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定点整合β1,4半乳糖基转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶1和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ的CHO工程细胞株构建
1
作者
李仙红
贾润清
+4 位作者
王友亮
漫未玲
朱天昊
阎新龙
林艳丽
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第4期576-585,共10页
对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建...
对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建3个糖基转移酶共同表达的打靶载体,分别是β1,4半乳糖基转移酶(B4GALT1)、α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6GAL1)和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ(GnTⅢ),并利用重组酶介导的盒式交换技术(recombinase-mediated cassette exchange,RMCE)将3个糖基转基因酶基因定点整合到CHO Rosa26位点中。PCR证实了3个糖基转移酶成功定点整合Rosa26位点,qRT-PCR证实3个糖基转移酶的mRNA表达水平均在50000倍以上,蛋白质免疫印迹法证实3个糖基转移酶的蛋白质表达水平均在4倍以上(P<0.001)。成功构建了Rosa26位点定点整合3个糖基转移酶的CHO工程细胞株。
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关键词
β-1
4半乳糖基转移酶
α-2
6-唾液酸转移酶1
N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ
规律成簇的间隔短回文重复技术
重组酶介导的盒式交换技术
中国仓鼠卵巢细胞
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职称材料
题名
定点整合β1,4半乳糖基转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶1和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ的CHO工程细胞株构建
1
作者
李仙红
贾润清
王友亮
漫未玲
朱天昊
阎新龙
林艳丽
机构
北京工业大学化学与生命学院生物系
军事科
学院
军事医学研究院前沿
生物
技术实验室
沈阳农
业大
学
生物
科学技术
学院
生物
医药系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第4期576-585,共10页
文摘
对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建3个糖基转移酶共同表达的打靶载体,分别是β1,4半乳糖基转移酶(B4GALT1)、α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6GAL1)和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ(GnTⅢ),并利用重组酶介导的盒式交换技术(recombinase-mediated cassette exchange,RMCE)将3个糖基转基因酶基因定点整合到CHO Rosa26位点中。PCR证实了3个糖基转移酶成功定点整合Rosa26位点,qRT-PCR证实3个糖基转移酶的mRNA表达水平均在50000倍以上,蛋白质免疫印迹法证实3个糖基转移酶的蛋白质表达水平均在4倍以上(P<0.001)。成功构建了Rosa26位点定点整合3个糖基转移酶的CHO工程细胞株。
关键词
β-1
4半乳糖基转移酶
α-2
6-唾液酸转移酶1
N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ
规律成簇的间隔短回文重复技术
重组酶介导的盒式交换技术
中国仓鼠卵巢细胞
Keywords
β-1,4 galactosyltransferase(B4GALT1)
α-2,6-sialyltransferase 1(ST6GAL1)
N-acetaminoglycosyltransferase III(GnTⅢ)
clustered regularly interspaced short palindromic repeats technology(CRISPR/Cas9)
recombinase-mediated cassette exchange technology
Chinese hamster ovary cells(CHO)
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
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1
定点整合β1,4半乳糖基转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶1和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ的CHO工程细胞株构建
李仙红
贾润清
王友亮
漫未玲
朱天昊
阎新龙
林艳丽
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025
0
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参考文献
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