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非甾体类抗炎药对人牙髓细胞的抗炎修复作用 被引量：3
1
作者 李婧宜 王赛楠 董艳梅 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期24-29,共6页
目的:研究不同非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)的抗炎和修复作用,探索可适宜于牙髓炎活髓保存治疗的药物。方法:取新鲜拔除的人类第三磨牙的牙髓进行hDPCs... 目的:研究不同非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)的抗炎和修复作用,探索可适宜于牙髓炎活髓保存治疗的药物。方法:取新鲜拔除的人类第三磨牙的牙髓进行hDPCs原代培养,消化传代至4~6代,向培养基中加入1 mg/L脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)培养24 h,获得LPS刺激后的hDPCs(LPS-hDPCs),实验组使用含有不同浓度(1、10、100μmol/L)NSAIDs(阿司匹林或美洛昔康)的培养基培养LPS-hDPCs,普通培养基作为阴性对照组。采用MTT法在第1、3、5、7天对细胞增殖活力进行检测,采用real-time PCR法于6 h检测炎症基因白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;培养7 d后检测成牙分化基因牙本质基质蛋白(dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因表达;采用茜素红染色法于第14天检测矿化结节形成,氯化十六烷基吡啶进行矿化结节钙半定量检测。结果:MTT结果显示,1~100μmol/L阿司匹林或美洛昔康对hDPCs增殖具有显著促进作用(P<0.05),该促进作用呈浓度依赖性。1~100μmol/L美洛昔康或100μmol/L阿司匹林均可显著下调LPS-hDPCs炎症基因TNF-α和IL-6表达(P<0.05),且100μmol/L美洛昔康的该作用效果显著强于100μmol/L阿司匹林(P<0.05)。100μmol/L美洛昔康可以显著促进LPS-hDPCs成牙向分化基因DSPP、DMP-1的表达和矿化(P均<0.05)。结论:美洛昔康可促进hDPCs增殖,在有效抑制炎症因子升高的同时,可促进炎症状态下hDPCs的成牙本质向分化和矿化,美洛昔康可能在牙髓炎症中发挥抗炎和促进修复的作用。 展开更多
关键词 消炎药 非甾类 脂多糖类 牙髓 细胞 培养的 美洛昔康
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可注射羟乙基壳聚糖基水凝胶理化性能及其对人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化的作用 被引量：6
2
作者 曹春玲 杨聪翀 +2 位作者 屈小中 韩冰 王晓燕 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期10-17,共8页
目的:制备羟乙基壳聚糖(glycol-chitosan,GC)基单/双网络水凝胶,比较人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)在水凝胶内三维培养增殖和分化情况,探究GC基单/双网络水凝胶及其理化性能对hDPCs生物学行为的影响。方法:制备不同组成配... 目的:制备羟乙基壳聚糖(glycol-chitosan,GC)基单/双网络水凝胶,比较人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)在水凝胶内三维培养增殖和分化情况,探究GC基单/双网络水凝胶及其理化性能对hDPCs生物学行为的影响。方法:制备不同组成配比的GC基单网络水凝胶(GC31)和GC基双网络水凝胶(DN3131、DN6262)。用双联注射器在恒力下推注GC基单/双网络水凝胶,测定其可注射性能。用失重法测定水凝胶的体外耐降解性能,并用万能力学试验机测定材料断裂应力。在水凝胶内包封hDPCs进行三维培养,用CCK-8法和Calcein-AM/PI活死细胞染色法测定hDPCs的增殖情况。成牙本质向诱导培养14 d后,用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-PCR)测定各组成牙本质向分化相关基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白(dentin matrix protein-1,DMP-1)和矿化相关基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达变化,用Von Kossa染色法观察矿化结节的形成。结果:3组水凝胶均具有良好的可注射性能,GC31推注时间最短,DN6262推注时间较DN3131长(P<0.05)。GC31水凝胶在体外降解速率高于双网络水凝胶组(P<0.05),DN3131和DN6262的降解速率差异无统计学意义(P>0.05)。GC31断裂应力为1.10 kPa,DN3131和DN6262断裂应力分别为7.33 kPa和43.30 kPa,双网络水凝胶的抗压缩性能较单网络水凝胶有明显增强。hDPCs在3种水凝胶内均处于良好的增殖状态,GC31组的增殖能力高于DN3131和DN6262组(P<0.05),DN3131组的增殖能力高于DN6262组(P<0.05)。在成牙本质向诱导培养14 d后,DN3131和DN6262组的DSPP、DMP-1、ALP表达水平较GC31组升高(P<0.05),DN3131和DN6262组的DMP-1和ALP表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。DN3131和DN6262组体外培养2周后均可见明显生成棕黑色的团块状矿化结节,而GC31组仅观察到浅棕色钙沉积染色,为零星颗粒状散在分布。结论:不同组成配比的GC基单/双网络水凝胶均满足可注射需求,GC单网络水凝胶力学性能较低,hDPCs在其中表现出更好的增殖能力;而双网络水凝胶具备更好的耐降解性能和更高的力学性能,hDPCs在其中表现出更好的成牙本质向分化潜力和矿化潜力。 展开更多
关键词 可注射水凝胶 牙髓再生 支架 双网络水凝胶
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胞内转运对根尖牙乳头干细胞表面CXC趋化因子受体4表达的影响 被引量：2
3
作者 姚心韵 高晓敏 +1 位作者 邹晓英 岳林 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期893-899,共7页
目的:探讨胞内转运途径受到抑制后,根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)表面CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)表达的变化,为了解SCAP迁移机制提供实验依据。方法:采用免疫荧光共染色方法和原位邻... 目的:探讨胞内转运途径受到抑制后,根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)表面CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)表达的变化,为了解SCAP迁移机制提供实验依据。方法:采用免疫荧光共染色方法和原位邻近连接技术(proximity ligation assay,PLA)检测SCAP胞内CXCR4与细胞胞内转运相关细胞器标记蛋白的共定位,检测指标包括早期胞内体标记蛋白Rab5、循环胞内体标记蛋白Rab11A、溶酶体标记蛋白Lamp1。分别采用80μmol/L的内吞抑制剂Blebbistatin、80μmol/L的内吞抑制剂Dyanasore对SCAP进行预处理1 h,流式细胞分析方法检测表面阳性表达CXCR4的SCAP所占百分比,使用单因素方差分析进行统计学分析。结果:免疫荧光共染色结果显示,CXCR4在SCAP胞内的表达位置与早期胞内体标记物Rab5、循环胞内体标记物Rab11A的表达位置重合,小部分与溶酶体标记物Lamp1的表达位置重合。PLA结果显示,CXCR4在SCAP胞内与Rab5、Rab11A、Lamp1均存在共定位。阴性对照组SCAP CXCR4阳性表达的细胞为0.13%±0.10%,经Blebbistatin、Dynasore抑制内吞后,表面CXCR4阳性表达的SCAP显著增多,分别为13.34%±1.31%、4.03%±0.92%,差异有统计学意义(F=161.762,P<0.001),且Blebbistatin组多于Dynasore组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:采用内吞抑制剂抑制CXCR4的胞内转运途径,可使表面表达CXCR4的SCAP增多,提升了SCAP迁移的潜能。 展开更多
关键词 CXC趋化因子受体4 根尖牙乳头干细胞 迁移 胞内转运
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根尖牙乳头干细胞摄取外泌体的介导途径 被引量：1
4
作者 高晓敏 邹晓英 岳林 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期43-50,共8页
目的:探讨根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)摄取牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)外泌体的作用,为揭示其内吞外泌体的途径提供依据。方法:(1)采用超速离心法结合超滤法提取DPSCs外泌体,采用透射电镜观... 目的:探讨根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)摄取牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)外泌体的作用,为揭示其内吞外泌体的途径提供依据。方法:(1)采用超速离心法结合超滤法提取DPSCs外泌体,采用透射电镜观察法、纳米粒子示踪分析法以及Western Blot对其进行鉴定。(2)采用PKH-26膜标记技术标记DPSCs外泌体,37℃条件下将其与SCAP共培养作为阳性对照组,4℃条件下将其与SCAP共培养作为低温处理组,同时设置阴性对照组。采用免疫荧光染色法观察不同培养温度条件下SCAP内红色荧光标记情况。(3)通过胞吞抑制方法观察SCAP摄取外泌体的胞吞途径,分别采用10μmol/L氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ,抑制网格蛋白介导的胞吞途径)作为CPZ组、200μmol/L金雀异黄素(genistein,抑制小窝蛋白介导的胞吞途径)作为Genistein组、50μmol/L LY294002抑制巨胞饮(macropinocytosis)作用作为LY294002组处理SCAP,将PKH-26标记的DPSCs外泌体与SCAP共培养,同时设置溶剂对照组(添加与抑制剂组等量的DMSO),采用免疫荧光染色技术观察SCAP内红色荧光标记情况和流式细胞技术分析有红色荧光标记的SCAP百分比。结果:(1)DPSCs外泌体形态呈茶托样,具有双层膜结构,粒径峰值为144 nm,能够表达肿瘤易感基因(tumor susceptibility gene、TSG)101蛋白、CD63蛋白,二者皆为外泌体标志蛋白,符合外泌体特征。(2)免疫荧光结果显示,37℃共培养6 h后可见SCAP内有大量红色荧光(PKH-26)标记,而4℃共培养6 h后,SCAP内未见明显红色荧光(PKH-26)标记。(3)免疫荧光结果显示胞吞抑制后,SCAP内部红色荧光(PKH-26)标记减少,流式结果显示阳性对照组红色荧光标记的SCAP占35.0%,阴性对照组红色荧光标记的SCAP占0.5%,溶剂对照组红色荧光标记的SCAP占29.7%,CPZ组、Genistein组、LY294002组分别下降至13.7%、16.6%、20.9%。结论:SCAP能够摄取DPSCs外泌体,低温可影响该摄取过程;SCAP摄取外泌体主要依赖网格蛋白介导的胞吞途径、小窝蛋白介导的胞吞途径以及巨胞饮途径。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 根尖牙乳头干细胞 外泌体 胞吞途径
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生物活性玻璃对人脐静脉血管内皮细胞增殖及成血管的作用 被引量：4
5
作者 黄丽东 宫玮玉 董艳梅 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期371-377,共7页
目的:研究以植酸为前驱体制备的生物活性玻璃(phytic acid derived bioactive P2O5-SiO2-CaO gel-glasses,PSC)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、分化及体外成血管的作用。方法:用内皮细胞培养... 目的:研究以植酸为前驱体制备的生物活性玻璃(phytic acid derived bioactive P2O5-SiO2-CaO gel-glasses,PSC)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、分化及体外成血管的作用。方法:用内皮细胞培养基(endothelial cell medium,ECM)按梯度浓度(0.01、0.1、1和2 g/L)分别制备PSC浸提液培养HUVECs,在第1、3、5、7、10天采用甲基噻唑基四唑[(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法对细胞的增殖能力进行检测,并与ECM培养的对照组HUVECs进行比较。根据增殖实验结果,选择最适宜HUVECs生长的PSC浸提液浓度用于后续实验。后续实验分为两组:实验组用PSC浸提液培养HUVECs(PSC组),对照组用ECM培养HUVECs(ECM组)。采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)于第2、4、7天检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的基因表达;通过小管形成实验观察第4、10小时PSC浸提液对HUVECs形成小管的形态与数目的影响,并用Image J软件定量分析。结果:用MTT法筛选最适生长浓度,结果提示0.1 g/L PSC浸提液对HUVECs的增殖促进作用最为显著,在第5、7天时细胞光密度值显著高于其他浓度实验组及对照组(P<0.05)。0.1 g/L PSC组可显著上调HUVECs成血管基因VEGF、bFGF的表达(P<0.05);第4天时,PSC组VEGF、bFGF的基因表达量分别是ECM组的1.59和1.45倍;第7天时,PSC组VEGF、bFGF的基因表达量分别是ECM组的1.98和1.37倍。在小管形成实验第10小时,PSC组小管的成熟度与密度优于ECM组,PSC组的小管数目(29.63±2.29)高于ECM组(20.13±2.36),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PSC具有促进HUVECs增殖、分化及体外成血管的作用。 展开更多
关键词 生物活性玻璃 组织工程 血管再生 人脐静脉血管内皮细胞
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扫频光学相干断层扫描根管内窥影像系统的建立及其在根裂诊断的应用 被引量：1
6
作者 戚苈源 陈晨 +2 位作者 姜岚 李嘉男 梁宇红 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期753-757,共5页
目的:建立扫频光学相干断层扫描(swept source-optical coherence tomography, SS-OCT)根管内窥影像系统,并评价该系统应用于诊断模拟根管内壁裂的准确性。方法:自主研发基于压电调谐滤波器并应用傅里叶(Fourier)域锁模技术构建的40 kH... 目的:建立扫频光学相干断层扫描(swept source-optical coherence tomography, SS-OCT)根管内窥影像系统,并评价该系统应用于诊断模拟根管内壁裂的准确性。方法:自主研发基于压电调谐滤波器并应用傅里叶(Fourier)域锁模技术构建的40 kHz超高速扫频激光光源系统(专利号200620135940.2),利用超微型梯度折射率透镜(专利号201320241218.7)制作极细根管内窥探头(直径0.86 mm),实现实时成像传输。构建的SS-OCT根管内窥影像系统扫频光源中心波长为1 310 nm,带宽为100 nm;扫描图像的横向和纵向分辨率分别为25 μm和15 μm。利用人离体下颌前磨牙牙根制作人工模拟根裂(内壁裂),并制备高度1 mm的牙根横断面切盘。立体显微镜下观察发现,41个待测样本中有27个根管内壁裂样本(宽度在52~284 μm),另14个样本无根裂。应用上述构建的SS-OCT根管内窥影像系统扫描待测样本,重建图像的层厚为30 μm,层间距为30 μm。对1名口腔放射科医师和1名牙体牙髓科医师进行培训,判读SS-OCT扫描重建图像,判读根管内壁裂的有无及具体位置,评价两名观察者的自身一致性和观察者之间的一致性。以立体显微镜(组织学)检查结果作为金标准,评价应用SS-OCT根管内窥影像系统诊断模拟根管内壁裂的准确性。结果:两位观察者自身一致性的Kappa值分别为1.000和0.709,观察者之间的Kappa值为0.792。应用SS-OCT根管内窥影像系统扫描后27个根裂样本均被正确诊断,灵敏度为1.000,14个无根裂的样本有12个被正确判读,特异度为0.857, 2个无根裂样本被判读为有根裂,为假阳性。阳性预测值、阴性预测值分别为0.931、1.000,准确性为0.951。结论:扫频光学相干断层扫描根管内窥影像系统应用于观察根管内壁裂有临床应用前景。 展开更多
关键词 扫频光学相干断层扫描 根管内窥 人工模拟根裂
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利用近场微波系统检测不同方法干燥根管的效果
7
作者 王佳莎 王培育 梁宇红 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1124-1129,共6页
目的:建立近场微波检测系统,并评价其测量含水量的准确性,观察不同方法干燥根管的效果。方法:构建近场微波反射检测系统,检测Eppendorf管中、离体牙根管内已知定量的蒸馏水并记录微波反射系数,评价近场微波系统测量含水量的准确性。将1... 目的:建立近场微波检测系统,并评价其测量含水量的准确性,观察不同方法干燥根管的效果。方法:构建近场微波反射检测系统,检测Eppendorf管中、离体牙根管内已知定量的蒸馏水并记录微波反射系数,评价近场微波系统测量含水量的准确性。将12颗牙根发育完全、根管弯曲度小于10°的单根管下颌前磨牙截冠后保留14 mm牙根,机械预备至F3后烘干,向根管内注入10μL蒸馏水,按照不同干燥方法分为4组(n=12),采用近场微波系统检测烘干后和干燥完成后含水量的变化,评价其干燥效果:(1)阴性对照组,根管内注入10μL蒸馏水,不采用任何干燥方法;(2)纸尖干燥实验组,用4根#60纸尖依次插入根管中上1/3至有阻力,再用#40纸尖插入根管内至工作长度,重复至立体显微镜下纸尖尖端无水痕视为干燥完成;(3)95%(体积分数)乙醇干燥实验组,使用纸尖干燥根管(干燥方法同纸尖实验组)后,向根管内注入10μL 95%乙醇,静置10 s后,再用纸尖干燥;(4)70%(体积分数)异丙醇干燥实验组,使用纸尖干燥根管(干燥方法同纸尖实验组)后,向根管内注入10μL 70%异丙醇,静置10 s后,再用纸尖干燥。采用线性回归分析比较近场微波法和物理测量法检测含水量的相关性,计算Pearson相关系数。采用卡方检验比较不同方法干燥根管的差异,并进行两两比较。结果:Eppendorf管及离体根管内含水量的近场微波反射系数和含水量的物理测量值呈线性关系,R 2分别为0.991和0.970。不同干燥方法的实验组之间的微波反射系数差异具有统计学意义(P<0.05)。纸尖干燥后根管内残余的含水量最多,微波反射系数最大,为0.023。70%异丙醇进行根管干燥,残余的含水量最少,微波反射系数为0.006,干燥效果最佳。结论:近场微波系统可以用来检测根管内含水量的变化,70%异丙醇干燥根管的效果优于95%乙醇和纸尖干燥法。 展开更多
关键词 根管充填 近场微波 水 双尖牙
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