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金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达
被引量：
11
1
作者
张晓钰
李伟
+2 位作者
张竞
何笃修
茹炳根
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1999年第6期888-892,共5页
金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍ ａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋ 和Ｈｇ２＋ ．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高...
金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍ ａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋ 和Ｈｇ２＋ ．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高外源基因在烟草中的表达量，首先用ＰＣＲ 的方法设计引物，在基因翻译起始密码子ＡＴＧ 附近加入植物偏爱的碱基组合ＡＡＣＡＡＴＧ．另外，将该突变体基因插入具有双３５ Ｓ（ＣａＭＶ３５Ｓ）强启动子的植物双元表达载体ｐＧＰＴＶｄ３５Ｓ－ＢＡＲ中，获得了带有αα突变体的植物双元表达载体．通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草ＮＣ８９，获得了抗除草剂的转基因植株．经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和蛋白Ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测，证明了αα突变体在烟草中的嵌合与表达．抗重金属实验证明转基因烟草可以在Ｃｄ４００（４００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．
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关键词
突变体
烟草转基因
抗性育种
MT
重金属
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职称材料
小鼠金属硫蛋白突变体αα-cDNA在烟草中的表达及转基因烟草对Cd^(2+)抗性的提高
被引量：
12
2
作者
张晓钰
左晓峰
+2 位作者
肖传英
单龙
茹炳根
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000年第5期631-636,共6页
金属硫蛋白是一类小分子量的金属结合蛋白 ,有 β,α两个结构域 .用另一个 α结构域取代金属硫蛋白的 β结构域 ,得到突变体 αα.通过 PCR法在 αα- c DNA翻译起始密码子 ATG前加入植物偏爱的碱基组合 AACA,构建 Ca MV双 35S启动子驱...
金属硫蛋白是一类小分子量的金属结合蛋白 ,有 β,α两个结构域 .用另一个 α结构域取代金属硫蛋白的 β结构域 ,得到突变体 αα.通过 PCR法在 αα- c DNA翻译起始密码子 ATG前加入植物偏爱的碱基组合 AACA,构建 Ca MV双 35S启动子驱动的 αα- c DNA植物表达载体 p GPTVd35S-αα,此载体以抗除草剂基因 ( bar)作为选择标记物 .用根癌农杆菌介导的叶盘法对栽培种烟草 NC89进行转化 .Southern和 Western印迹分析表明突变体αα- c DNA已整合进入烟草基因组并且可以正常表达 .Northern印迹结果显示突变体αα- c DNA在烟草根部的表达强于叶部 .烟草根、茎、叶Cd2 +含量分析表明 ,转基因植物与对照相比 ,Cd2 +更多地集中在根部 ,在一定程度上降低了叶片中的 Cd2 + 含量 .Cd2 + 抗性实验进一步证明突变体αα- c DNA的表达提高了转基因烟草对 Cd2 + 的抗性 :转基因烟草在 2 0 0μmol/L Cd Cl2 条件下生长正常 ,在 40 0μmol/Cd Cl2 培养基内也可以存活 .而 1 0 0μmol/L Cd Cl2 即成为对照烟草的致死剂量 .
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关键词
金属硫蛋白突变体αα
转基因烟草
土壤污染
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职称材料
题名
金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达
被引量：
11
1
作者
张晓钰
李伟
张竞
何笃修
茹炳根
机构
北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1999年第6期888-892,共5页
文摘
金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍ ａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋ 和Ｈｇ２＋ ．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高外源基因在烟草中的表达量，首先用ＰＣＲ 的方法设计引物，在基因翻译起始密码子ＡＴＧ 附近加入植物偏爱的碱基组合ＡＡＣＡＡＴＧ．另外，将该突变体基因插入具有双３５ Ｓ（ＣａＭＶ３５Ｓ）强启动子的植物双元表达载体ｐＧＰＴＶｄ３５Ｓ－ＢＡＲ中，获得了带有αα突变体的植物双元表达载体．通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草ＮＣ８９，获得了抗除草剂的转基因植株．经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和蛋白Ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测，证明了αα突变体在烟草中的嵌合与表达．抗重金属实验证明转基因烟草可以在Ｃｄ４００（４００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．
关键词
突变体
烟草转基因
抗性育种
MT
重金属
Keywords
Metallothionein mutant,High efficient expression vector,Construction,Expression
分类号
S572.034 [农业科学—烟草工业]
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
小鼠金属硫蛋白突变体αα-cDNA在烟草中的表达及转基因烟草对Cd^(2+)抗性的提高
被引量：
12
2
作者
张晓钰
左晓峰
肖传英
单龙
茹炳根
机构
北京大学
生命科学
学院
生物
化学
与分子生物学
系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000年第5期631-636,共6页
文摘
金属硫蛋白是一类小分子量的金属结合蛋白 ,有 β,α两个结构域 .用另一个 α结构域取代金属硫蛋白的 β结构域 ,得到突变体 αα.通过 PCR法在 αα- c DNA翻译起始密码子 ATG前加入植物偏爱的碱基组合 AACA,构建 Ca MV双 35S启动子驱动的 αα- c DNA植物表达载体 p GPTVd35S-αα,此载体以抗除草剂基因 ( bar)作为选择标记物 .用根癌农杆菌介导的叶盘法对栽培种烟草 NC89进行转化 .Southern和 Western印迹分析表明突变体αα- c DNA已整合进入烟草基因组并且可以正常表达 .Northern印迹结果显示突变体αα- c DNA在烟草根部的表达强于叶部 .烟草根、茎、叶Cd2 +含量分析表明 ,转基因植物与对照相比 ,Cd2 +更多地集中在根部 ,在一定程度上降低了叶片中的 Cd2 + 含量 .Cd2 + 抗性实验进一步证明突变体αα- c DNA的表达提高了转基因烟草对 Cd2 + 的抗性 :转基因烟草在 2 0 0μmol/L Cd Cl2 条件下生长正常 ,在 40 0μmol/Cd Cl2 培养基内也可以存活 .而 1 0 0μmol/L Cd Cl2 即成为对照烟草的致死剂量 .
关键词
金属硫蛋白突变体αα
转基因烟草
土壤污染
Keywords
Metallothionein mutant αα
cDNA
Cd
2+
Resistance
分类号
X530.6 [环境科学与工程—环境工程]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达
张晓钰
李伟
张竞
何笃修
茹炳根
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1999
11
在线阅读
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职称材料
2
小鼠金属硫蛋白突变体αα-cDNA在烟草中的表达及转基因烟草对Cd^(2+)抗性的提高
张晓钰
左晓峰
肖传英
单龙
茹炳根
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000
12
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职称材料
已选择
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