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非编码RNA——功能基因组研究的新热点 被引量:4
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作者 杨琳 柯杨 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期444-446,共3页
Approxmately 97% of all transcriptional output of the human being is noncoding RNA(ncRNA),which has been found to play roles in a great variety of processes,and is becoming more andmore attractive.This review is a gen... Approxmately 97% of all transcriptional output of the human being is noncoding RNA(ncRNA),which has been found to play roles in a great variety of processes,and is becoming more andmore attractive.This review is a general intruduction to the concept,classification and functions ofncRNA. 展开更多
关键词 RNA 肿瘤 基因组 综述文献
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细胞系中支原体检测及分型 被引量:5
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作者 戴悦 吕允威 +4 位作者 张春凤 曹邦伟 柴庆波 马明信 柯杨 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期207-210,共4页
目的:对细胞系中支原体的感染情况进行检测并分型。方法:利用支原体 16S^23S保守区域扩增来检出细胞系中支原体感染率,并利用 16S^23S保守区间的间隔区(spacer)长度不同进行巢式PCR扩增,结合测序达到分型的目的。结果:在检测的 22株细... 目的:对细胞系中支原体的感染情况进行检测并分型。方法:利用支原体 16S^23S保守区域扩增来检出细胞系中支原体感染率,并利用 16S^23S保守区间的间隔区(spacer)长度不同进行巢式PCR扩增,结合测序达到分型的目的。结果:在检测的 22株细胞系中,有 77. 3% (17株)的细胞系有支原体感染,其中 5株有 2种或 2种以上支原体感染,在分布上以M.fermentans和M.hyorhinis支原体多见。结论:支原体在细胞系中的高感染率提示,在以细胞系作为模型的研究中,对支原体感染所造成的影响应有充分认识。检测及分型技术的建立为进一步研究不同型别支原体的致病力提供了可能。 展开更多
关键词 细胞系 支原体检测 16S^23S 支原体感染 巢式PCR扩增 感染情况 高感染率 不同型别 分型技术 间隔区 致病力 步研究 保守
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KIAA0649多克隆抗体的制备及其细胞内定位
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作者 郑宗方 韩巍 +2 位作者 何其华 柯杨 杜晓娟 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期613-619,共7页
目的:制备抗KIAA0649多克隆抗体并鉴定抗体的特异性,同时初步鉴定KIAA0649蛋白在细胞内的定位及其功能结构域。方法:通过TMHMM和DNAstar等软件对KIAA0649的蛋白质序列进行分析,选取了3段序列合成多肽,将3段多肽混合后对新西兰兔进行免疫... 目的:制备抗KIAA0649多克隆抗体并鉴定抗体的特异性,同时初步鉴定KIAA0649蛋白在细胞内的定位及其功能结构域。方法:通过TMHMM和DNAstar等软件对KIAA0649的蛋白质序列进行分析,选取了3段序列合成多肽,将3段多肽混合后对新西兰兔进行免疫,通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno-sorbnent assay,ELISA)测定血清中抗多肽的滴度,当抗血清的滴度达到1∶105(体积比)时取血清,通过免疫亲和层析柱对抗体进行纯化。在U2OS细胞中表达Flag-KIAA0649或通过小干扰RNA沉默内源的KIAA0649,提取细胞蛋白,电泳后转膜,通过Western blot分析上述制备的多克隆抗体的特异性;将表达Flag-KIAA0649的细胞在玻片上固定,用抗Flag抗体和抗KIAA0649抗体进行双色免疫荧光分析,通过免疫荧光对KIAA0649抗体进行鉴定。利用PCR克隆构建Flag-KIAA0649全长表达质粒和系列Flag-KIAA0649缺失突变体,转染细胞后通过免疫荧光对KIAA0649在细胞内的定位进行研究。结果:得到的纯化KIAA0649多克隆抗体特异性地识别内源及外源KIAA0649蛋白,可用于免疫荧光和Western blot分析;全长KIAA0649蛋白在细胞核内显示特定的分布方式;KIAA0649的缺失突变体中,含有PENF motif的突变体与全长KIAA0649蛋白在细胞核内的分布形式一致,推测该结构域可能为KIAA0649的功能结构域。结论:通过上述方法制备的KIAA0649多克隆抗体具有较高的特异性,可应用于KIAA0649的功能研究,KIAA0649在细胞内定位的研究对于阐明KIAA0649的功能机制具有重要意义。 展开更多
关键词 原癌基因 肽类 抗体生成
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