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基因组编辑技术及其在合成生物学中的应用 被引量:2
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作者 曹中正 张心怡 +2 位作者 徐艺源 周卓 魏文胜 《合成生物学》 2020年第4期413-426,共14页
基因组编辑技术是一种能够定向修改基因组的强有力工具。近年来,CRISPR/Cas9系统因其易于构建、编辑效率高等优点逐渐成为应用最为广泛的基因组编辑工具。合成生物学作为一门整合了工程学思维以及生物学原理的新生交叉学科,在生物学、... 基因组编辑技术是一种能够定向修改基因组的强有力工具。近年来,CRISPR/Cas9系统因其易于构建、编辑效率高等优点逐渐成为应用最为广泛的基因组编辑工具。合成生物学作为一门整合了工程学思维以及生物学原理的新生交叉学科,在生物学、医学、化学、农业、能源和环境等领域发挥着重要的作用。合成生物学对于DNA等遗传物质的合成、组装和编辑等操作有着巨大的需求,因此基因组编辑技术在合成生物学中有着广泛的应用。本文综述了以ZFN和TALEN为代表的早期基因组编辑技术,以及新型CRISPR/Cas9基因组编辑技术的原理、发展、作用机制、系统优化、衍生技术以及应用。同时也介绍了基因组编辑技术在基因表达调控、微生物基因编辑和分子记录等合成生物学领域的应用,并展望了基因组编辑技术的前景以及在合成生物学领域的发展趋势。 展开更多
关键词 基因组编辑 CRISPR/Cas9 合成生物学 基因表达调控 微生物基因编辑 分子记录
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基因编辑技术及其在中国的研究发展 被引量:16
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作者 陈一欧 宝颖 +3 位作者 马华峥 伊宗裔 周卓 魏文胜 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期900-915,共16页
基因编辑技术是一种能够对生物体的基因组及其转录产物进行定点修饰或者修改的技术,早期基因编辑技术包括归巢内切酶、锌指核酸内切酶和类转录激活因子效应物。近年来,以CRISPR/Cas9系统为代表的新型技术使基因编辑的研究和应用领域得... 基因编辑技术是一种能够对生物体的基因组及其转录产物进行定点修饰或者修改的技术,早期基因编辑技术包括归巢内切酶、锌指核酸内切酶和类转录激活因子效应物。近年来,以CRISPR/Cas9系统为代表的新型技术使基因编辑的研究和应用领域得以迅速拓展。本文对基因编辑技术的原理、技术发展及其应用进行了阐述,对我国在基因编辑机制研究及技术发展、基因编辑动植物模型构建、基因治疗等领域的研究进展进行了回顾,并对基因技术的发展前景及趋势进行了展望。 展开更多
关键词 基因编辑 遗传工程 CRISPR 基因功能 疾病模型 基因治疗
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基于一维序列的三维染色质相分离:驱动力、过程与功能
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作者 刘思睿 权慧 +3 位作者 田昊 周瑞 杨立江 高毅勤 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2020年第1期127-141,共15页
染色质高级结构在基因调控中起到不可忽视的作用,染色质结构的形成与调控机制受到广泛关注。"相分离"理论近年来受到较多关注,异染色质与转录因子在其中的作用引人瞩目。但是,目前的相分离模型更关注结合因子与表观遗传性质,... 染色质高级结构在基因调控中起到不可忽视的作用,染色质结构的形成与调控机制受到广泛关注。"相分离"理论近年来受到较多关注,异染色质与转录因子在其中的作用引人瞩目。但是,目前的相分离模型更关注结合因子与表观遗传性质,对DNA序列自身的作用理解尚较不充分。许多物种基因组的序列分布均具有多尺度的不均一性,仅基于Cp G岛(Cp G island,CGI)密度差异这一序列性质,就可以划分出基因、表观遗传、结构和转录性质都截然不同的高CGI密度"森林"和低CGI密度"草原"两种序列区域,体现了基因组自身的马赛克性。本文聚焦染色质结构的序列依赖性,讨论了染色质结构模型的研究进展,关注在序列几乎相同的不同细胞类型中的序列–结构关系及其功能调控,对发育、分化、衰老、疾病等多种过程的染色质结构变化进行了系统分析。针对基于序列的染色质相分离模型,对其物理驱动力进行了讨论,并在该模型的框架下基于相分离的物理特性,对温度、序列不均一性等物理因素对染色质结构可能造成的影响进行了探讨。 展开更多
关键词 相分离 序列马赛克性 CGI森林和草原 发育与分化 老化与疾病
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应用基于非变性质谱及串联质谱的碎片互补法分析完整IgA2抗体及其尺寸变异体
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作者 陈清蓉 柴胡玲潇 +1 位作者 陈韬 王冠博 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第6期697-706,I0003,共11页
在完整蛋白及其复合物层面表征糖蛋白可提供修饰程度、变异体分布、结合计量关系等方面的重要结构信息。大量天然蛋白质及蛋白质药物都以糖蛋白形式存在,随着糖基化程度的增大,蛋白体系的异质性增强,糖链与肽链理化性质的差异使得常规... 在完整蛋白及其复合物层面表征糖蛋白可提供修饰程度、变异体分布、结合计量关系等方面的重要结构信息。大量天然蛋白质及蛋白质药物都以糖蛋白形式存在,随着糖基化程度的增大,蛋白体系的异质性增强,糖链与肽链理化性质的差异使得常规表征手段容易损失准确性。使用质谱测定会因蛋白型质量分布展宽造成信号重叠,以及不同糖型离子化响应差异造成不同价态蛋白型质量分布差异而损失准确度,甚至无法实现分子质量测定。为解决这一问题,开发了基于有限价态还原的非变性质谱方法,但这些方法有的存在还原效率有限,有的需使用仅个别型号商品化仪器才具备的基于电子/质子转移的气相反应功能,应用范围受到限制。本工作针对含有非共价亚基的完整IgA2单克隆抗体及其尺寸变异体复合物体系,使用基于非变性质谱及串联质谱的碎片互补方法,以及碰撞诱导解离(CID)或高能碰撞解离(HCD)反应,综合利用有限价态还原效应和解离反应的质量守恒约束条件,实现高异质性糖蛋白复合物的测定。通过与针对全体蛋白型系综还原方法及蛋白型亚群有限还原方法的平行比较和交叉验证,评价各种方法的性能。结果表明,在解离产物特异性高且分子质量均一的情况下,碎片互补法可充分保证价态及分子质量测定的准确性。这一策略可为高异质性糖蛋白体系在完整层面的分析提供普适化方案。 展开更多
关键词 非变性质谱 糖蛋白 蛋白质复合物 抗体 IGA 尺寸变异体
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应用非变性质谱-行波式离子淌度谱表征完整糖蛋白复合物的稳定性及小规模结构差异
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作者 徐香 柴胡玲潇 王冠博 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第5期653-662,I0007,共11页
在完整复合物层面表征糖蛋白复合物的高级结构和动态学,对于研究蛋白质功能具有重要意义。行波式离子淌度与非变性质谱结合不仅可提供额外的正交分离维度,还可通过测定碰撞截面积(CCS)获取分析物的几何特征信息,助力结构表征。本工作针... 在完整复合物层面表征糖蛋白复合物的高级结构和动态学,对于研究蛋白质功能具有重要意义。行波式离子淌度与非变性质谱结合不仅可提供额外的正交分离维度,还可通过测定碰撞截面积(CCS)获取分析物的几何特征信息,助力结构表征。本工作针对糖蛋白复合物稳定性及小规模结构差异的表征需求,选取由不同物种表达的亲和素作为糖蛋白模式复合物,探究离子淌度在非变性质谱分析中可提供的结构信息。结果表明,离子淌度可在完整复合物水平上分离蛋白型亚群分布,能够反映高阶复合物的几何特征,以及蛋白在气相解离条件、电荷调控条件和经电荷调控的气相解离条件下的构象变化程度,可应用于糖蛋白复合物体系的稳定性评价。 展开更多
关键词 离子淌度(IM) 非变性质谱(nMS) 糖蛋白 蛋白质复合物 电荷调控
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