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定点整合β1,4半乳糖基转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶1和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ的CHO工程细胞株构建
1
作者
李仙红
贾润清
+4 位作者
王友亮
漫未玲
朱天昊
阎新龙
林艳丽
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第4期576-585,共10页
对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建...
对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建3个糖基转移酶共同表达的打靶载体,分别是β1,4半乳糖基转移酶(B4GALT1)、α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6GAL1)和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ(GnTⅢ),并利用重组酶介导的盒式交换技术(recombinase-mediated cassette exchange,RMCE)将3个糖基转基因酶基因定点整合到CHO Rosa26位点中。PCR证实了3个糖基转移酶成功定点整合Rosa26位点,qRT-PCR证实3个糖基转移酶的mRNA表达水平均在50000倍以上,蛋白质免疫印迹法证实3个糖基转移酶的蛋白质表达水平均在4倍以上(P<0.001)。成功构建了Rosa26位点定点整合3个糖基转移酶的CHO工程细胞株。
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关键词
β-1
4半乳糖基转移酶
α-2
6-唾液酸转移酶1
N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ
规律成簇的间隔短回文重复技术
重组酶介导的盒式交换技术
中国仓鼠卵巢细胞
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职称材料
无创评估髋部骨质疏松性骨折风险的“生物力学μMRI”方法研究
2
作者
齐倓萩
霍晨晨
+1 位作者
王玲
杨海胜
《医用生物力学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第S01期662-662,共1页
目的如何预防髋部骨质疏松性骨折已成为一个严重的公共卫生问题,而预防的关键在于早期精准评估骨折风险。骨质疏松性骨折的出现与股骨内部微结构退变密切相关。高分辨率显微磁共振成像(μMRI)是目前唯一可以在体呈现股骨微结构的成像方...
目的如何预防髋部骨质疏松性骨折已成为一个严重的公共卫生问题,而预防的关键在于早期精准评估骨折风险。骨质疏松性骨折的出现与股骨内部微结构退变密切相关。高分辨率显微磁共振成像(μMRI)是目前唯一可以在体呈现股骨微结构的成像方法,通过建立包含骨微结构的有限元模型(FEM),可以更准确评估股骨近端微观力学行为。本研究将建立一种基于μMRI微结构分割来无创评估髋部骨折风险的生物力学方法。方法采集股骨标本的μMRI图像,分割骨微结构并建立μMRIFEM,模拟侧向跌倒,计算骨折高风险应力应变。通过离体实验,结合定量计算机断层扫描技术(QCT)及显微CT(μCT)验证微结构分割结果及μMRI-FEM计算结果的准确性。基于临床病例数据在体验证μMRI-FEM在预测骨折风险时的准确性。结果基于μMRI分割的骨微结构参数与μCT之间存在显著相关性(P<0.05)。基于骨微结构分割的μMRI-FEM与QCT-FEM和μCT-FEM结果均具有强相关性(R^(2)>0.80)。μMRI-FEM与QCT-FEM在预测整骨刚度结果方面展现出高度一致性(R^(2)=0.79~0.85)。基于骨微结构分割的μMRI-FEM的刚度和高危拉/压应变(AUC=0.88~1)可以很好地在体鉴别既存骨折风险。结论建立并验证了一种基于μMRI无创计算微结构力学行为的生物力学新方法,为在体无创评估髋部股骨微结构退变和骨质疏松性骨折风险提供了重要工具。
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关键词
骨微结构
骨质疏松性骨折
骨折风险
无创评估
髋部骨折
磁共振成像
生物力学
股骨近端
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职称材料
题名
定点整合β1,4半乳糖基转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶1和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ的CHO工程细胞株构建
1
作者
李仙红
贾润清
王友亮
漫未玲
朱天昊
阎新龙
林艳丽
机构
北京工业大学化学与生命学院
生物系
军事科
学院
军事医学研究院前沿生物技术实验室
沈阳农
业大
学生物科学技术
学院
生物医药系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第4期576-585,共10页
文摘
对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建3个糖基转移酶共同表达的打靶载体,分别是β1,4半乳糖基转移酶(B4GALT1)、α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6GAL1)和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ(GnTⅢ),并利用重组酶介导的盒式交换技术(recombinase-mediated cassette exchange,RMCE)将3个糖基转基因酶基因定点整合到CHO Rosa26位点中。PCR证实了3个糖基转移酶成功定点整合Rosa26位点,qRT-PCR证实3个糖基转移酶的mRNA表达水平均在50000倍以上,蛋白质免疫印迹法证实3个糖基转移酶的蛋白质表达水平均在4倍以上(P<0.001)。成功构建了Rosa26位点定点整合3个糖基转移酶的CHO工程细胞株。
关键词
β-1
4半乳糖基转移酶
α-2
6-唾液酸转移酶1
N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ
规律成簇的间隔短回文重复技术
重组酶介导的盒式交换技术
中国仓鼠卵巢细胞
Keywords
β-1,4 galactosyltransferase(B4GALT1)
α-2,6-sialyltransferase 1(ST6GAL1)
N-acetaminoglycosyltransferase III(GnTⅢ)
clustered regularly interspaced short palindromic repeats technology(CRISPR/Cas9)
recombinase-mediated cassette exchange technology
Chinese hamster ovary cells(CHO)
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
无创评估髋部骨质疏松性骨折风险的“生物力学μMRI”方法研究
2
作者
齐倓萩
霍晨晨
王玲
杨海胜
机构
北京工业大学化学与生命学院
北京
积水潭医院
出处
《医用生物力学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第S01期662-662,共1页
基金
国家自然科学基金项目,12272017
北京市自然科学基金项目,L232058
文摘
目的如何预防髋部骨质疏松性骨折已成为一个严重的公共卫生问题,而预防的关键在于早期精准评估骨折风险。骨质疏松性骨折的出现与股骨内部微结构退变密切相关。高分辨率显微磁共振成像(μMRI)是目前唯一可以在体呈现股骨微结构的成像方法,通过建立包含骨微结构的有限元模型(FEM),可以更准确评估股骨近端微观力学行为。本研究将建立一种基于μMRI微结构分割来无创评估髋部骨折风险的生物力学方法。方法采集股骨标本的μMRI图像,分割骨微结构并建立μMRIFEM,模拟侧向跌倒,计算骨折高风险应力应变。通过离体实验,结合定量计算机断层扫描技术(QCT)及显微CT(μCT)验证微结构分割结果及μMRI-FEM计算结果的准确性。基于临床病例数据在体验证μMRI-FEM在预测骨折风险时的准确性。结果基于μMRI分割的骨微结构参数与μCT之间存在显著相关性(P<0.05)。基于骨微结构分割的μMRI-FEM与QCT-FEM和μCT-FEM结果均具有强相关性(R^(2)>0.80)。μMRI-FEM与QCT-FEM在预测整骨刚度结果方面展现出高度一致性(R^(2)=0.79~0.85)。基于骨微结构分割的μMRI-FEM的刚度和高危拉/压应变(AUC=0.88~1)可以很好地在体鉴别既存骨折风险。结论建立并验证了一种基于μMRI无创计算微结构力学行为的生物力学新方法,为在体无创评估髋部股骨微结构退变和骨质疏松性骨折风险提供了重要工具。
关键词
骨微结构
骨质疏松性骨折
骨折风险
无创评估
髋部骨折
磁共振成像
生物力学
股骨近端
分类号
R318.01 [医药卫生—生物医学工程]
R580 [医药卫生—内分泌]
R683 [医药卫生—骨科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
定点整合β1,4半乳糖基转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶1和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ的CHO工程细胞株构建
李仙红
贾润清
王友亮
漫未玲
朱天昊
阎新龙
林艳丽
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
无创评估髋部骨质疏松性骨折风险的“生物力学μMRI”方法研究
齐倓萩
霍晨晨
王玲
杨海胜
《医用生物力学》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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