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NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用
被引量：
5
1
作者
史须
卜夏
+4 位作者
黄家强
熊平
徐勇
李卓娅
龚非力
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期651-655,共5页
为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影...
为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影响 .发现TNF α基因启动子区域的 3个NF κB结合位点的存在是该基因最大组成性表达和LPS诱导性表达所必需 ;将这 3个位点缺失可完全阻断报道基因的LPS诱导性表达 ,并使其组成性表达明显受到抑制 (P <0 .0 0 1) .缺失κB1和κB2位点 ,使基因组成性表达与LPS诱导性表达均减少约 50 % (P <0 .0 1) ,但诱导倍数则与非突变体相近 ;反之 ,用κB3反义寡核苷酸封闭κB3位点 ,保留κB1和κB2功能 ,使LPS诱导性基因表达抑制 70 % (P <0 .0 0 1) ,诱导倍数明显降低 .保留原有κB3位点 ,再将κB3位点取代κB1和κB2位点 ,可使基因组成性和诱导性表达几乎完全恢复 ;将κB3位点向TSS移近 (- 98→ - 52 ) ,取代Sp1位点 ,虽然κB1和κB2位点仍然缺失 ,但仅一个κB3位点即可使基因组成性和LPS诱导性表达恢复到 80 % .用反义寡核苷酸封闭这个κB3位点 ,不但可使TNF α启动子完全丧失对LPS的反应性 ,还可完全阻断所控基因的组成性表达 .结果表明 ,人TNF α启动子区域 3个NF κB位点均参与该?
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关键词
核因子ΚB
肿瘤坏死因子α
萤光素酶报道基因
内毒素
结合位点
转录
基因调控
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职称材料
人硫氧还蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及对内毒素血症小鼠的保护作用
被引量：
5
2
作者
曹丽
黄大无
+4 位作者
范慧
狄春辉
王应
陈建民
马大龙
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期733-736,共4页
为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现...
为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现 ,TRX蛋白可明显促进去细胞因子诱导的NFS 6 0细胞增殖和撤血清后MCF 7细胞的增殖 ,并发现外源性TRX可明显对小鼠内毒素血症起保护作用 .
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关键词
人硫氧还蛋白
大肠杆菌
高效表达
纯化
内毒素血症
小鼠
保护作用
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职称材料
题名
NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用
被引量：
5
1
作者
史须
卜夏
黄家强
熊平
徐勇
李卓娅
龚非力
机构
北京大学人类疾病基因组研究中心
同济医科
大学
免疫学教研室
北京大学人类疾病基因组研究中心
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期651-655,共5页
基金
国家自然科学基金重点项目 (No .3 96 3 0 3 2 0 )
湖北省自然科学基金项目 (No.94J0 83 )
文摘
为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影响 .发现TNF α基因启动子区域的 3个NF κB结合位点的存在是该基因最大组成性表达和LPS诱导性表达所必需 ;将这 3个位点缺失可完全阻断报道基因的LPS诱导性表达 ,并使其组成性表达明显受到抑制 (P <0 .0 0 1) .缺失κB1和κB2位点 ,使基因组成性表达与LPS诱导性表达均减少约 50 % (P <0 .0 1) ,但诱导倍数则与非突变体相近 ;反之 ,用κB3反义寡核苷酸封闭κB3位点 ,保留κB1和κB2功能 ,使LPS诱导性基因表达抑制 70 % (P <0 .0 0 1) ,诱导倍数明显降低 .保留原有κB3位点 ,再将κB3位点取代κB1和κB2位点 ,可使基因组成性和诱导性表达几乎完全恢复 ;将κB3位点向TSS移近 (- 98→ - 52 ) ,取代Sp1位点 ,虽然κB1和κB2位点仍然缺失 ,但仅一个κB3位点即可使基因组成性和LPS诱导性表达恢复到 80 % .用反义寡核苷酸封闭这个κB3位点 ,不但可使TNF α启动子完全丧失对LPS的反应性 ,还可完全阻断所控基因的组成性表达 .结果表明 ,人TNF α启动子区域 3个NF κB位点均参与该?
关键词
核因子ΚB
肿瘤坏死因子α
萤光素酶报道基因
内毒素
结合位点
转录
基因调控
Keywords
NF-κB,tumor necrosis factor-α,luciferase reporter gene,lipopolysaccharide
分类号
Q756 [生物学—分子生物学]
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
人硫氧还蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及对内毒素血症小鼠的保护作用
被引量：
5
2
作者
曹丽
黄大无
范慧
狄春辉
王应
陈建民
马大龙
机构
中国医学科学院中国协和医科
大学
药用植物
研究
所
北京大学人类疾病基因组研究中心
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期733-736,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划项目 (973 )基金 (No .G2 0 0 0 0 5 690 9)项目~~
文摘
为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现 ,TRX蛋白可明显促进去细胞因子诱导的NFS 6 0细胞增殖和撤血清后MCF 7细胞的增殖 ,并发现外源性TRX可明显对小鼠内毒素血症起保护作用 .
关键词
人硫氧还蛋白
大肠杆菌
高效表达
纯化
内毒素血症
小鼠
保护作用
Keywords
human thioredoxin, expression and purification, endotoxic shock
分类号
R631.4 [医药卫生—外科学]
R394. [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用
史须
卜夏
黄家强
熊平
徐勇
李卓娅
龚非力
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人硫氧还蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及对内毒素血症小鼠的保护作用
曹丽
黄大无
范慧
狄春辉
王应
陈建民
马大龙
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
5
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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