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人重组核凋亡诱导因子1截短体在大肠杆菌中的表达及纯化
1
作者
韩普
莫晓宁
+3 位作者
钟丽君
杨彬
马大龙
娄雅欣
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期979-982,共4页
目的核凋亡诱导因子1(Nuclearapoptosis-inducingfactor1,NAIF1)是本实验室首次克隆和鉴定的新凋亡基因,为了通过Polldown实验研究其结合蛋白,在大肠杆菌中表达和纯化人重组NAIF1(73-327)的截短体。方法通过PCR方法扩增出NAIF1(73-327)c...
目的核凋亡诱导因子1(Nuclearapoptosis-inducingfactor1,NAIF1)是本实验室首次克隆和鉴定的新凋亡基因,为了通过Polldown实验研究其结合蛋白,在大肠杆菌中表达和纯化人重组NAIF1(73-327)的截短体。方法通过PCR方法扩增出NAIF1(73-327)cDNA,并插入pGEX-KG载体,实现插入基因的融合表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Westernblot和电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS)检测分析。结果DNA测序结果证实成功构建了重组融合表达质粒pGEX-KG-NAIF1(73-327),并在大肠杆菌中稳定表达,表达产物分子量约为53kD,与预期一致,表达量约占菌体总蛋白的22%,纯化蛋白经Westernblot和二级质谱(MS/MS)分析证明表达蛋白为GST-NAIF1(73-327)融合蛋白。结论获得了重组GST-NAIF1(73-327)融合蛋白的高效表达,为下阶段NAIF1的结构与功能研究打下了基础。
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关键词
核凋亡诱导因子1
重组蛋白
蛋白纯化
大肠杆菌
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题名
人重组核凋亡诱导因子1截短体在大肠杆菌中的表达及纯化
1
作者
韩普
莫晓宁
钟丽君
杨彬
马大龙
娄雅欣
机构
北京大学
人类疾病基因研究
中心
北京大学医药卫生分析中心蛋白质组
北京大学
医学部基础医学院免疫系
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期979-982,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30400397)
文摘
目的核凋亡诱导因子1(Nuclearapoptosis-inducingfactor1,NAIF1)是本实验室首次克隆和鉴定的新凋亡基因,为了通过Polldown实验研究其结合蛋白,在大肠杆菌中表达和纯化人重组NAIF1(73-327)的截短体。方法通过PCR方法扩增出NAIF1(73-327)cDNA,并插入pGEX-KG载体,实现插入基因的融合表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Westernblot和电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS)检测分析。结果DNA测序结果证实成功构建了重组融合表达质粒pGEX-KG-NAIF1(73-327),并在大肠杆菌中稳定表达,表达产物分子量约为53kD,与预期一致,表达量约占菌体总蛋白的22%,纯化蛋白经Westernblot和二级质谱(MS/MS)分析证明表达蛋白为GST-NAIF1(73-327)融合蛋白。结论获得了重组GST-NAIF1(73-327)融合蛋白的高效表达,为下阶段NAIF1的结构与功能研究打下了基础。
关键词
核凋亡诱导因子1
重组蛋白
蛋白纯化
大肠杆菌
Keywords
NAIF1
Recombinant protein
Protein purification
E.coli
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人重组核凋亡诱导因子1截短体在大肠杆菌中的表达及纯化
韩普
莫晓宁
钟丽君
杨彬
马大龙
娄雅欣
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
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