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构建一种可评价脂肪间充质干细胞成骨向分化的荧光素酶报告系统
被引量：
1
1
作者
葛雯姝
汤祎熳
+2 位作者
张晓
刘云松
周永胜
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期170-174,共5页
目的:构建一种可用于评价人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,h ASCs)成骨向分化的荧光素酶报告系统,以期能够快捷、特异且定量的检测出细胞在体外的成骨向分化情况,并且使将来活体监测小型实验动物外源移植细胞的成...
目的:构建一种可用于评价人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,h ASCs)成骨向分化的荧光素酶报告系统,以期能够快捷、特异且定量的检测出细胞在体外的成骨向分化情况,并且使将来活体监测小型实验动物外源移植细胞的成骨分化成为可能。方法:将骨钙素(osteocalsin,OC)基因的启动子克隆到荧光素酶luciferase报告基因的上游,构建p LVX-OC_(pro)-Luc-Puro载体,进行慢病毒包装后感染人脂肪间充质干细胞,嘌呤霉素(puromycin)筛选阳性克隆,获得稳定整合OC_(pro)-Luc-Puro的细胞株,将该细胞在成骨诱导培养基中培养的第7和14天,观察其在成骨诱导环境下分化的情况。在成骨诱导培养的第7和14天检测荧光素酶的活性,同时进行茜素红(Alizarin red S)染色定量及成骨相关基因表达水平的检测,通过比较验证该荧光素酶报告系统用于成骨评价的可行性。结果:成功构建p LVX-OC_(pro)-Luc-Puro载体获得稳定整合报告基因的h ASCs细胞株。在OC_(pro)-Luc-Puroh ASCs成骨诱导的第7和14天,茜素红钙化结节染色结果均为阳性,且第14天的染色及定量结果明显强于第7天。OC、Runx2及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)基因的mRNA水平在成骨分化刺激下,其表达水平逐渐上升,同时,荧光素酶被激活,且荧光素酶的活性在第14天明显强于第7天,即荧光素酶表达的趋势与茜素红染色定量及成骨相关基因表达水平一致。结论:成功构建了一种可用于评价成骨向分化的荧光素酶报告系统,并通过与传统的检测成骨向分化方法(茜素红染色定量、成骨相关基因表达)对比,验证了该系统的有效性。
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关键词
荧光素酶类
脂肪组织
间充质干细胞
骨生成
细胞分化
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职称材料
尼古丁和牙龈卟啉单胞菌脂多糖影响单核细胞黏附血管内皮细胞的分子机制
2
作者
王衣祥
安娜
欧阳翔英
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期809-813,共5页
目的:研究牙龈卟啉单胞菌和尼古丁影响动脉粥样硬化的初步分子机制。方法:在单核细胞U937细胞中,用CCK-8法检测尼古丁、牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)及二者联合对U937细胞增殖能力的影响...
目的:研究牙龈卟啉单胞菌和尼古丁影响动脉粥样硬化的初步分子机制。方法:在单核细胞U937细胞中,用CCK-8法检测尼古丁、牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)及二者联合对U937细胞增殖能力的影响;实时定量荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)检测尼古丁对P.g-LPS诱导炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6能力的影响。在血管内皮细胞中,用Real-time PCR和蛋白印记杂交实验检测尼古丁、P.g-LPS及二者联合应用对单核细胞趋化因子(C-C模体)配体8[chemokine(C-C motif)ligand 8,CCL-8]和血管细胞黏附因子1(vascular cell adhesion molecule 1,Vcam-1)、非常晚期抗原4α(very late antigen 4 alpha,VLA4α)、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40)和其配体(OX40 ligand,OX40L)的表达的影响。同时,在尼古丁和P.g-LPS共同作用下,用黏附实验检测单核细胞与血管内皮细胞的黏附能力。结果:P.g-LPS并不影响尼古丁促进单核细胞系U937增殖的作用,100μmol/L尼古丁能抑制P.g-LPS诱导U937细胞产生IL-6的能力。在血管内皮细胞中,与对照和单一药物处理相比,尼古丁和P.g-LPS共同作用可以促进其表达CCL-8及Vcam-1、VLA4α、OX40和OX40L。黏附实验结果显示,尼古丁和P.g-LPS共同刺激可以明显提高单核细胞黏附血管内皮细胞的能力。结论:牙龈卟啉单胞菌和尼古丁可能通过上调CCL-8表达募集单核细胞到血管内皮损伤处,并通过增强黏附分子Vcam-1/VLA4α及OX40L/OX40的相互作用,促进单核细胞与血管内皮细胞黏附,参与动脉粥样硬化病损的启动和形成。
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关键词
尼古丁
牙龈卟啉单胞菌
动脉粥样硬化
细胞黏附分子
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职称材料
题名
构建一种可评价脂肪间充质干细胞成骨向分化的荧光素酶报告系统
被引量：
1
1
作者
葛雯姝
汤祎熳
张晓
刘云松
周永胜
机构
北京大学口腔医学院.口腔医院综合二科
{0
.口腔
医学院
.口腔
医院
修复
科
出处
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期170-174,共5页
基金
国家自然科学基金(81200763)资助~~
文摘
目的:构建一种可用于评价人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,h ASCs)成骨向分化的荧光素酶报告系统,以期能够快捷、特异且定量的检测出细胞在体外的成骨向分化情况,并且使将来活体监测小型实验动物外源移植细胞的成骨分化成为可能。方法:将骨钙素(osteocalsin,OC)基因的启动子克隆到荧光素酶luciferase报告基因的上游,构建p LVX-OC_(pro)-Luc-Puro载体,进行慢病毒包装后感染人脂肪间充质干细胞,嘌呤霉素(puromycin)筛选阳性克隆,获得稳定整合OC_(pro)-Luc-Puro的细胞株,将该细胞在成骨诱导培养基中培养的第7和14天,观察其在成骨诱导环境下分化的情况。在成骨诱导培养的第7和14天检测荧光素酶的活性,同时进行茜素红(Alizarin red S)染色定量及成骨相关基因表达水平的检测,通过比较验证该荧光素酶报告系统用于成骨评价的可行性。结果:成功构建p LVX-OC_(pro)-Luc-Puro载体获得稳定整合报告基因的h ASCs细胞株。在OC_(pro)-Luc-Puroh ASCs成骨诱导的第7和14天,茜素红钙化结节染色结果均为阳性,且第14天的染色及定量结果明显强于第7天。OC、Runx2及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)基因的mRNA水平在成骨分化刺激下,其表达水平逐渐上升,同时,荧光素酶被激活,且荧光素酶的活性在第14天明显强于第7天,即荧光素酶表达的趋势与茜素红染色定量及成骨相关基因表达水平一致。结论:成功构建了一种可用于评价成骨向分化的荧光素酶报告系统,并通过与传统的检测成骨向分化方法(茜素红染色定量、成骨相关基因表达)对比,验证了该系统的有效性。
关键词
荧光素酶类
脂肪组织
间充质干细胞
骨生成
细胞分化
Keywords
Luciferases
Adipose tissue
Mesenchymal stromal cells
0steogenesis
Cell differentiation
分类号
R329.28 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
尼古丁和牙龈卟啉单胞菌脂多糖影响单核细胞黏附血管内皮细胞的分子机制
2
作者
王衣祥
安娜
欧阳翔英
机构
{0
.口腔
医学院
.口腔
医院
中心实验室
北京大学口腔医学院.口腔医院综合二科
{0
.口腔
医学院
.口腔
医院
牙周
科
出处
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期809-813,共5页
基金
科技部国际合作计划基金(1019)资助~~
文摘
目的:研究牙龈卟啉单胞菌和尼古丁影响动脉粥样硬化的初步分子机制。方法:在单核细胞U937细胞中,用CCK-8法检测尼古丁、牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)及二者联合对U937细胞增殖能力的影响;实时定量荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)检测尼古丁对P.g-LPS诱导炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6能力的影响。在血管内皮细胞中,用Real-time PCR和蛋白印记杂交实验检测尼古丁、P.g-LPS及二者联合应用对单核细胞趋化因子(C-C模体)配体8[chemokine(C-C motif)ligand 8,CCL-8]和血管细胞黏附因子1(vascular cell adhesion molecule 1,Vcam-1)、非常晚期抗原4α(very late antigen 4 alpha,VLA4α)、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40)和其配体(OX40 ligand,OX40L)的表达的影响。同时,在尼古丁和P.g-LPS共同作用下,用黏附实验检测单核细胞与血管内皮细胞的黏附能力。结果:P.g-LPS并不影响尼古丁促进单核细胞系U937增殖的作用,100μmol/L尼古丁能抑制P.g-LPS诱导U937细胞产生IL-6的能力。在血管内皮细胞中,与对照和单一药物处理相比,尼古丁和P.g-LPS共同作用可以促进其表达CCL-8及Vcam-1、VLA4α、OX40和OX40L。黏附实验结果显示,尼古丁和P.g-LPS共同刺激可以明显提高单核细胞黏附血管内皮细胞的能力。结论:牙龈卟啉单胞菌和尼古丁可能通过上调CCL-8表达募集单核细胞到血管内皮损伤处,并通过增强黏附分子Vcam-1/VLA4α及OX40L/OX40的相互作用,促进单核细胞与血管内皮细胞黏附,参与动脉粥样硬化病损的启动和形成。
关键词
尼古丁
牙龈卟啉单胞菌
动脉粥样硬化
细胞黏附分子
Keywords
Nicotine
Porphyromonas gingivalis
Atherosclerosis
Cell adhesion molecules
分类号
R781.42 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
构建一种可评价脂肪间充质干细胞成骨向分化的荧光素酶报告系统
葛雯姝
汤祎熳
张晓
刘云松
周永胜
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
在线阅读
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职称材料
2
尼古丁和牙龈卟啉单胞菌脂多糖影响单核细胞黏附血管内皮细胞的分子机制
王衣祥
安娜
欧阳翔英
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
在线阅读
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已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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