELISA
间接免疫荧光
Western
BLOTTING
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职称材料
题名
共表达鸡传染性法氏囊病病毒LX株VP2基因及鸡新城疫病毒PX02/3株F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建
被引量:
5
1
作者
王子书
王萍
许健
杨大为
李永清
江波
机构
江西农业大学动物
科学
技术
学院
北京市农林科学院
畜牧兽医
研究
所
畜禽
疫病
防控技术
北京市
重点实验室
北京市农林科学院畜禽疫病研究中心
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2020年第11期26-30,I0004,I0005,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(31672588)
国家自然科学基金国际(地区)合作与交流项目(31761133003)
北京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX201914)。
文摘
为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1-10插入pec启动子调控下的NDV PX02/3株的F基因表达盒,成功构建并拯救出同时表达IBDV和NDV保护性抗原基因的重组HVT病毒(rHVT-VP2-F)。经PCR、Western Blot、IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白和F蛋白。本研究为研制rHVT-VP2-F活载体疫苗提供了科学依据。
关键词
新城疫病毒
传染性法氏囊病病毒
重组火鸡疱疹病毒
F基因
VP
2基因
Keywords
newcastle disease virus
infectious bursal disease virus
recombinant turkey herpesvirus
F gene
VP 2 gene
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
牛传染性鼻气管炎病毒胶体金检测试纸条的研制和评价
2
作者
刘文晓
张坤
程晶
李永清
机构
北京市农林科学院畜禽疫病研究中心
北京
农
学院
动物
科学
技术
学院
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2024年第11期70-76,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(32172818)
北京市自然科学基金面上项目(6232012)
+1 种基金
北京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX20200424)
家畜产业技术体系北京市创新团队项目(BAIC06-2022)。
文摘
为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法,本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体,以其作为检测原,优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条,验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性,并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较分析。结果显示,共制备7株针对IBRV的单克隆抗体,其中以胶体金标记的单克隆抗体2B7作为捕获抗体、1B9作为检测抗体,建立的胶体金检测试纸条能够检测样品中的IBRV;该试纸条与病毒性腹泻/黏膜病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌无交叉反应,检测限为4.04×10~4TCID50/0.1 mL,敏感性为86.7%;在室温条件下保存12个月仍能够有效检测IBRV,说明该试纸条稳定性良好。与qPCR比较结果显示,2种方法检测结果的符合率为92.85%,说明该胶体金检测试纸条能够用于IBRV的临床诊断。结果表明,本试验利用IBRV的单克隆抗体建立的胶体金检测试纸条灵敏度高且特异性好,为IBRV抗原检测和流行病学调查提供技术支持。
关键词
牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)
胶体金检测试纸条
单克隆抗体
Keywords
infectious bovine rhinotracheitis virus(IBRV)
colloidal gold test strip
monoclonal antibody
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
鸡补体受体2基因克隆、蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备和鉴定
被引量:
3
3
作者
孔子萌
江波
蔡云虹
何后军
李永清
靳换
机构
江西农业大学动物
科学
技术
学院
北京市农林科学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第1期201-208,共8页
基金
国家自然科学基金面上项目(31672588)
北京市博士后科研活动经费资助项目(2018-XX-053)
+1 种基金
北京市农林科学院博士后基金(2018-ZZ-005)
北京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX201914)
文摘
为初步鉴定鸡补体受体2(ChCR2)基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR 2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM,将两个原核质粒转入大肠杆菌表达系统中表达GST-ChCR2-△TM和His-ChCR2-△TM蛋白。将纯化后的GST-ChCR2-△TM蛋白免疫BALB/c小鼠制备血清多克隆抗体,以His-ChCR2-△TM蛋白为包被原,ELISA检测血清多克隆抗体效价。利用间接免疫荧光试验和Western blotting对抗原抗体的特异结合性进行鉴定。结果显示,扩增到了一条大小为1113 bp的ChCR 2基因条带。成功构建了去掉跨膜区的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM。诱导表达的GST-ChCR2-△TM蛋白在低温(16℃)诱导条件下可溶,而His-ChCR2-△TM蛋白以包涵体的形式存在。经ELISA测定,GST-ChCR2-△TM蛋白免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶512000。间接免疫荧光试验和Western blotting结果显示,制备的抗GST-ChCR2-△TM蛋白血清多克隆抗体可与ChCR2蛋白发生特异性结合。本研究结果为ChCR 2基因的进一步鉴定及鸡乃至禽类的相关免疫学研究提供了参考依据。
关键词
ChCR2基因
蛋白表达和纯化
多克隆抗体
ELISA
间接免疫荧光
Western
BLOTTING
Keywords
ChCR2 gene
expression and purification of protein
polyclonal antibody
ELISA
indirect immunofluorescence assay
Western blotting
分类号
S831 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
共表达鸡传染性法氏囊病病毒LX株VP2基因及鸡新城疫病毒PX02/3株F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建
王子书
王萍
许健
杨大为
李永清
江波
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2020
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
牛传染性鼻气管炎病毒胶体金检测试纸条的研制和评价
刘文晓
张坤
程晶
李永清
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
鸡补体受体2基因克隆、蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备和鉴定
孔子萌
江波
蔡云虹
何后军
李永清
靳换
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
3
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职称材料
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