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白细胞介素2促进宫颈癌细胞系HeLaS3免疫球蛋白G的表达 被引量:1
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作者 卢恬 朱晓辉 +2 位作者 柳世庆 郑杰 邱晓彦 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期158-161,共4页
目的:探讨白细胞介素2(interleukin2,IL-2)对宫颈癌细胞系HeLaS3表达免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)的影响。方法:用免疫荧光-流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测IL-2刺激后HeLaS3胞膜和胞内IgG表达变化;用Western blot检测IL-2刺... 目的:探讨白细胞介素2(interleukin2,IL-2)对宫颈癌细胞系HeLaS3表达免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)的影响。方法:用免疫荧光-流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测IL-2刺激后HeLaS3胞膜和胞内IgG表达变化;用Western blot检测IL-2刺激HeLaS3后IgG的表达变化;用同时能扩增IgG四个亚类的引物,以RT-PCR法,从mRNA水平检测IL-2刺激后,HeLaS3γ链转录水平的变化。结果:免疫荧光-FCM结果显示,IL-2刺激48h后HeLaS3胞膜和胞内IgG表达明显上调;Western blot结果显示IL-2刺激48h后HeLaS3胞内IgG表达水平明显上调;RT-PCR显示IL-2刺激48h后HeLaS3γ链转录水平有所上升。结论:IL-2能促进HeLaS3IgG的表达。 展开更多
关键词 白细胞介素2 宫颈肿瘤 免疫球蛋白G 细胞系 肿瘤
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抗人趋化素样因子1羧基端多肽抗体的制备、鉴定及组织芯片分析 被引量:2
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作者 石爽 张颖妹 +7 位作者 邱晓彦 朱晓辉 刘雅楠 甘启霓 杨田 宋泉声 马大龙 韩文玲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期496-499,i001,共5页
目的制备及鉴定抗人趋化素样因子1(CKLF1)多克隆抗体,为CKLF1表达和功能研究提供基础。方法利用生物信息学方法分析CKLF1蛋白序列,设计、合成CKLF1羧基端多肽,与钥孔戚血蓝素穴KLH雪偶联,免疫新西兰白兔获得多克隆抗体。经ELISA法测定... 目的制备及鉴定抗人趋化素样因子1(CKLF1)多克隆抗体,为CKLF1表达和功能研究提供基础。方法利用生物信息学方法分析CKLF1蛋白序列,设计、合成CKLF1羧基端多肽,与钥孔戚血蓝素穴KLH雪偶联,免疫新西兰白兔获得多克隆抗体。经ELISA法测定抗体效价,Western-blot鉴定抗体与原核细胞体外翻译和果蝇S2细胞稳定转染表达的CKLF1反应,组织芯片检测该抗体与内源性表达的CKLFs结合。结果抗CKLF1C端多肽抗体的效价为10-4,能识别在原核细胞体外翻译系统和真核细胞中表达的CKLF1蛋白,也可与多种组织中天然表达的CKLFs发生特异性反应熏在正常支气管软骨、胃粘膜和平滑肌中呈阳性表达,在正常直肠和高分化直肠癌的腺上皮中呈强阳性表达,而在低分化的直肠癌中为阴性。结论抗CKLF1多克隆抗体效价高,亲和力强,可用于CKLF1的检测和研究。 展开更多
关键词 趋化素样因子1 抗多肽抗体 组织芯片
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新的潜在的雄激素受体协同抑制因子CMTM1-v17 被引量:3
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作者 朱炳梅 李婷 +2 位作者 周玉玲 宋泉声 王露 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期388-393,共6页
目的:研究CMTM1-v17(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing family 1-variant17)在正常前列腺及前列腺癌来源细胞系中的表达,初步探索CMTM1-v17对雄激素受体(androgen receptor,AR)转录活性的影响及其作用机制。方法:用免... 目的:研究CMTM1-v17(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing family 1-variant17)在正常前列腺及前列腺癌来源细胞系中的表达,初步探索CMTM1-v17对雄激素受体(androgen receptor,AR)转录活性的影响及其作用机制。方法:用免疫组织化学和免疫细胞化学染色的方法分析CMTM1-v17在正常人前列腺组织和前列腺癌来源细胞系中的表达。用荧光素酶报告系统研究CMTM1-v17对AR转录活性的影响及作用机制。结果:CMTM-v17在正常前列腺和前列腺癌来源的LNCaP,Du145和PC3细胞均有表达。荧光素酶报告系统的结果提示在二氢睾酮(5α-dihydrotestosterone,DHT)存在的情况下,将空载体对照组的荧光强度设为100,超表达1μgCMTM1-v17后的相对荧光强度仅为70.8,而超表达2μgCMTM1-v17后的相对荧光强度下降到34.7。当细胞用DHT刺激、同时用组蛋白去乙酰转移酶(histone deacetylase,HDAC)的抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)后,则超表达1μgCMTM1-v17后的相对荧光强度和超表达2μgCMTM1-v17后的相对荧光强度分别从70.8和34.7上升至90.9和86.4。结论:CMTM1-v17在正常前列腺中和前列腺癌来源的细胞系中都有较高丰度的表达,它可能是潜在的AR协同抑制因子,并通过募集HDAC发挥其抑制功能。 展开更多
关键词 受体 雄激素 CMTM1 转录因子
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人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定 被引量:2
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作者 马靖 裴晓磊 +1 位作者 张扬 王应 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期669-675,共7页
目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础。方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMPmyc/His片段,插入pMH3表达载体。利用电... 目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础。方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMPmyc/His片段,插入pMH3表达载体。利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株。以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性。结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株。镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95%以上且具有生物学活性。结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具。 展开更多
关键词 PC3-分泌微量蛋白 CHO细胞 遗传 重组 基因表达 分离和提纯
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C17orf62诱导细胞死亡的作用及其机制
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作者 邓暄 赵红珊 +4 位作者 彭智 邓唯唯 李娜 郭帅 石太平 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期168-172,共5页
目的:克隆功能未知的人类新基因C17orf62的长编码序列(C17orf62-L),分析其在细胞系中的表达情况,研究其在细胞内定位情况及其对细胞活力的影响。方法:利用GenBank中的数据,通过聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)从人的cDNA文... 目的:克隆功能未知的人类新基因C17orf62的长编码序列(C17orf62-L),分析其在细胞系中的表达情况,研究其在细胞内定位情况及其对细胞活力的影响。方法:利用GenBank中的数据,通过聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)从人的cDNA文库中克隆C17orf62编码187个氨基酸的长编码序列C17orf62-L,运用生物信息学分析其结构特性。通过逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)分析C17orf62在细胞系中的表达情况。经激光共聚焦显微镜观察C17orf62-L的亚细胞定位情况。使用流式细胞检测以及Western blot实验,分析C17orf62-L对细胞活力的影响及其机制。结果:生物信息学分析显示,C17orf62-L具有信号肽切割位点并包含跨膜结构域。RT-PCR证明C17orf62-L在多种细胞系广泛表达;激光共聚焦实验证实,C17orf62-L广泛分布于胞质,并且与高尔基体部分共定位。功能分析发现,C17orf62-L可诱导细胞死亡,且可通过多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)切割发挥作用。结论:C17orf62是一个新的人类细胞死亡诱导基因。 展开更多
关键词 C17orf62 基因表达 细胞死亡 聚ADP核糖聚合酶类
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