用酶联免疫吸附法测定鱼类体内金属硫蛋白 被引量：13

1

作者 林芃 任宏伟 茹炳根 《环境污染与防治》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期265-267,共3页

用酶联免疫吸附法测定鱼体内 (肝 ,肾 ) MT。鱼组织经匀浆、加热、离心、将上清液以包被液稀释后 ,与一抗、二抗反应 ,求得 MT含量。与镉 /血红蛋白饱和法比较 ,本法显示了特异、简便、及灵敏的特点。同时 ,用酶联免疫吸附法测定了取自... 用酶联免疫吸附法测定鱼体内 (肝 ,肾 ) MT。鱼组织经匀浆、加热、离心、将上清液以包被液稀释后 ,与一抗、二抗反应 ,求得 MT含量。与镉 /血红蛋白饱和法比较 ,本法显示了特异、简便、及灵敏的特点。同时 ,用酶联免疫吸附法测定了取自武汉东湖不同水域的鱼类、不同种类的鱼类的组织脏器的 MT的含量 。 展开更多

关键词 金属硫蛋白 酶联免疫吸附法 特异性 鱼类体内 生物监测

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金属硫蛋白及其在食品工业应用中的研究进展 被引量：9

2

作者 郝守进 茹炳根 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期62-67,共6页

综述了 3 4篇文献。介绍了金属硫蛋白的结构、理化性质和主要功能 ,并对国内外对金属硫蛋白的研究进展进行了简要介绍 ,说明了金属硫蛋白在食品工业中具有广阔的应用前景。

关键词 金属硫蛋白 食品工业 应用 理化性质 功能

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金属硫蛋白与单抗SZ51重组蛋白在大肠杆菌菌株BL21(DE3)pLysS中表达的研究 被引量：3

3

作者 孙艳 张沛川 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期423-427,共5页

从基因工程水平构建了小鼠金属硫蛋白与抗人活化血小板单抗ＳＺ５１单链抗体的重组基因产物，并在大肠杆菌菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中成功地进行了表达．该重组蛋白以包涵体形式存在于菌体蛋白中，分子量为３８ｋＤ，ＥＬＩＳ... 从基因工程水平构建了小鼠金属硫蛋白与抗人活化血小板单抗ＳＺ５１单链抗体的重组基因产物，并在大肠杆菌菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中成功地进行了表达．该重组蛋白以包涵体形式存在于菌体蛋白中，分子量为３８ｋＤ，ＥＬＩＳＡ实验证明该重组蛋白既具有血栓部位活化血小板的单抗活性。 展开更多

关键词 金属硫蛋白 血栓 导向显像剂 单链抗体 包涵体

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纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质 被引量：1

4

作者 焦建伟 刘宁 +1 位作者 俞梅敏 茹炳根 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期862-865,共4页

将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大... 将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大肠杆菌中经过IPTG诱导表达 ,经过变性及复性 ,Zn2 + 螯合层析及SephacrylS2 0 0凝胶层析后 ,目的蛋白被纯化 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带 ,分子质量为35ku .经纤维蛋白平板法测定比活为 870 0 0U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4酶促动力学性质相似 .同时Fβ (15～ 42 ) /scuPA 展开更多

关键词 低分子量单链尿激酶原 纤维蛋白肽 融合蛋白 表达 性质

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急性运动轴索型神经病患者血清对大鼠脊髓运动神经元凋亡相关蛋白表达的影响

5

作者 彭立威 杨国锋 +5 位作者 纪建国 魏晓姗 李培 赵景茹 张锐利 冯晓 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期580-583,591,共5页

目的采用蛋白质组学技术研究急性运动轴索型神经病(AMAN)患者血清对大鼠脊髓运动神经元凋亡相关蛋白表达的影响。方法分别以16例AMAN患者和16名健康献血者的血清对原代培养大鼠脊髓运动神经元进行干预,24 h后行双向凝胶电泳,MALDI-TOF/... 目的采用蛋白质组学技术研究急性运动轴索型神经病(AMAN)患者血清对大鼠脊髓运动神经元凋亡相关蛋白表达的影响。方法分别以16例AMAN患者和16名健康献血者的血清对原代培养大鼠脊髓运动神经元进行干预,24 h后行双向凝胶电泳,MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定神经元发生变化的蛋白,表达水平上升或下降超过30%的点判定为差异蛋白质点。结果 AMAN患者血清干预与健康献血者血清干预的大鼠脊髓运动神经元比较,有21种差异表达蛋白,其中内质网蛋白29、不均一核糖核蛋白H、蛋白酶体α亚基1、3-磷酸甘油醛脱氢酶、电压门控阴离子选择性通道蛋白1为凋亡相关蛋白。结论在AMAN患者血清作用下,大鼠脊髓运动神经元的细胞凋亡相关蛋白表达发生了变化。 展开更多

关键词 急性运动轴索型神经病 蛋白质组学 血清 凋亡相关蛋白

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金属硫蛋白导向血栓单抗化学偶联体的制备及性质研究

6

作者 孙艳 阮长耿 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期344-347,共4页

金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，简称ＭＴ）是一类低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质，由于１个ＭＴ分子可结合７个金属离子，因此ＭＴ分子具有很强的金属结合特性［１，２］．本文一方面利用ＭＴ分子的高金属结合性能，另一... 金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，简称ＭＴ）是一类低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质，由于１个ＭＴ分子可结合７个金属离子，因此ＭＴ分子具有很强的金属结合特性［１，２］．本文一方面利用ＭＴ分子的高金属结合性能，另一方面利用苏州医学院血液研究所研制成... 展开更多

关键词 金属硫蛋白 导向血栓显像 单克隆抗体 化学偶联

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鱼体内金属硫蛋白与水环境关系的研究 被引量：31

7

作者 林芃 任宏伟 茹炳根 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期779-784,共6页

金属硫蛋白 (Metallothionein ,简称MT)能有效地表征水体中重金属对生物的影响 ,故以鱼类MT含量来评价武汉东湖的水环境。对不同组织中MT含量测定可研究不同组织对重金属的积累能力 ;不同鱼种体内MT含量测定以了解鱼种对金属耐受力的影... 金属硫蛋白 (Metallothionein ,简称MT)能有效地表征水体中重金属对生物的影响 ,故以鱼类MT含量来评价武汉东湖的水环境。对不同组织中MT含量测定可研究不同组织对重金属的积累能力 ;不同鱼种体内MT含量测定以了解鱼种对金属耐受力的影响 ;而对不同水体中鱼类MT含量的分析 ,则对确定污染源及污染程度有重要意义。 展开更多

关键词 金属硫蛋白 水质污染 体内重金属积累 生物标志物 耐受力 鱼类 水质监测

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三叶因子家族 被引量：7

8

作者 口如琴 王蔚 +1 位作者 李令媛 茹炳根 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第4期367-372,共6页

三叶因子家族是一类具有特殊结构———P结构域的蛋白质家族 ,P结构域包含 6个高度保守的半胱氨酸残基及精氨酸、甘氨酸、色氨酸和苯丙氨酸残基 .半胱氨酸残基以Cys1 Cys5 ,Cys2 Cys4,Cys3 Cys6连接形成三个链内二硫桥 .已发现多种含有... 三叶因子家族是一类具有特殊结构———P结构域的蛋白质家族 ,P结构域包含 6个高度保守的半胱氨酸残基及精氨酸、甘氨酸、色氨酸和苯丙氨酸残基 .半胱氨酸残基以Cys1 Cys5 ,Cys2 Cys4,Cys3 Cys6连接形成三个链内二硫桥 .已发现多种含有P结构域的多肽 ,其中最引人注目的是TFF1/pS2、TFF2 /SP及TFF3/ITF ,在正常组织中其主要表达位点分别为胃基底和胃体 (TFF1/pS2 )、胃窦深部的小凹 (TFF2 /SP)及小肠和大肠杯状细胞 (TFF3/ITF) .TFF可能具有维持粘膜屏障和促进溃疡治愈的功能 .TFF含有α折叠 (α helix) ,β片层 (β sheet) .三叶因子家族多肽的作用机理仍处于猜测阶段 ,现有与粘蛋白共同作用和与受体作用两种假说 . 展开更多

关键词 三叶因子家族 三叶肽 表达位点 结构

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神经生长抑制因子研究进展 被引量：7

9

作者 季清洲 任宏伟 +1 位作者 李令媛 茹炳根 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第5期488-492,共5页

神经生长抑制因子 (neuronalgrowthinhibitoryfactor,GIF)又名金属硫蛋白 Ⅲ (metallothionein Ⅲ ,MT Ⅲ ) ,特异分布于中枢神经系统 (CNS) ,是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白 .GIF一级序列、高级结构、金属结... 神经生长抑制因子 (neuronalgrowthinhibitoryfactor,GIF)又名金属硫蛋白 Ⅲ (metallothionein Ⅲ ,MT Ⅲ ) ,特异分布于中枢神经系统 (CNS) ,是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白 .GIF一级序列、高级结构、金属结合特性类似于其他MTs,基因结构也与其他MTs高度同源 ,但表达调控途径相异 .GIF可能以其 β结构域的CPCP区 ,与脑组织提取物中的相关因子结合 ,进而表现其生物学功能 . 展开更多

关键词 神经生长抑制因子 金属硫蛋白 结构 功能 AD

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抗栓肽(Decorsin)在大肠杆菌中的克隆及表达 被引量：4

10

作者 焦建伟 张磊亮 +1 位作者 俞梅敏 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期602-605,共4页

将人工合成的寡核苷酸片段进行体外连接 ,得到编码抗栓肽 (decorsin)的cDNA .将此cDNA克隆到表达载体pMAL p2x中 ,经核苷酸序列测定结果正确 .在大肠杆菌TB1中通过IPTG进行诱导表达 ,融合蛋白的表达量为 8%左右 .融合蛋白通过亲和柱一... 将人工合成的寡核苷酸片段进行体外连接 ,得到编码抗栓肽 (decorsin)的cDNA .将此cDNA克隆到表达载体pMAL p2x中 ,经核苷酸序列测定结果正确 .在大肠杆菌TB1中通过IPTG进行诱导表达 ,融合蛋白的表达量为 8%左右 .融合蛋白通过亲和柱一步纯化 ,SDS PAGE显示为一条主要蛋白质电泳条带 .血小板聚集实验表明 ,融合蛋白具有较强的抑制血小板聚集的功能 ,抑制常数IC50为 3 70nmol L . 展开更多

关键词 抗栓肽 抑制 血小板聚集 表达 CDNA 基因克隆

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一种新型单链抗体血栓导向显像剂的制备和部分性质研究 被引量：3

11

作者 周波 孙艳 +2 位作者 陈昱 俞梅敏 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期781-785,共5页

利用对血栓部位活化血小板α 颗粒膜蛋白GMP 140有亲和特异性的单克隆抗体SZ5 1的血栓部位导向作用 ,并利用金属硫蛋白的高金属结合能力 ,在基因工程水平构建分子量适中的单链抗体血栓导向显像剂 .1分子单抗SZ5 1单链抗体 (ScFv SZ5 1)... 利用对血栓部位活化血小板α 颗粒膜蛋白GMP 140有亲和特异性的单克隆抗体SZ5 1的血栓部位导向作用 ,并利用金属硫蛋白的高金属结合能力 ,在基因工程水平构建分子量适中的单链抗体血栓导向显像剂 .1分子单抗SZ5 1单链抗体 (ScFv SZ5 1)与 1分子小鼠金属硫蛋白 (MT Ⅰ )cDNA的重组基因拼接产物 ,在大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)pLysS中进行发酵表达 ,重组蛋白HLMT表达量为 4 0mg L发酵液 .该重组蛋白以包涵体形式存在于菌体中 .通过一种有效的包涵体制备方法可获得目的蛋白含量为 84 %的包涵体沉淀 .在优化的条件进行了包涵体的变复性 ,复性液先后经过Q SepharoseFF阴离子交换层析和SephadexG 5 0凝胶过滤层析进行纯化 .SDS PAGE鉴定了重组蛋白纯度达 95 %以上 .HPLC进一步证明了最终纯化产品的均一性 .质谱测定HLMT分子量为 384 31 3,与理论值基本相符 .等电聚焦电泳测定pI为 3 0 .Western印迹结果表明 ,HLMT中单链抗体部分具有与活化血小板α 颗粒膜蛋白GMP 140结合特异性 .原子吸收分光光度计法 (AAS)证明 ,HLMT中金属硫蛋白保持了原金属结合活性 . 展开更多

关键词 血栓导向显像剂 金属硫蛋白 单链抗体 分离纯化 性质

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重组人三叶因子3对细胞的增殖及迁移的影响 被引量：2

12

作者 王艳茹 方敏 +3 位作者 安琳 乔玮 李令媛 茹炳根 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期582-586,共5页

将重组人三叶因子 3(Trefoilfactor 3,TFF3)作用于人结肠肿瘤细胞 ,研究重组蛋白对细胞增殖的影响 ,结果发现该蛋白在较低的浓度 (10～ 5 0mg L)下对细胞的增殖基本没有影响 ,在 10 0～2 0 0mg L浓度下该蛋白对细胞仅有微弱的刺激作用 ... 将重组人三叶因子 3(Trefoilfactor 3,TFF3)作用于人结肠肿瘤细胞 ,研究重组蛋白对细胞增殖的影响 ,结果发现该蛋白在较低的浓度 (10～ 5 0mg L)下对细胞的增殖基本没有影响 ,在 10 0～2 0 0mg L浓度下该蛋白对细胞仅有微弱的刺激作用 ,提高浓度对细胞增殖作用没有改变。同时研究了TFF3对损伤的单层结肠肿瘤细胞迁移的影响 。 展开更多

关键词 三叶因子3 增殖 迁移

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含RGD序列的山蛭素突变体的克隆、表达及性质研究

13

作者 赵菁菁 杨江峰 茹炳根 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1125-1133,共9页

根据LAP (leechantihemostaticprotein)理论 ,在分析山蛭素和decorsin结构特征的基础上 ,利用重组PCR方法 ,删除了山蛭素氨基酸序列的 33位至 35位 ,同时分别插入了RGDS和来源于decorsin的一段PRGDADP序列构建成为 2种含RGD序列的山蛭... 根据LAP (leechantihemostaticprotein)理论 ,在分析山蛭素和decorsin结构特征的基础上 ,利用重组PCR方法 ,删除了山蛭素氨基酸序列的 33位至 35位 ,同时分别插入了RGDS和来源于decorsin的一段PRGDADP序列构建成为 2种含RGD序列的山蛭素突变体 ,分别命名为HRGD1和HRGD2 .这 2种突变体在毕赤酵母菌株GS115中得到成功表达 .经过超滤、阳离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化步骤之后 ,得到纯度高于 95 %的目的蛋白 .通过以chromozymTH为底物的凝血酶酰胺水解实验和血小板聚集抑制实验证实了其体外生物学活性 ,HRGD1和HRGD2抑制凝血酶的动力学常数达到 10 -13 mol/L水平 ,抑制血小板的IC50 在 10 展开更多

关键词 凝血酶 表达 抑制 毕赤酵母菌 体外生物学 血小板聚集 RGD序列 突变体 氨基酸序列 性质研究

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