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层粘连蛋白特异性受体——整合素α6亚单位胞外区单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
1
1
作者
吕天敬
张青云
周柔丽
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期183-186,共4页
目的 :制备针对整合素α6胞外区的单克隆抗体并鉴定其生物学特异性。方法 :利用整合素α6cDNA构建可表达整合素α6胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达GST———整合素α6胞外区融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫Balb C小鼠 ...
目的 :制备针对整合素α6胞外区的单克隆抗体并鉴定其生物学特异性。方法 :利用整合素α6cDNA构建可表达整合素α6胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达GST———整合素α6胞外区融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫Balb C小鼠 ,取其脾细胞 ,用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛后 ,分析其亚类及进行免疫细胞化学鉴定。结果 :经ELISA双筛 ,获得了一株能稳定分泌针对整合素α6胞外区的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,其分泌抗体亚类为IgG1。免疫细胞化学显示此单抗在人肝癌细胞系BEL 74 0 2呈强阳性反应。结论 :通过原核表达产物制备并纯化了针对整合素α6胞外区的单克隆抗体 ,对分离纯化α6亚单位、研究其生物学作用及鉴定正常和疾病状态下是否表达整合素α6及其水平具有重要意义。
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关键词
整合素
层粘连蛋白受体
杂交瘤
单克隆抗体
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职称材料
多聚腺苷酸信号缺陷病毒捕获宿主序列导致细胞转化
2
作者
张青云
李振甫
+2 位作者
王利民
王雅明
徐建军
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期472-475,共4页
目的 :通过人工改变逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,检测病毒转录能否产生病毒 宿主融合转录产物及其是否具有转化细胞的能力 ,探讨病毒致癌的机制。方法 :用分子生物学技术人工定点突变鼠逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,使之产生多聚腺苷...
目的 :通过人工改变逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,检测病毒转录能否产生病毒 宿主融合转录产物及其是否具有转化细胞的能力 ,探讨病毒致癌的机制。方法 :用分子生物学技术人工定点突变鼠逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,使之产生多聚腺苷酸缺陷性病毒 ;用该病毒转染大鼠REF 1细胞 ,并用G418筛选抗性细胞。通过Northernblot方法检查通读RNA的表达 ;通过细胞形态和软琼脂集落形成实验检测细胞的转化。结果 :多聚腺苷酸化信号缺陷病毒PS可在CRIP包装细胞形成病毒 ;用该病毒感染大鼠REF 1细胞 ,可捕获下游宿主细胞序列 ;多聚腺苷酸化信号缺陷病毒感染的REF 1混合细胞中的部分细胞可使REF 1细胞集聚能力增强 ,在软琼脂中以集落式生长。结论 :多聚腺苷酸信号缺陷病毒感染REF 1细胞后可通过表达病毒 宿主通读RNA激活下游宿主序列使细胞发生转化 。
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关键词
逆转录病毒
多聚腺苷酸化信号
细胞转化
病毒
宿主细胞序列
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职称材料
半胱氨酸对原核表达的pS2融合蛋白复性的影响
3
作者
刘彩云
杨蔚
+1 位作者
孙素莲
丁桂凤
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期411-414,共4页
目的 :分析半胱氨酸对变性pS2融合蛋白复性的影响。方法 :经半胱氨酸处理与不处理的纯化pS2融合蛋白与抗 pS2多抗血清及进口 pS2单抗于 37℃孵育 1h后 ,再进行酶联免疫吸附试验 (ELISA)和免疫组织化学试验 (IHC)。此二种pS2融合蛋白经 1...
目的 :分析半胱氨酸对变性pS2融合蛋白复性的影响。方法 :经半胱氨酸处理与不处理的纯化pS2融合蛋白与抗 pS2多抗血清及进口 pS2单抗于 37℃孵育 1h后 ,再进行酶联免疫吸附试验 (ELISA)和免疫组织化学试验 (IHC)。此二种pS2融合蛋白经 15 % (质量比 )SDS PAGE后进行Westernblotting分析。 结果 :ELISA、IHC、Westernblotting结果显示 ,用半胱氨酸处理pS2融合蛋白后 ,其抗原性明显提高 ,提示 pS2融合蛋白经剧烈变性复性后 ,pS2三叶草结构域二硫键绝大部分发生错配而导致其抗原性丧失。 结论 :在变性
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关键词
pS2融合蛋白
半胱氨酸
药理学
原核细胞
重组融合蛋白质
乳腺癌
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职称材料
题名
层粘连蛋白特异性受体——整合素α6亚单位胞外区单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
1
1
作者
吕天敬
张青云
周柔丽
机构
北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所免疫室
北京大学
基础医
学院
医学细胞生物学系
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期183-186,共4页
基金
北京市自然科学基金 ( 70 2 2 0 0 6)
高等学校博士学科点专项科研基金资助
文摘
目的 :制备针对整合素α6胞外区的单克隆抗体并鉴定其生物学特异性。方法 :利用整合素α6cDNA构建可表达整合素α6胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达GST———整合素α6胞外区融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫Balb C小鼠 ,取其脾细胞 ,用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛后 ,分析其亚类及进行免疫细胞化学鉴定。结果 :经ELISA双筛 ,获得了一株能稳定分泌针对整合素α6胞外区的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,其分泌抗体亚类为IgG1。免疫细胞化学显示此单抗在人肝癌细胞系BEL 74 0 2呈强阳性反应。结论 :通过原核表达产物制备并纯化了针对整合素α6胞外区的单克隆抗体 ,对分离纯化α6亚单位、研究其生物学作用及鉴定正常和疾病状态下是否表达整合素α6及其水平具有重要意义。
关键词
整合素
层粘连蛋白受体
杂交瘤
单克隆抗体
Keywords
Integrin
Laminin receptor
Hybridoma
Monoclonal antibody
分类号
R813.2 [医药卫生—放射医学]
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职称材料
题名
多聚腺苷酸信号缺陷病毒捕获宿主序列导致细胞转化
2
作者
张青云
李振甫
王利民
王雅明
徐建军
机构
北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所免疫室
出处
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期472-475,共4页
基金
中华医学专项人才基金北京市科干局青年科技骨干培养基金资助~~
文摘
目的 :通过人工改变逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,检测病毒转录能否产生病毒 宿主融合转录产物及其是否具有转化细胞的能力 ,探讨病毒致癌的机制。方法 :用分子生物学技术人工定点突变鼠逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,使之产生多聚腺苷酸缺陷性病毒 ;用该病毒转染大鼠REF 1细胞 ,并用G418筛选抗性细胞。通过Northernblot方法检查通读RNA的表达 ;通过细胞形态和软琼脂集落形成实验检测细胞的转化。结果 :多聚腺苷酸化信号缺陷病毒PS可在CRIP包装细胞形成病毒 ;用该病毒感染大鼠REF 1细胞 ,可捕获下游宿主细胞序列 ;多聚腺苷酸化信号缺陷病毒感染的REF 1混合细胞中的部分细胞可使REF 1细胞集聚能力增强 ,在软琼脂中以集落式生长。结论 :多聚腺苷酸信号缺陷病毒感染REF 1细胞后可通过表达病毒 宿主通读RNA激活下游宿主序列使细胞发生转化 。
关键词
逆转录病毒
多聚腺苷酸化信号
细胞转化
病毒
宿主细胞序列
Keywords
Retrovirus
Polyadenylation signal
Cell transformation, viral
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
半胱氨酸对原核表达的pS2融合蛋白复性的影响
3
作者
刘彩云
杨蔚
孙素莲
丁桂凤
机构
北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所免疫室
北京大学
基础医
学院
免疫
学系
出处
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期411-414,共4页
基金
北京市科委 ( 95 330 410 4)资助~~
文摘
目的 :分析半胱氨酸对变性pS2融合蛋白复性的影响。方法 :经半胱氨酸处理与不处理的纯化pS2融合蛋白与抗 pS2多抗血清及进口 pS2单抗于 37℃孵育 1h后 ,再进行酶联免疫吸附试验 (ELISA)和免疫组织化学试验 (IHC)。此二种pS2融合蛋白经 15 % (质量比 )SDS PAGE后进行Westernblotting分析。 结果 :ELISA、IHC、Westernblotting结果显示 ,用半胱氨酸处理pS2融合蛋白后 ,其抗原性明显提高 ,提示 pS2融合蛋白经剧烈变性复性后 ,pS2三叶草结构域二硫键绝大部分发生错配而导致其抗原性丧失。 结论 :在变性
关键词
pS2融合蛋白
半胱氨酸
药理学
原核细胞
重组融合蛋白质
乳腺癌
Keywords
pS2 fusion protein
Cysteine/pharmacol
Prokaryotic cells
Recombinant fusion
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
层粘连蛋白特异性受体——整合素α6亚单位胞外区单克隆抗体的制备及鉴定
吕天敬
张青云
周柔丽
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
多聚腺苷酸信号缺陷病毒捕获宿主序列导致细胞转化
张青云
李振甫
王利民
王雅明
徐建军
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
半胱氨酸对原核表达的pS2融合蛋白复性的影响
刘彩云
杨蔚
孙素莲
丁桂凤
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001
0
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职称材料
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