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人肝癌相关新基因编码产物LAPTM4B的鉴定及其生物学特性 被引量:14
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作者 刘歆荣 周柔丽 +7 位作者 张青云 张页 邵根泽 金月英 张莎 林明 芮静安 叶大雄 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期340-347,共8页
目的 :鉴定由肝细胞癌 (HCC)相关新基因LAPTM 4B编码的蛋白质并研究其生物学特性。方法 :以Westernblot、免疫组化及双向电泳鉴定新基因的表达产物 ;以免疫共沉淀等方法研究分子间的相互作用。结果 :LAPTM4B基因编码相对分子质量分别为 ... 目的 :鉴定由肝细胞癌 (HCC)相关新基因LAPTM 4B编码的蛋白质并研究其生物学特性。方法 :以Westernblot、免疫组化及双向电泳鉴定新基因的表达产物 ;以免疫共沉淀等方法研究分子间的相互作用。结果 :LAPTM4B基因编码相对分子质量分别为 35× 10 3 和 2 4× 10 3 、等电点分别为 9.0 7和 4 .6 5的两种异型分子。它们在肝癌组织及肝癌细胞系的表达显著上调 ,而相对分子质量为 35× 10 3 者尤为明显 ,并与细胞分化程度相关。LAPTM4B蛋白可与整合素α 6亚单位及表皮生长因子 (EGF)受体形成信号复合物。结论 :LAPTM4B 35蛋白在人肝癌组织及细胞系过表达 ,并可能通过与细胞表面的整合素受体及EGF受体形成复合物而参与细胞外基质成分所启动的信号转导。 展开更多
关键词 肝癌 基因编码产物 LAPTM4B 鉴定 生物学特性 信号复合物
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肝癌中高表达的新基因LAPTM4B对细胞增殖及成瘤性的影响 被引量:13
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作者 何静 邵根泽 周柔丽 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期348-352,共5页
目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Wester... 目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B基因高表达的单克隆细胞株 ,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果 :与转染空载体的对照组相比 ,转染了LAPTM4BcDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化 ,微绒毛的数量和长度增加 ,多分枝且缠绕成团。转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附 /铺展能力增强。生长曲线显示转染细胞的生长速率增高。流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多 ,而G0 ~G1期细胞数减少。Western杂交显示CyclinE蛋白在转染细胞中的表达显著增加。转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性。结论 :LAPTM 4B基因能影响细胞增殖的调节 ,促进NIH3T3细胞的增殖 ,并使NIH3T3细胞具有成瘤性 ,在肿瘤发生过程中具有重要的作用。 展开更多
关键词 肝癌 表达 基因 LAPTM4B 细胞增殖 成瘤性
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轴突影响施万细胞分化与整合素α_6β_4表达
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作者 钟延丰 任碧和 +5 位作者 王立军 由江峰 王盛兰 王薇 杨金辉 胡白和 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期122-126,共5页
目的 :探讨轴突对施万细胞 (Schwanncells,SC)分化成熟与髓鞘形成的影响 ,及在SC的极向分化过程中整合素α6β4 的表达。方法 :用Wistar乳鼠坐骨神经分离SC ,用其脊髓分离神经细胞。经纯化后分别培养及共同培养。用扫描电镜观察二者的... 目的 :探讨轴突对施万细胞 (Schwanncells,SC)分化成熟与髓鞘形成的影响 ,及在SC的极向分化过程中整合素α6β4 的表达。方法 :用Wistar乳鼠坐骨神经分离SC ,用其脊髓分离神经细胞。经纯化后分别培养及共同培养。用扫描电镜观察二者的形态及髓鞘形成情况 ;分别用髓鞘碱性蛋白 (myelinbasicprotein ,MBP)、神经微丝 (neu rofilament ,NF)抗体进行免疫标记 ;采用原位杂交技术检测整合素α6β4 mRNA的表达。结果 :单独培养的SCMBP抗原表达阴性 ;原位杂交检测α6β4 表达阴性。SC与神经细胞共同培养时其MBP阳性 (说明其已转变为髓鞘形成细胞 ) ,在神经突起周围表达阳性 ;扫描电镜可见SC与神经细胞贴附、融合、包绕轴突形成髓鞘 ;原位杂交显示α6β4在SC与神经轴突相贴附处呈线状阳性表达。结论 :SC的分化成熟及髓鞘形成呈轴突依赖性 ,仅在与神经细胞共同培养时 ,才开始形成髓鞘。它在包绕轴突形成髓鞘时 ,α6β4 在SC表面沿基膜呈方向性表达 ,在SC与基膜、细胞外基质之间起信号传导作用 ,使增生的SC具有极性并发生形态结构的改变。在SC的分化成熟及髓鞘形成的过程中 。 展开更多
关键词 SC培养 轴突 整合素Α6Β4 髓鞘形成 施万细胞
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前列腺癌患者外周血中前列腺特异抗原,前列腺特异膜抗原和人腺体激肽释放酶mRNA的表达及临床意义 被引量:1
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作者 徐涛 陈希 +4 位作者 王晓峰 侯树坤 朱积川 张小东 黄晓波 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期164-168,共5页
目的 :采用巢式RT -PCR方法 ,检测前列腺癌合并骨转移的患者外周血中前列腺特异抗原 (PSA)、前列腺特异膜抗原 (PSMA)和人腺体激肽释放酶mRNA的表达 ,探讨其临床意义。方法 :应用巢式RT -PCR的方法 ,检测外周血中PSA、PSMA和hK2mRNA表... 目的 :采用巢式RT -PCR方法 ,检测前列腺癌合并骨转移的患者外周血中前列腺特异抗原 (PSA)、前列腺特异膜抗原 (PSMA)和人腺体激肽释放酶mRNA的表达 ,探讨其临床意义。方法 :应用巢式RT -PCR的方法 ,检测外周血中PSA、PSMA和hK2mRNA表达。结果 :巢式PCR能够检测到经淋巴细胞稀释的LNCaP细胞的PSA、PSM和hK2mRNA的灵敏度 ,稀释浓度分别为 1 0 -6、1 0 -6及 1 0 -7。检测初发伴骨转移的前列腺癌患者外周血PSA、PSMA和hK2mRNA的阳性率分别为 5 9.4 5 %、5 1 .35 %、5 9.4 6 % ,其中三种检测同时阳性的为 32 .4 3% ;检测接受内分泌治疗后出现骨转移的前列腺癌患者的阳性率分别为 5 7.1 4 %、85 .71 %、83.33% ,其中三种检测同时阳性的为 5 2 .4 8%。局限性前列腺癌患者、健康男性及健康女性的检测结果均为阴性。以 β actinmRNA做为内参照 ,所有临床标本检测均为阳性。结论 :采用巢式RT PCR检测前列腺癌患者外周血PSMA、hK2和PSAmRNA有助于发现进入循环系统的前列腺癌细胞 ,提示隐匿性转移的存在。PSMA和hK2较适合用于内分泌治疗后患者的检测。 展开更多
关键词 前列腺癌 外周血 前列腺特异抗原 激肽释放酶 临床意义 巢式RT-PCR 骨转移癌
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LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建 被引量:1
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作者 彭方毅 张青云 +2 位作者 周柔丽 邵根泽 涂植光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第3期337-339,共3页
目的:LAPTM4B基因是肝癌中高度表达的新基因。为下一步LAPTM4B启动子的活性分性,本文构建了LAPTM4B基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。方法:以LAPTM4B基因组cDNA为模板扩增翻译起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶... 目的:LAPTM4B基因是肝癌中高度表达的新基因。为下一步LAPTM4B启动子的活性分性,本文构建了LAPTM4B基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。方法:以LAPTM4B基因组cDNA为模板扩增翻译起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中,并经限制性内切酶消化鉴定。结果:通过酶切鉴定和基因测序,证明成功地构建了三种不同长度的pGL3-LAPTM4B-Luc荧光素酶表达质粒,形成了系列的LAPTM4B启动子重组体。结论:充分利用生物信息学资源,利用已知基因的启动子序列,可快速,准确地克隆已知基因启动子序列并构建启动子载体。LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建为LAPTM4B启动子的活性分析奠定了基础。 展开更多
关键词 LAPTM4B 基因表达 启动子
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